Este protocolo foi aprovado pelo Institutional Animal Care e Use Committee (IACUC) da Universidade da Flórida e está em conformidade com o &quot;Princípio do Laboratório Animal Care&quot; (NIH Publication No. 86-23, revisado em 1985). 1. Materiais <ol><li> Animais: Camundongos machos C57BL / 6 (Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, EUA) pesando 20-26 gramas no momento da cirurgia. </li><li> Anestesia: <ol><li> Aparelho de anestesia: VetEquip sistema de anestesia inalatória (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, EUA). </li><li> Anestésicos inalatórios: O isoflurano (Farmacêutica Baxter, Deerfield, IL). </li></ol></li><li> Instrumentos cirúrgicos: uma tesoura SuperCut Iris, em linha reta (Instrumentos de Precisão World, Inc., Sarasota, FL, EUA); Vannas micro-tesouras, em linha reta (Instrumentos de Precisão World, Inc., Sarasota, FL, EUA); Dumont fórceps (ponta fina, 45 ° dicas dobrados, instrumentos de precisão World, Inc., Sarasota, FL, EUA); Bipolar unidade de coagulação (Exsicador High Frequency 900, Instrumentos de Precisão World, Inc., Sarasota, FL, EUA); clipe navio micro (Instrumentos de Precisão Mundial, Inc., Sarasota, FL, EUA) </li><li> Materiais cirúrgicos: estéreis dicas de algodão; Wipes; esponjas de gaze; sutura (7-0 sutura de seda, Ethicon, Inc., Somerville, NJ, EUA); adesivo tecidual (Vetbond, a 3M Company, St Paul, MN, EUA); matagal Cirúrgica : Bethadine, etanol 70%, e estéril 0,9%; pomada Eye (Puralube Pomada Vet, Pharmaderm, Melville, NY, EUA). </li><li> Oclusão de sutura preparação para MCAO: <ol><li> Incandescência para MCA oclusão: 7-0 sutura cirúrgica de monofilamento de nylon (Ethicon, Inc., Somerville, NJ, EUA). </li><li> Fonte de calor para embotamento da ponta de sutura (Unidade Térmica Cauterização, World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL). </li><li> Borracha de silicone líquido (silicone RTV adesiva, de precisão Mundial Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA). </li></ol></li><li> Cirúrgica / Dissecting microscópio (Leica Microscópio estéreo MZ6). <ol><li> Iluminador de fibra ótica (iluminador de fibra óptica Fo1-150, TechniQuip Corp, Livermore, CA, EUA). </li></ol></li><li> Laser doppler fluxometria (PeriFlux System 5000, Perimed, Estocolmo, Suécia). <ol><li> MICROTIP flexível (MT MICROTIP B500-0 Straight, Perimed, Estocolmo, Suécia) </li></ol></li><li> Parâmetros de temperatura: <ol><li> Monitorar a temperatura retal (BAT-12, instrumentos de precisão World, Inc., Sarasota, FL). </li><li> Cobertor térmico (T / PUMP, TP600, Gaymar, NY, EUA). </li></ol></li><li> Coloração e medição quantitativa de infarto volume: <ol><li> 2% solução de cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (2% TTC, Sigma-Aldrich Co., St Louis, MO, EUA). </li><li> Camundongos cérebro matriz slicer (Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, EUA). </li><li> Câmera digital (V1253, a Kodak Co., Rochester, NY, EUA). </li><li> Imagem J software (software ImageJ 1.42q, EUA National Institutes of Health, Bethesda, MA, EUA). </li></ol></li></ol> 2. Pré-cirúrgica passos <ol><li> Antes da cirurgia, os ratos estão alojados sob um ciclo claro / escuro 12:12 com livre acesso à água e para roedores. </li><li> Suturas para MCAO são preparados por embotamento 1-2mm da ponta de sutura com o calor e revestimento 3-4mm de eixo de sutura de sua ponta com borracha de silicone líquido, permitindo-o secar (7-0; ponta de diâmetro, 0,20-0,25 milímetros; revestimento comprimento, 3-4mm; sutura comprimento 11-13mm). Esterilidade deve ser preservado em todas as etapas acima mencionadas. </li><li> Após a pesagem do mouse, a anestesia é induzida com 4% de isoflurano em uma câmara de indução e mantida durante o procedimento com 1,5-2% isoflurano em 30% O 2 e 70% N 2 O mistura de gás através de uma máscara. </li><li> O mouse é colocado em uma posição de bruços em uma gaze deitado sobre uma superfície de operação com temperatura controlada (manta térmica); a pele da cabeça é raspada. </li><li> Pomada oftálmica lubrificante é aplicado a ambos os olhos, e as pálpebras estão fechadas para evitar a dessecação dos olhos durante o processo cirúrgico. </li><li> A incisão mediana (1 cm) é feita sobre a pele que recobre a calvária da linha nucal superior ao násio ea pele é