Este trabalho foi apoiado pelo Centro Interdisciplinar de Pesquisa Clínica (IZKF) Münster (SEED 12/03, SB).

1. Comentários Gerais para o Rato Experimentos <ol><li> Todos os experimentos com ratos devem ser realizados de acordo com as diretrizes da respectiva comissão cuidados com os animais institucional e uso. </li><li> Mantenha os ratos em condições livres de patógenos e permitir-lhes ter acesso a comida e água ad libitum. Nota: É importante o uso de camundongos pareados por idade e sexo, em grupos experimentais porque a susceptibilidade à doença pode variar de acordo com idade e sexo. </li><li> Dependendo das condições experimentais escolhidas, um grupo de controlo imunizado simulada pode ser considerada onde MOG 35-55 péptido é substituído por PBS sem antigénio ou um péptido nonencephalitogenic. </li><li> Por favor, considere aspectos metodológicos antes experimentos iniciais (ver também abaixo). Recomendamos envolver um ou dois observadores cegos para EAE pontuação. </li></ol> 2. Preparação de MOG 35-55 Emulsão <ol><li> 200 ul de uma proporção de 1:1 de MOG 35-55 solução de peptídeo e CFA deve ser injetado a cada mouse. Há alguma perda da emulsão viscosa durante a preparação e injeção. Portanto, prepare-se 1,5-2x da quantidade necessária. Calcular o volume total da emulsão e divide-se por dois para as quantidades necessárias de solução de péptido tanto MOG 35-55 e CFA. </li><li> Diluir MOG 35-55 liofilizado em ddH2O para uma concentração final de 2 mg / ml. Nós usamos geralmente 200 mg MOG 35-55 peptídeo por mouse. Esta quantidade está contida em 100 ul de solução-mãe. A solução de péptido deve ser armazenado a -20 ° C. </li><li> Colocar o conteúdo de 1 frasco de Mycobacterium tuberculosis H37RA desidratado (100 mg) para um almofariz. <ol><li> Chão com almofariz e pilão para se obter um pó fino. </li><li> Adicionar 10 ml de adjuvantes de Freund incompleto para se obter uma solução de estoque de 10 mg / ml de CFA, que pode ser armazenado a 4 ° C. </li><li> Antes da imunização, diluir CFA solução estoque sagacidadeh IFA para uma concentração final de 2 mg / ml. Misturar bem antes de cada utilização para ressuspender o material particulado e considerar alguma perda de volume da solução viscosa durante as preparações experimentais. </li><li> Mistura a 1:1 com MOG 35-55 solução de péptido até à concentração final de 1 mg / ml é atingida. CUIDADO: morta pelo calor Mycobacterium tuberculosis estimula a resposta imune inata. Evitar a inalação, ingestão e contato com a pele e os olhos. </li></ol></li><li> Precool soluções no gelo. <ol><li> Desenha-se 1 ml de 2 mg / ml de CFA e 1 ml de 2 mg / ml de solução de MOG 35-55 em duas seringas de 2 ml. Calcular o número de seringas necessárias de acordo com o número de animais imunizados. CUIDADO: Estritamente evitar costura durante a preparação de adjuvante, pois pode causar granulomas ou induzir reações auto-imunes. </li><li> Use uma cânula G 27 para o 35-55 solução MOG e uma cânula G 20 para CFA. Evite bolhas de ar e conectar ambas as seringas com pelorês-way-válvula. </li><li> Enviar a emulsão a partir de uma seringa para a outra e misturar completamente durante pelo menos 10 minutos como uma boa emulsificação é um passo crítico. Near-fechar a três vias válvulas para apoiar emulsificação. A solução deve ser de cor branca, dura e viscosa, sem separação de fases. </li><li> Emulsão pode ser armazenada durante vários dias antes da imunização. Espere pelo menos 30 minutos após a preparação das emulsões para observar se eles são estáveis. Antes da imunização, desenhar a solução para uma das duas seringas e conectar um G cânula 27. </li></ol></li></ol> 3. Preparação de toxina pertussis <ol><li> Diferentes quantidades de toxina da tosse convulsa pode ser encontrada na literatura, que depende também da via de administração (por exemplo, por via intravenosa ou intraperitoneal). O nosso laboratório utiliza 400 ng de toxina da tosse convulsa, em 200 ul de PBS por via intraperitoneal no dia da