Aquisição de imagem após imunocoloração multiplex para distinguir subtipos de células uNK em tecidos endometriais

Para começar, core as seções de tecido endometrial montadas com os anticorpos desejados. Ligue o gerador de imagens e selecione os fluoróforos apropriados com base nos corantes TSA. Concentre-se manualmente em uma área do slide que mostre uma exposição razoável de cada marcador e use o recurso de exposição automática para definir o tempo de exposição para esse fluoróforo.

Para garantir uma amostragem imparcial, selecione aleatoriamente a área inicial para aquisição de imagem com foco na borda epitelial luminal. Depois de capturar o campo inicial, mova um campo para a esquerda ou para a direita para selecionar as áreas subsequentes, pulando um campo entre cada imagem capturada. Mantenha a borda epitelial luminal dentro do quadro para capturar pelo menos cinco áreas diferentes para incluir cerca de 10.000 células estromais.

A coloração monoplex e multiplex TSA revelou uma clara colocalização de marcadores de células NK, permitindo a identificação de populações distintas de células NK. A estratégia multiplex usou corantes fluorescentes com comprimentos de onda distantes para evitar sobreposição espectral e garantir um fundo claro, confirmando a especificidade do sinal.