puxada lateralmente para afixar um MICROTIP flexível (MT B500-0 MICROTIP reta, diâmetro de 0,5 mm). O MICROTIP é colocado perpendicular à superfície do crânio parietal direita (1 mm e 5 mm posterior ao bregma laterais) para monitorar o fluxo de sangue no território MCA fluxometria por laser doppler. </li><li> Certifique-se que o MICROTIP flexível é ligado ao crânio firmemente antes de o animal está ligado a uma posição supina. Pescoço do animal é colocada sobre uma almofada macia e seu nariz é mantido no cone do nariz do aparelho anestésico. Isto irá resultar em ter espaço suficiente para o MICROTIP flexível. </li><li> Uma sonda de temperatura rectal é inserida para manter uma temperatura central constante de animais de 37 ± 0,5 ° C. </li><li> Ambas as patas dianteiras e patas traseiras são gravadas para a superfície da plataforma operacional, ea cauda é colado o tubo retal. </li> &lt;/ Ol&gt; 3. MCA cirurgia de oclusão: <ol><li> Sob o microscópio cirúrgico, uma incisão é feita na linha média do pescoço com uma tesoura entre o manúbrio e da mandíbula suavemente levantando a pele solta. </li><li> A par subjacente glândulas submandibular são francamente dividida, com a glândula esquerda esquerda in situ. A glândula submandibular direita é retraída cranialmente e garantiu junto com o músculo esternocleidomastóideo. </li><li> A divisão exposta do músculo omo-hióideo cobrindo a bainha carotídea é cuidadosamente dividido com pickups. </li><li> A artéria carótida comum direita (CCA) é cuidadosamente separado e isolado do nervo vago e sua bainha (localizado lateralmente ao CCA). </li><li> Daqui por diante, os 2 métodos cirúrgicos que têm sido usados ​​com freqüência para realizar MCA oclusão diverge: </li></ol> Método de Koizumi 4 <ol class="lroman" type="i"><li> Três pontos gola solta (7-0 seda) são preparados em todo o CCA direita. </li><li> A artéria carótida externa (ACE) é identificado, isolado, e cauterizados (2-3mm distal a bifurcação). Ela pode posteriormente ser dividido com micro-tesoura. Para evitar danos acidentais periféricos no local de cauterização, o poder deve ser fixado em 1 usando o botão de energia. Isto é consistente para todos os cauterizações. </li><li> Tensão suficiente é aplicada para a sutura de colarinho mais proximal sobre o CCA para oclusão do fluxo sanguíneo (ligadura permanente). A oclusão do fluxo é verificado por uma queda de ~ 50% dos valores basais cortical perfusão. </li><li> Em seguida, um clipe de navio é colocado logo antes da bifurcação CCA para evitar fluxo retrógrado no momento da arteriotomia. </li><li> Uma arteriotomia é executada entre a sutura proximal ligada e o clipe de navio no CCA com micro-tesoura (mais perto de ligadura). </li><li> O calor blunted silicone revestido de sutura nylon 7-0 é introduzido através da arteriotomia e avançado até alcançar o clipe de navio. Os restantes 2 suturas colarinho soltos são gentilmente apertado ao redor do CCA entre o arteriotomia eo clipe de navio para evitar a volta de fuga através do fluxo CCA, com cuidado para não traumatizar a parede arterial, em seguida, o clipe de embarcação é retirada. </li></ol> Longa método de 3 <ol class="lalpha" type="a"><li> O ECA é identificado, dissecado tanto quanto possível (perto de sua bifurcação em artérias lingual e maxilar), cauterização (com poder de definir a 1), e dividiu com micro-tesoura. </li><li> Duas suturas gola solta (7-0 seda) são preparados em todo o ICA proximal um pouco acima da bifurcação CCA. </li><li> O CCA está temporariamente fechada com um clipe navio. A oclusão do fluxo é verificado por uma queda de ~ 50% dos valores basais cortical perfusão. </li><li> Em seguida, o ICA está temporariamente fechada com um clipe embarcação acima as duas suturas soltas colar para evitar fluxo retrógrado no momento da arteriotomia. </li><li> Uma arteriotomia é executada usando micro-tesoura na próxima ECA refletida para o coto. </li><li> O calor blunted silicone revestido de sutura nylon 7-0 é introduzido através da arteriotomia no ECA e avançado até alcançar o clipe de navio aplicada no ICA. Os 2 suturas gola solta no ICA proximal são gentilmente apertado ao redor da ACI proximal para evitar o fluxo de sangue através de refluxo ICA, com bastante atenção para não traumatizar a parede arterial, em seguida, o