imunização e dois dias mais tarde. ATENÇÃO: A toxina pertussis tem muitos efeitos biológicos. Evitar a inalação, ingestão e contato com a pele e os olhos. </li><li> Reconstituir 50 mg de toxina da tosse convulsa, em 500 ul de ddH2O para uma solução de estoque de 100 ug / ml. Armazenar a 4 ° C. </li><li> Diluir 1:50 com PBS. 200 uL agora contêm 400 ng de PBS. Preparar a quantidade necessária de seringas e considerar um volume em excesso adicional de ~ 100 ul de cada cubo de agulha. </li></ol> 4. Animal Imunização <ol><li> Por favor, consulte a comissão de cuidados com os animais e uso institucional para a critérios específicos para a eutanásia necessário a curto prazo. Nosso laboratório utiliza breve narcotização com isoflurano, enquanto outros protocolos como injeção de cetamina / xilazina ou halothan também pode ser possível. Espere para anestesia e usar uma frente pitada pé dedo do pé para avaliar o nível de anestesia. </li><li> Certifique-se de que a imunização é feita por uma pessoa experiente para minimizar a tensão para os animais e para assegurar a imunização óptima. </li><li> Injectar 100 ul de antigen / CFA emulsão por via subcutânea em dois locais diferentes em cada flanco posterior. Certifique-se de que se forme um massa bulbosas sob a pele, que deve persistir durante todo o experimento. </li><li> Injetar 200 mL de toxina pertussis intraperitonelly. </li><li> Certifique-se de que os ratos individuais podem ser facilmente identificados por avaliação diária, por exemplo, marcações de cores sobre a base da cauda. </li><li> Administrar uma segunda dose de toxina da tosse convulsa em dois dias após a imunização. </li></ol> 5. Monitoramento EAE <ol><li> Peso e escore clínico deve ser avaliado diariamente. O aparecimento de EAE geralmente correlaciona-se com a perda de peso, que pode ser utilizada como um indicador da actividade da doença. Consulte o cuidado com os animais institucional e usar comitê para predefinir critérios quando os ratos individuais têm de ser retirados dos experimentos. Isto deve ser considerado quando a perda de peso superior a 20% do peso corporal inicial, ou quando os sinais clínicos graves (EAE marcar 7 ou pior) ocorrer. Por favor, consulte o rediretrizes dentemente do respectivo comitê de cuidados com os animais e uso institucional para pontuação máxima permitida. </li><li> Quando os ratos têm sintomas clínicos da EAE, é importante para garantir que a garrafa de água pode ainda ser atingido e que o alimento é colocado no chão da gaiola. </li><li> Sintomas de pontuação diferentes pode ser usado. No nosso laboratório, numa escala de 0-10 é estabelecido. </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td> Grau </td><td> Sinal clínico </td><td> Comentário </td></tr><tr><td> 0 </td><td> Sem sinais clínicos </td><td> Marcha normal, os movimentos da cauda e pode ser levantado, cauda envolve em torno de um objeto redondo se do mouse é mantida na base da cauda </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Cauda parcialmente mole </td><td> Marcha normal, ponta da cauda droops </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Cauda Paralisado </td><td> Marcha normal, cauda droops </td></tr><tr><td> 3 </td><td> Paresia dos membros posteriores, movimentos descoordenados </td&gt; <td> Andar cambaleante, cauda manca, membros posteriores responder a beliscar </td></tr><tr><td> 4 </td><td> Um dos membros posteriores paralisados </td><td> Andar cambaleante, com uma traseira membro arrastando, cauda manca, um dos membros posteriores não responder a beliscar </td></tr><tr><td> 5 </td><td> Ambos os membros posteriores paralisados </td><td> Marcha descoordenada com as duas patas traseiras arrastando, cauda manca, ambos os membros posteriores não respondem a beliscar </td></tr><tr><td> 6 </td><td> Membros posteriores paralisados, fraqueza nos membros anteriores </td><td> Andar cambaleante com membros anteriores lutar para puxar o corpo, membros anteriores reflexo após beliscar, cauda manca </td></tr><tr><td> 7 </td><td> Membros posteriores paralisados, um membro anterior paralisado </td><td> Mouse não pode se mover, um membro anterior responde aos pés pitada, cauda manca </td></tr><tr><td> 8 </td><td> Membros posteriores paralisados, ambos os membros paralisados </td><td> Mouse não pode se mover, ambos os membros não respondem aos pés pitada, cauda manca </td></tr><tr><td> 9 </td&gt; <td> Moribundo </td><td> Nenhum movimento, respiração alterada </td></tr><tr><td> 10 </td><td> Morte </td><td></td></tr></tbody></table> Tabela 1. Sistema de pontuação clínica.

