Para começar, inicie o software de captura de imagem do microscópio. Calcule o número de peças necessárias para cobrir todo o coração do rato. Capture as imagens do coração a partir do primeiro bloco.
Capture sequencialmente imagens dos blocos restantes com uma sobreposição de 10% entre blocos consecutivos até que todo o coração esteja coberto. Agora, abra o plug-in BigStitcher e importe todos os blocos necessários por meio do diretório do arquivo de imagem. Salve o conjunto de dados como um arquivo HDF5.
Use a função mover bloco pela grade regular para organizar os blocos. Em seguida, selecione o padrão usado para mover o coração e selecione uma sobreposição de 10% entre cada peça. Costure os ladrilhos usando a opção do assistente de costura.
Crie um arquivo TIFF usando a fusão de imagens para exportar os dados compilados. Para a deconvolução de várias visualizações da amostra. Use contas fluorescentes para registro de imagem de reconstrução multi-view ao longo do coração.
Digitalize o conjunto do coração no eixo de detecção para capturar imagens sequenciais do coração do camundongo a partir da seção iluminada. Gire o coração do mouse em 60 graus ao longo do eixo Y para capturar pilhas subsequentes de vários ângulos. Em seguida, abra o plug-in BigStitcher e importe todas as imagens por meio do diretório do arquivo de imagem.
Salve o conjunto de dados como um arquivo HDF5. Escolha Detectar pontos de interesse e selecione manualmente os grânulos de interesse para registro. Selecione o modelo de transformação fina para registro e atribua PSF a todas as exibições.
Clique em Deconvolução de várias visualizações e escolha o tipo de iteração como Bayesiano eficiente. Defina o número de iterações como 10 e execute-o. Por fim, clique em fusão de imagens para exportar um arquivo TIFF.
O método de deconvolução multi-view alcançou resolução quase isotrópica após 15 horas de computação. A microscopia de folha de luz varrida axilar baseada em ETL foi capaz de minimizar o fundo fora de foco e melhorar o contraste da imagem. A integração da costura com a microscopia de folha de luz varrida axialmente permitiu a cobertura de um coração de camundongo inteiro de oito semanas com resolução uniforme.
