Preservação de células-tronco embrionárias humanas derivadas de células epiteliais pigmentares da retina com criopreservação otimizada

Observe que todas as traduções são geradas por IA. Clique aqui para consultar a versão em inglês.

40 Views

•

02:51 min

•

November 3rd, 2023

DOI :

10.3791/200824-v

November 3rd, 2023

•

Xinyue Bai*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Ting Zhang*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xinyue Zhu¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xianyu Huang¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Haiyun Liu¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xiaoyan Ding⁸, Mei Jiang¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xiaodong Sun¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷

¹Department of Ophthalmology, Shanghai General Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, ²National Clinical Research Center for Eye Diseases, ³Shanghai Clinical Research Center for Eye Diseases, ⁴Shanghai Key Clinical Specialty, ⁵Shanghai Key Laboratory of Ocular Fundus Diseases, ⁶Shanghai Engineering Center for Visual Science and Photomedicine, ⁷Shanghai Engineering Center for Precise Diagnosis and Treatment of Eye Diseases, ⁸Stem Cell Core Facility, CAS Center for Excellence in Molecular Cell Science, Chinese Academy of Sciences

* Estes autores contribuíram igualmente

Transcrição

Para começar, dissocie as células epiteliais pigmentares da retina derivadas de hESC, prepare a suspensão celular e, em seguida, conte as células. Agora, centrifugue as células a 250g por três minutos em temperatura ambiente. Despeje o sobrenadante e, em seguida, ressuspenda o pellet celular em meio de criopreservação.

Em seguida, transfira um mililitro da suspensão celular para um frasco criogênico de 1,2 mililitro. Coloque os frascos criogênicos em um recipiente de congelamento e congele durante a noite a menos 80 graus Celsius. Transfira os frascos para nitrogênio líquido para armazenamento a longo prazo.

Para descongelar os frascos congelados, primeiro aqueça o meio de cultura em esferas metálicas aquecidas a 37 graus Celsius, pré-encha 10 mililitros do meio de cultura aquecido em um tubo de 15 mililitros. Agora, remova os frascos criogênicos do nitrogênio líquido e coloque-os em um sistema de descongelamento automatizado para descongelamento rápido. Coloque 0,5 a um mililitro do meio de cultura pré-aquecido no frasco criogênico para garantir a adaptação gradual das células.

Em seguida, pipete 1,5 a dois mililitros da suspensão celular para o tubo de 15 mililitros com meio. Centrifugue as células a 250g por três minutos em temperatura ambiente. Em seguida, descarte o sobrenadante.

Ressuspenda o pellet em dois mililitros de meio quente. Carregue as células em um hemocitômetro e conte-as para determinar as taxas de recuperação e sobrevivência. Cultive as células descongeladas em placas revestidas com membrana basal em meio de cultura com Y27632.

As células epiteliais pigmentares da retina que foram congeladas no quinto dia em sua fase exponencial exibiram uma taxa de fixação mais alta após o descongelamento. Em relação à sua morfologia hexagonal característica, as células congeladas em outros momentos tinham um fenótipo fibroblástico. As células P2 do quinto dia exibiram maior expressão e marcadores celulares mais adequadamente localizados 28 dias após o descongelamento.

Observou-se que diferentes meios de criopreservação tiveram um desempenho igualmente bom na obtenção de alta viabilidade celular e fixação pós-descongelamento.

Explore mais vídeos

Human Embryonic Stem Cells

Retinal Pigment Epithelial Cells

Fibroblastic Phenotype

Cryopreservation Media

Da série

Avanço do crioarmazenamento de células epiteliais pigmentares da retina derivadas de células-tronco humanas

01:09

Autor em destaque: Desenvolvimento de um método eficiente e viável de congelamento de células epiteliais pigmentares da retina

Nesta série

477 Views

03:06

Dissociação de células epiteliais pigmentares da retina derivadas de células-tronco embrionárias humanas e determinação ideal do estágio de criopreservação

Nesta série

56 Views

02:51

Preservação de células-tronco embrionárias humanas derivadas de células epiteliais pigmentares da retina com criopreservação otimizada

Nesta série

40 Views