<ol>
	<li>McFarland, H. F., Martin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis:+a+complicated+picture+of+autoimmunity.">Multiple sclerosis: a complicated picture of autoimmunity.</a> Nat. Immunol. 8, 913-919 (2007).</li><li>Wiendl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroinflammation:+the+world+is+not+enough.">Neuroinflammation: the world is not enough.</a> Curr. Opin. Neurol. 25, 302-305 (2012).</li><li>vander Star, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+models+of+multiple+sclerosis.">In vitro and in vivo models of multiple sclerosis.</a> CNS Neurol. Disord. Drug Targets. 11, 570-588 (2012).</li><li>Pachner, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+multiple+sclerosis.">Experimental models of multiple sclerosis.</a> Curr. Opin. Neurol. 24, 291-299 (2011).</li><li>Bittner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TASK1+channel+inhibitor+A293+shows+efficacy+in+a+mouse+model+of+multiple+sclerosis.">The TASK1 channel inhibitor A293 shows efficacy in a mouse model of multiple sclerosis.</a> Exp. Neurol. 238, 149-155 (2012).</li><li>Handel, A. E., Lincoln, M. R., Ramagopalan, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+experimental+autoimmune+encephalitis+and+multiple+sclerosis.">Of mice and men: experimental autoimmune encephalitis and multiple sclerosis.</a> Eur. J. Clin. Invest. 41, 1254-1258 (2011).</li><li>Krishnamoorthy, G., Wekerle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EAE:+an+immunologist's+magic+eye.">EAE: an immunologist's magic eye.</a> Eur. J. Immunol. 39, 2031-2035 (2009).</li><li>Stromnes, I. M., Goverman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+induction+of+experimental+allergic+encephalomyelitis.">Active induction of experimental allergic encephalomyelitis.</a> Nat. Protoc. 1, 1810-1819 (2006).</li><li>Fletcher, J. M., Lalor, S. J., Sweeney, C. M., Tubridy, N., Mills, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+in+multiple+sclerosis+and+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">T cells in multiple sclerosis and experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Clin. Exp. Immunol. 162, 1-11 (2010).</li><li>Mendel, I., Kerlero de Rosbo, N., Ben-Nun, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+myelin+oligodendrocyte+glycoprotein+peptide+induces+typical+chronic+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+H-2b+mice:+fine+specificity+and+T+cell+receptor+V+beta+expression+of+encephalitogenic+T+cells.">A myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide induces typical chronic experimental autoimmune encephalomyelitis in H-2b mice: fine specificity and T cell receptor V beta expression of encephalitogenic T cells.</a> Eur. J. Immunol. 25, 1951-1959 (1995).</li><li>Hofstetter, H. H., Shive, C. L., Forsthuber, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pertussis+toxin+modulates+the+immune+response+to+neuroantigens+injected+in+incomplete+Freund's+adjuvant:+induction+of+Th1+cells+and+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+the+presence+of+high+frequencies+of+Th2+cells.">Pertussis toxin modulates the immune response to neuroantigens injected in incomplete Freund's adjuvant: induction of Th1 cells and experimental autoimmune encephalomyelitis in the presence of high frequencies of Th2 cells.</a> J. Immunol. 169, 117-125 (2002).</li></ol>

Os autores declaram não haver interesses financeiros concorrentes.

