Comece administrando 0,3 miligramas por mililitro de buprenorfina por via subcutânea ao rato anestesiado. Monte o rato na estrutura estereotáxica. Em seguida, use uma navalha para raspar o pelo da cabeça.
Desinfetar a pele com três rodadas alternadas de iodopovidona a 10% e álcool, usando cotonetes estéreis, esfregando em direções diferentes por três a cinco segundos cada vez. Aplique pomada ocular para evitar o ressecamento. Agora, faça uma incisão de dois centímetros ao longo da linha média da cabeça usando um bisturi estéril e, em seguida, limpe o crânio meticulosamente usando cotonetes estéreis e soro fisiológico.
Identifique o bregma usando uma agulha de seringa Hamilton de 10 microlitros montada no dispositivo estereotáxico e coloque-a como 00. Movimente as coordenadas anteroposterior e lateral do dispositivo. Crie um furo de rebarba de um milímetro usando uma broca dental.
Coloque quatro microlitros do coquetel de liberação na seringa Hamilton de 10 microlitros e, em seguida, abaixe cuidadosamente a agulha com uma borda romba ou cônica para entrar em contato com a dura-máter. Insira a agulha na profundidade desejada de 3,5 milímetros. Infundir dois microlitros do cocktail de libertação a uma taxa de um microlitro por minuto.
Deixe a agulha no lugar por mais dois minutos e, em seguida, recupere-a lentamente para evitar o surgimento do coquetel de liberação. Sutura da incisão com náilon 5/0 e limpeza da área suturada com antisséptico. Em seguida, transfira o animal para a área de monitoramento pós-operação.
A injeção de mais de três microlitros do coquetel de liberação levou a lesões mecânicas inespecíficas. A injeção de dois microlitros do coquetel levou ao surgimento de clusters imunopositivos de doublecortin que eram visíveis mesmo após oito meses. A imunomarcação cerebral revelou locais de desnudamento na camada ependimária, próximos apenas ao nível das injeções.
Um declínio gradual nas perturbações da camada ependimária foi observado nas áreas mais posteriores e anteriores da zona subependimária.
