Para começar, usando um conta-gotas, coloque 250 sementes de Arabidopsis para cada grupo de condições em papel de filtro colocado em uma placa de ágar Murashige e Skoog Basal Media sem sacarose, suplementada com 1,2% de ágar fito. Enrole a placa com papel alumínio para bloquear a luz e coloque-a em uma incubadora a quatro graus Celsius por dois dias para induzir a vernalização. Após dois dias, desembrulhe o papel alumínio e transfira as sementes vernalizadas para uma câmara de crescimento.
Deixe as plantas crescerem por cinco dias. Em seguida, sele a placa contendo mudas de cinco dias com fita adesiva à prova d'água. Coloque o prato em banho-maria a 40 graus Celsius por uma hora para tratamento de estresse térmico.
Imediatamente após o tratamento térmico, resfrie a placa e transfira-a para uma câmara de crescimento ajustada a 22 graus Celsius por duas horas para permitir a recuperação. Colha 250 mudas tratadas termicamente ou não em tubos de microcentrífuga de 1,5 mililitro. Congelar imediatamente as amostras recolhidas em azoto líquido.
Prepare a solução de gradiente de sacarose com concentrações de 12,5%24,4%36,3%48,1%e 60%Para preparar um gradiente de densidade de sacarose descontínuo, primeiro carregue 2,2 mililitros de solução de sacarose a 60% no fundo do tubo. Em seguida, coloque o tubo em um freezer a 80 graus Celsius para congelar a solução de sacarose no estado sólido. Após a solidificação, carregue 2,2 mililitros de cada uma das outras concentrações de sacarose na série de baixo para cima.
Armazene o gradiente de sacarose preparado a 80 graus Celsius até o uso.