Preparar a amostra para cultura de perfusão utilizando biorreator impresso em 3D. Em uma cabine de fluxo laminar, colocar as amostras isoladas da artéria carótida porcina em meios de transporte frios. Usando uma lâmina de bisturi, remova o excesso de tecido conjuntivo e corte as extremidades do tecido.
Em seguida, lave o tecido duas vezes em meios de transporte a frio. Em seguida, coloque o tecido em meio de transporte em um agitador orbital por um mínimo de 30 minutos para uma lavagem final completa. Depois disso, conecte um segmento não ramificado da artéria lavada ao sistema de biorreator fabricado usando duas conexões de isca farpada.
E fixá-lo usando uma ligação de vaso feita de laços vasculares de silicone. Usando uma pequena seringa conectada à primeira conexão de isca, flua suavemente o meio através da artéria para garantir sua patência. Após fixar a artéria ao inserto fabricado, preencha o espaço de reação com meios de perfusão.
Em seguida, preencha cuidadosamente o circuito de circulação luminal com mídia, removendo qualquer ar restante do sistema. Por fim, conecte o espaço de reação ao sistema de perfusão montado, completando a circulação. Para realizar a cultura de perfusão, colocar o sistema de perfusão em uma incubadora.
Depois de conectá-lo a uma bomba peristáltica, conecte quaisquer sistemas de aquisição adicionais, como sensores de pressão. Permita que o sistema se equilibre durante a noite com uma baixa taxa de fluxo de mídia de aproximadamente 10 a 15 mililitros por minuto. No dia seguinte, aumente incrementalmente o fluxo até atingir um fluxo final de 35 mililitros por minuto.
A cada três dias, substitua 50% do meio conectando uma seringa com mídia fresca à porta de troca de mídia mais próxima da bomba e uma seringa vazia à porta mais próxima do reservatório para coletar o meio gasto. Após o experimento, com tesoura cirúrgica estéril, retirar o tecido da câmara de reação aparando as extremidades teciduais conectadas ao biorreator. Imagens confocais usando marcadores endoteliais e músculo liso específicos revelaram que a estrutura normal de uma artéria foi bem preservada e mantida durante todo o tempo, desde o momento da colheita, limpeza e processamento, e mesmo após a cultura de perfusão.
No entanto, o manuseio incorreto durante o processamento resultou na perda do endotélio antes da cultura, e a aplicação de condições não fisiológicas da cultura, como o início abrupto de alto fluxo, mostrou dano luminal. A avaliação histológica do tecido pela coloração de hematoxilina e eosina e pela imunofluorescência no momento da coleta e após sete dias de cultura de perfusão revelou que a morfologia e a distribuição global das células na parede do vaso foram mantidas por toda parte.
