Para começar, faça um ciclo de inoculação para escolher uma colônia monoclonal de candida albicans de uma placa YPD. Transfira a colônia para cinco mililitros de meio líquido YPD, suplementado com 50 microgramas por mililitro de carbenicilina. Agite as células a uma velocidade constante de 220 RPM a 30 graus Celsius durante a noite.
Em seguida, centrifugar a suspensão celular a 400g por cinco minutos à temperatura ambiente. Após o descarte do sobrenadante, ressuspenda as células em solução salina normal e ajuste a concentração celular combinando a turbidez da suspensão celular com um padrão de McFarland de 0,5. Para criar 0,9% de solução salina normal, pese 0,9 gramas de cloreto de sódio e dissolva-o em 100 mililitros de água deionizada.
Em seguida, autoclave os instrumentais cirúrgicos em fio de liga de titânio e níquel a 121 graus Celsius por 30 minutos antes do uso. Em seguida, divida aleatoriamente 30 camundongos C57BL/6 machos em grupo controle de implante branco e grupo PJI. Depois de anestesiar os ratos, remova os pelos do membro posterior esquerdo e use iodo para desinfetar a área raspada.
Verificar a profundidade da anestesia observando a perda do reflexo de retificação. Para os ratinhos do grupo de controlo, não administrar qualquer tratamento. Para os ratos no grupo de implante em branco e PJI, use uma lâmina número 10 para criar uma incisão longitudinal de cinco milímetros no joelho do membro posterior esquerdo para expor as articulações para procedimentos adicionais.
Agora, insira uma agulha de seringa estéril para criar um orifício de cinco milímetros de comprimento no canal intramedular femoral. Insira cuidadosamente um fio de liga de níquel titânio no orifício antes de cortá-lo com tesoura. Em seguida, administrar dois microlitros de meio YPD gota a gota ao longo do fio de liga de níquel titânio para os camundongos no grupo de implante em branco.
Usando uma sutura de nylon, feche a ferida camada por camada. Em seguida, inocular dois microlitros de células de candida albicans no espaço articular de camundongos ao longo do fio de liga de níquel-titânio no grupo PJI. Usando uma sutura de nylon, feche a ferida camada por camada.
Acomode os ratos com acesso gratuito a água e comida por 14 dias.