clipe de embarcação é retirada. </li></ol> O restante do procedimento é em grande parte convergentes: <ol><li> A sutura oclusão está lentamente avançado através da artéria carótida interna (ACI) em direção à base do crânio até uma resistência moderada é sentida. A queda simultânea no valor do fluxo sanguíneo cerebral como uma porcentagem (= 80%) em relação à linha de base é confirmada por laser doppler fluxometria. Os 2 suturas são apertadas colar ao redor do filamento inserido. </li><li> Para experimentos isquemia cerebral transitória, a sutura oclusão é retirado delicadamente após 45 minutos. Neste ponto o tempo pode ser alterado para vários objetivos experimentais. </li><li> Depois de retirar o filamento de sutura, o site arteriotomia é fechada para evitar sangramento pós-cirúrgico. No método de Koizumi, isso envolve firmemente apertando as suturas colar em volta do CCA. Na técnica de Longa, o site arteriotomia na base do ECA é cauterizada, então as suturas colar no ICA proximal são afrouxados e removido para restaurar o fluxo de carótida. </li><li> Para fechar a incisão, a glândula submandibular e SCM são colocados sobre o campo operatório. As bordas da ferida são então aproximados com adesivo em tecido cervical e áreas do couro cabeludo. Alternativamente, um grampo de sutura absorvíveis ou metal poderiam ser usados ​​para fechar a ferida, especialmente quando sobrevivência a longo prazo do animal se destina. </li><li> Após o encerramento da incisão, o animal recebe uma solução salina morna ml por via subcutânea, reposição de volume. Uma dose de analgésicos apropriados (ie Buprenorfina em 0,05-0,1 mg / kg) devem ser utilizados para minimizar a dor animal e desconforto durante o período de recuperação. A animal é removido da sala de cirurgia e colocado em uma gaiola de recuperação da área quente / para evitar a hipotermia, com acesso fácil e gratuito a uma alimentação suave e água. </li></ol> 4. Pós-Op avaliação neurológica Depois que o animal recupere a consciência total, déficits neurológicos podem ser avaliados por uma escala simples (cinco vírgula escala) da seguinte 3: <ol start="0"><li> déficits não observáveis </li><li> não-prorrogação forepaw contralateral (déficit neurológico leve focal) </li><li> circulando em uma direção contralateral ao infarto (moderado déficit neurológico focal) </li><li> caindo em uma direção contralateral ao infarto (grave déficit neurológico focal) </li><li> depressão do nível de consciência sem movimento espontâneo </li></ol> 5. Coloração e medição quantitativa do volume de infarto cerebral <ol><li> Após 24 horas de reperfusão MCA, o mouse sobreviventes é pesado, profundamente anestesiados com isoflorane 4%, e sacrificado de acordo com o protocolo aprovado. </li><li> O cérebro é cuidadosamente removido e colocado em um rato slicer cérebro matriz, e do cérebro inteiro é coronalmente seccionados em intervalos de 2 mm. </li><li> As seções são imersos em 2% TTC em tampão fosfato salino (PBS) a 37 ° C por 20 minutos. Após a coloração TTC, área de infarto é mostrado como um tecido branco (sem manchas) adjacente ao tijolo vermelho (viável) tecido (Figura 1). </li><li> Cortes seriados são fotografados usando uma câmera digital e na área de infarto é medido com o programa J imagem. </li><li> A área de infarto (branco, imaculado), a área do hemisfério ipsilateral (branco e vermelho tijolo, manchado), ea área do hemisfério contralateral (tijolo vermelho manchado,) são medidos para cada seção. O volume é calculado pela soma das áreas de representação em todas as seções e multiplicando pela espessura do corte. Depois de corrigir para o edema, o volume de infarto é calculado da seguinte 9: Volume Infarct corrigido (CIV),% = [volume hemisfério contralateral - (volume hemisfério ipsilateral - volume de infarto)] volume hemisfério / contralateral x 100 </li></ol> 6. Resultados representante Após a oclusão e reperfusão da MCA através deixou CCA para estabelecer isquemia cerebral transitória, os animais são sacrificados e seus cérebros coronalmente seccionado estão manchadas com TTC para avaliar o volume de infarto (Figura 1). <img src="files/ftp_upload/2879/2879fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. TTC-manchada seriados cérebro coronal (2 mm) de ratos submetidos a oclusão MCA.

