Para começar, coloque a lâmina contendo as fatias de sementes depositadas na matriz no espectrômetro de massa. Carregue a imagem de amostra e use marcas de caneta de correção para definir pontos de ensino no software referenciado. Em seguida, defina o fator de redução de dados de 99%, salve o arquivo FID para a calibração de dados posterior e salve o método.
Delimitar a área a ser analisada usando a ferramenta adicionar região de medição de polígono do software espectrômetro de massa. Defina a largura do raster para 100 micrômetros. Edite os parâmetros da região de medição que indicam o método salvo e salve a execução da imagem.
Em seguida, inicie a aquisição de imagens. Use o cluster de matriz e contaminantes conhecidos para criar uma lista de massa no software na guia calibrador. Em seguida, na guia de calibração, abra a lista de massa criada.
Clique com o botão direito do mouse para abrir uma caixa de diálogo e escolha a opção definir massas de bloqueio. Selecione o modo de janela Gaussiano com ampliação Gaussiana 0,5 e ampliação de linha 3,5. Deixe a calibração on-line desmarcada.
Defina o modo como único, limite para 1000 e tolerância de massa para cinco PPM. Calibre os dados com o processo e salve uma ferramenta de conjunto de dados serial 2D. Após a calibração, abra o arquivo MIS ponto para um software compatível e altere a normalização de nenhuma norma para RMS ou TIC.
Clique na guia de edição e selecione filtragem de massa automática. Preencha a massa inicial e a massa final com o número mínimo e máximo de Dalton no seu limite de interesse e clique no ícone ok. Selecione o pico de interesse destacado na lista filtrada, gerado com o número correspondente ao valor de massa de interesse em Dalton.
Altere a porcentagem para visualizar melhor a área interessada. Clique na barra de escala de intensidade e nos ícones do mapa colorido. Clique na área da imagem e arraste o mouse para posicionar a área de interesse.
Altere a porcentagem de transparência para produzir uma imagem de sinal mesclada com a imagem da seção de varredura como plano de fundo. Se os analitos a serem mapeados forem conhecidos, plote cada valor M por Z para cada analito e salve as imagens geradas e o gráfico de média espectral. O espectro de massa do tecido de sementes de Euterpe precatoria e Euterpe edulis obtido por MALDI IMS em modo positivo é mostrado aqui.
Esta análise IMS MALDI de sementes de E. precatoria exibiu picos representando adutos de oligômeros de hexoses sem adição de sal à matriz. Dímeros de hexoses, trímeros, tetrâmeros, pentâmeros, hexâmeros e até 14 oligômeros unitários foram identificados. Os mesmos resultados também foram obtidos para o tecido da semente de E. edulis.
Os box plots para ambas as amostras indicam o pico de intensidade de cada oligômero da hexose, encontrado no endosperma das sementes, demonstrando suas distribuições, e um teor um pouco maior de alto grau de polimerização dos oligômeros.
