Para começar, adicione dois mililitros de tampão de digestão a um frasco de transporte de cinco mililitros contendo o tecido cardíaco do camundongo e quatro mililitros de tampão de digestão em um tubo de centrífuga de 15 mililitros contendo o tecido esquelético do camundongo. Coloque o tecido muscular do coração e do quadríceps isolado de um camundongo espinhoso na tampa de uma placa de Petri. Com uma tesoura de tecido, pique-a em pedaços menores que um milímetro cúbico.
Transfira o tecido picado para os respectivos tubos de digestão. Vortex o conteúdo dos tubos por dois segundos em baixa velocidade. Após 20 minutos, remova os tubos do rotador.
Deixe os pedaços de tecido assentarem. Use uma pipeta P 1000 para aspirar o sobrenadante. Transfira o sobrenadante para tubos de centrífuga de 50 mililitros contendo 20 mililitros de tampão FACS gelado.
Encha os tubos de digestão com os respectivos volumes de tampão de digestão. Incube-os no rotador novamente. Depois de submeter os músculos a outra rodada de digestão, adicione um tampão FACS gelado para saciar a digestão.
Coloque um filtro de células de 40 micrômetros em cima de um tubo de centrífuga de 50 mililitros. Filtrar a suspensão de digestão e supinar através do coador. Centrifugar a suspensão celular a 500 G durante oito minutos a quatro graus Celsius.
Depois de remover o sobrenadante, adicione três mililitros de tampão de lise ACK ao pellet e ressuspenda. Incube a suspensão por cinco minutos no gelo. Complete o volume para 40 mililitros com buffer FACS.
Centrifugar novamente as amostras a 500 g durante cinco minutos a quatro graus Celsius. Após a decantação, o sobrenadante ressuspende o pellet em 0,5 mililitros de tampão FACS. Por fim, filtre a suspensão através de uma tampa de filtro de célula de 40 micrômetros, colocada em um tubo inferior redondo de poliestireno de cinco mililitros.