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+on+stroke+prevention,+diagnosis,+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders.">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 1407-1431 (1989).</li><li>Lloyd-Jones, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2009+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 119, e21-e181 (2009).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 84-91 (1989).</li><li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.+I.+A+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema. I. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse.">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurol Res. 19, 641-648 (1997).</li><li>Fujii, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-related+differences+in+susceptibility+to+transient+forebrain+ischemia+in+SV-129+and+C57black/6+mice.+.">Strain-related differences in susceptibility to transient forebrain ischemia in SV-129 and C57black/6 mice. .</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 28, 1805-1810 (1997).</li><li>Bederson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+2,3,5-triphenyltetrazolium+chloride+as+a+stain+for+detection+and+quantification+of+experimental+cerebral+infarction+in+rats.">Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 17, 1304-1308 (1986).</li><li>Qi, X., Hosoi, T., Okuma, Y., Kaneko, M., Nomura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+4-phenylbutyrate+protects+against+cerebral+ischemic+injury.">Sodium 4-phenylbutyrate protects against cerebral ischemic injury.</a> Mol Pharmacol. 66, 899-908 (2004).</li><li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy.">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 13, 683-692 (1993).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ideal+suture+diameter+is+critical+for+consistent+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Ideal suture diameter is critical for consistent middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Neurosurgery. 56, 196-200 (2005).</li><li>Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-regulated+model+of+focal+ischemia+in+the+mouse:+a+study+with+histopathological+and+behavioral+outcomes.">Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 35, 1720-1725 (2004).</li><li>Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+induced+prolonged+protection+against+cerebral+ischemia+in+mice:+a+redox+sensitive+mechanism?.">Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism?.</a> Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).</li></ol>

