Para começar, obtenha mosquitos esterilizados na superfície em um tubo de 1,5 mililitro contendo PBS. Transfira um mosquito limpo para uma gota de PBS 1X estéril colocada na lâmina do microscópio. Usando uma pinça, segure o tórax do mosquito para evitar que ele se mova.
Em seguida, coloque uma agulha no pescoço logo abaixo da cabeça e puxe suavemente a cabeça do mosquito para separá-lo do tórax. Usando uma agulha, corte as glândulas salivares ao nível do ducto salivar. Recupere as glândulas com a agulha e coloque-as em uma nova gota de PBS para enxaguar.
Em seguida, empregando uma agulha, recupere as glândulas salivares. Coloque o mosquito de costas para começar a dissecar os ovários. Usando uma pinça, segure o mosquito pelo tórax para evitar o movimento e perfure o terceiro segmento abdominal, começando de baixo, com uma agulha.
Ao perfurar o terceiro segmento abdominal, puxe o abdômen para baixo para abri-lo e revelar os órgãos internos. Remova todos os pedaços restantes do exoesqueleto do mosquito para facilitar a liberação do órgão. Recupere os dois ovários com pinças esterilizadas e coloque-os em uma nova gota de PBS estéril na lâmina do microscópio para enxaguar.
Transfira os ovários lavados para um tubo de 1,5 mililitro contendo 100 microlitros de tampão de preservação. Em seguida, usando uma agulha estéril, separe o intestino médio do intestino anterior e do intestino posterior. Remova os túbulos de Malpighi do intestino médio e coloque o intestino médio em uma nova gota de PBS estéril para enxaguá-lo e evitar contaminação.
Em seguida, transfira o intestino médio para outra gota de PBS estéril. Com uma pinça, abra o intestino médio para liberar bactérias. Pipete todas as bactérias contendo PBS e o tecido do intestino médio em um novo tubo esterilizado de 1,5 mililitro contendo 100 microlitros de tampão de preservação.
Adicione cinco microlitros de PBS na mesma área da lâmina do microscópio onde o intestino médio foi colocado anteriormente. Pipete o PBS de volta para o mesmo tubo de 1,5 mililitro para recuperar qualquer bactéria que possa ter grudado na lâmina. Finalmente, use uma pinça estéril para agarrar a carcaça do mosquito e armazene-a em um tubo esterilizado de 1,5 mililitro contendo 100 microlitros de tampão de preservação.