Autores declaram que não têm nenhum conflito de interesses.

O modelo MCAO é um modelo estabelecido que replica isquemia cerebral em espécies murina. Este modelo foi usado pela primeira vez em ratos e, posteriormente adaptado para ratos. Evitando craniectomia para eliminar a influência da manipulação cirúrgica na permeabilidade da barreira do sangue cerebral e pressão intracraniana é uma vantagem desta técnica. No entanto, muitas variáveis, tais como tensão diferenças relacionadas 10, tamanho da ponta de sutura 11, a duração da oclusão 6,...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente </th><th> Tipo </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentários (opcional) </th></tr><tr><td> Masculino camundongos C57BL / 6 </td><td> Animal </td><td> Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, EUA </td><td></td><td> 20-26 grs </td></tr><tr><td> Microscópio de dissecção </td><td> Microscópio </td><td> Leica Microscópio estéreo MZ6 </td><td></td><td> Zoom 6.3:1 </td></tr><tr><td> Iluminador de fibra óptica </td><td> Iluminador </td><td> TechniQuip Corp, Livermore, CA, EUA </td><td></td><td> Fo1-150 </td></tr><tr><td> Isoflurano </td><td> Anestesia </td><td> Farmacêutica Baxter, Deerfield, IL </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> Tesoura Iris SuperCut, em linha reta </td><td> Ferramenta cirúrgica </td><td> Precision mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> 14218 </td><td></td></tr><tr><td> Vannas micro-tesoura, em linha reta </td><td> Ferramenta cirúrgica </td><td> Precision mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> 14003 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont multa forceps ponta </td><td> Ferramenta cirúrgica </td><td> Precision mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> 503290 </td><td></td></tr><tr><td> Clipe de navio </td><td> Ferramenta cirúrgica </td><td> Precision mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> 14120 </td><td></td></tr><tr><td> Exsicador High Frequency 900 </td><td> Ferramenta cirúrgica </td><td> Precision mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> 500397 </td><td></td></tr><tr><td> 7-0 sutura cirúrgica de monofilamento de nylon </td><td> Sutura </td><td> Ethicon, Inc., Somerville, NJ, EUA </td><td> 1647G </td><td> Sutura para oclusão </td></tr><tr><td> 7-0 sutura cirúrgica Silk </td><td> Sutura </td><td> Ethicon, Inc., Somerville, NJ, EUA </td><td> 7733G </td><td> Sutura para ligadura </td></tr><tr><td> Silicone RTV adesiva </td><td> Borracha de silicone </td><td> Precision mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> 1571 </td><td></td></tr><tr><td> Vetbond </td><td> Adesivo de tecido </td><td> 3M Company, St Paul, MN, EUA </td><td> 70200746587 </td><td></td></tr><tr><td> Puralube Pomada Vet </td><td> Pomada </td><td> Pharmaderm, Melville, NY, EUA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Buprenorfina hydrochlorode </td><td> Analgésicos </td><td> Hospira Inc., Lake Forest, Illinois, EUA </td><td> NDC 0409-2012-32 </td><td></td></tr><tr><td> Unidade Cauterização Térmica </td><td></td><td> Precision mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> 501292 </td><td></td></tr><tr><td> PeriFlux System 5000 </td><td> TCD fluxometria </td><td> Perimed, Estocolmo, Suécia </td><td></td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 </td><td> Retal termômetro </td><td> Precision mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> BAT-12R </td><td></td></tr><tr><td> T / PUMP, TP600 </td><td> Cobertor térmico </td><td> Gaymar, NY, EUA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2,3,5-trifeniltetrazólio cloreto </td><td> Reagente </td><td> Sigma-Aldrich Co., St Louis, MO, EUA </td><td> T8877 </td><td></td></tr><tr><td> Camundongos cérebro matriz slicer </td><td> Cérebro slicer </td><td> Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, EUA </td><td> BSMAS001-1 </td><td></td></tr></tbody></table>

intraluminal middle cerebral artery occlusion (mcao) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice

AVC é a terceira principal causa de morte e a principal causa de incapacidade no mundo, com um custo estimado de perto de US $ 70 bilhões nos Estados Unidos em 2009 1,2. O intraluminal cerebral média de oclusão da artéria modelo (MCAO) foi desenvolvido por Koizumi 4 em 1986 para simular esta patologia de grande impacto humano no rato. A modificação do método de MCAO mais tarde foi apresentado por Longa 3. Ambas as técnicas têm sido amplamente utilizados para identificar mecanismos moleculares de lesão cerebral resultante de acidente vascular cerebral isquêmico e potencial modalidades terapêuticas 5. Este método relativamente não-invasivo em ratos foi estendido para uso em camundongos para tirar proveito de transgênicos e knockout cepas 6,7. À isquemia focal modelo cerebral, uma sutura intraluminal é avançado através da artéria carótida interna para ocluir a base do MCA. Retração da sutura, após um período de tempo especificado imita reperfusão espontânea, mas a sutura pode também ser mantida em permanência. Este vídeo estará demonstrando as duas abordagens principais para a realização de procedimento MCAO intraluminal em ratos de forma gradual, bem como fornecer insights para potenciais inconvenientes e perigos. O tecido cerebral isquêmico, posteriormente, ser manchada por 2,3,5-trifeniltetrazólio cloreto (TTC) para avaliar a extensão do infarto cerebral 8.

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Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

O intraluminal cerebral média de oclusão da artéria modelo (MCAO) é o modelo mais freqüente dentre os modelos experimentais acidente vascular cerebral isquêmico. Aqui vamos demonstrar todo o modelo em detalhes com o guia de Laser Doppler fluxometria, e os resultados do seu representante.

Intraluminal artéria cerebral média Oclusão Model (MCAO) para Acidente Vascular Cerebral Isquêmico com Laser Doppler Fluxometria Orientação em Ratos

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

49.6K visualizações.  University of Florida. O intraluminal cerebral média de oclusão da artéria modelo (MCAO) é o modelo mais freqüente dentre os modelos experimentais acidente vascular cerebral isquêmico. Aqui vamos demonstrar todo o modelo em detalhes com o guia de Laser Doppler fluxometria, e os resultados do seu representante.

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Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Curso de modelagem em Ratos - Oclusão da Artéria Cerebral Média com o modelo de Filamento

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Medicina

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Modelo do rato de Oclusão da Artéria Cerebral Média

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Oclusão bilateral artéria carótida comum como um estímulo pré-condicionamento adequados para induzir a tolerância isquêmica início da Isquemia Cerebral Focal

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

Endotelina-1 Induzida Médio modelo de oclusão da artéria cerebral para AVC isquêmico com Laser Orientação Fluxometria Doppler em ratos

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

Utilizando uma janela craniana para Visualizar a artéria cerebral média Durante endotelina 1 Induzida por oclusão da artéria cerebral média

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Sistema otimizado para Monitorização de perfusão cerebral no modelo do rato do curso de oclusão da artéria cerebral média intraluminal

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

Curso de modelagem em Ratos: Coagulação permanente da artéria distal Cerebral Média

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Embolic artéria cerebral média Oclusão (MCAO) para Acidente Vascular Cerebral Isquêmico com homólogos Coágulos de sangue em ratos

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.

Abordagem cirúrgica para oclusão da artéria cerebral média e reperfusão induzida por acidente vascular cerebral em ratos

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of stroke on tissue injury and to evaluate the effectiveness of therapeutic interventions, several experimental models in a variety of species were developed. They include complete global cerebral ischemia, incomplete global ischemia, focal cerebral ischemia, and multifocal cerebral ischemia. The model described in this protocol is based on the middle cerebral artery occlusion (MCAO) and is related to the focal ischemia category. This technique produces consistent focal ischemia in a strictly defined region of the hemisphere and is less invasive than other methods. The procedure described is performed on mice, given the availability of several genetic variants and the high number of tests standardized for mice to aid in the behavioral and neurodeficit evaluation.

We describe a mouse model of stroke induced by the occlusion of the middle cerebral artery using a silicone coated suture. The protocol can be applied to induce permanent occlusion or a temporary ischemia, followed by reperfusion.

Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...