Uma multidão de diferentes modelos de EAE com protocolos de imunização activa foi descrito ao longo das últimas décadas. Enquanto os modelos de ratos têm sido amplamente utilizados até recentemente, os ratos são agora o organismo modelo mais popular para a pesquisa EAE. Este desenvolvimento é, entre outros, devido ao repertório amplo e cada vez maior de camundongos transgênicos disponíveis. A imunização de ratinhos C57BL / 6 com MOG 35-55 péptido é um dos modelos mais amplamente distribuído EAE e pode ser considerado como um modelo animal bem para uso confiável, replicável e. Em muitos laboratórios neuroimunológicas, MOG 35-55 EAE induzida é estabelecido como o modelo de escolha enquanto outros modelos EAE são usados ​​para questões experimentais mais específicas. Um ponto crítico a ser considerado é o planejamento das condições experimentais para assegurar que os experimentos são realizados EAE metodologicamente correta. Para a validade interna, marcando cego dos sintomas da doença é altamente recomendado. Expergrupos imental deve ser a idade, o peso, e os ratos-acompanhado sexo e devem ser distribuídos aleatoriamente em grupos de tratamento. Experimentos sempre deve ser realizado em conformidade com as normas de bem-estar animal. EAE estudos são muitas vezes de fraca potência e não levam em conta os erros estatísticos do tipo II. Por conseguinte, antes das experiências, os cálculos do tamanho da amostra deve ser realizada. Tamanhos de grupo necessárias dependem do tamanho esperado efeito. Consulta de um especialista para análise estatística pode ser considerado antes de iniciar experimentos EAE. Algumas limitações do protocolo devem ser mantidos em mente. Mais importante ainda, a interpretação de dados aEAE é comprometida pelo modo de imunização com o uso de adjuvante e toxina da tosse convulsa que têm ambos influência adicional sobre a reacção imunológica. Também deve ser considerado que o modelo de EAE MOG 35-55 mostra, principalmente, uma célula CD4 + T dirigida resposta imunológica. As células T CD8 + e células B desempenhamum papel menos proeminente e protocolos alternativos devem ser considerados ao abordar esses tipos de células. O curso da doença é esperado aguda, monofásicos e auto-limitada. Alternativamente, um curso recorrente-remitente da doença também pode ser conseguida em modelos de EAE alternativos. Uma importante limitação adicional de que o protocolo é um certa tendência para o componente imunológico da fisiopatologia MS. Durante os últimos anos, tornou-se cada vez mais claro que a MS tem um componente forte neurodegenerativa. A morte de oligodendrócitos e neurônios resulta em um acúmulo progressivo de déficits neurológicos. Deve ser levado em conta que o modelo de EAE não pode ser totalmente adequados para abordar questões experimentais relativos aos mecanismos de inflamação neurodegenerativas autoimune. Modelos animais alternativos com foco na patologia do SNC pode ser considerado - por exemplo, o modelo cuprizone que compromete desmielinização tóxica, sem envolvimento do sistema imunológico periférico. O protocolo descrito ser considerado como um modelo experimental neuroimunológicos básica e poderá ser modificada para outras aplicações. O procedimento experimental descrito acima pode ser facilmente aplicada a outros protocolos de EAE por estirpes de ratos ou variando o tipo e quantidade de proteína (por exemplo, usar PLP 139-151 péptido e SJL de EAE curso recorrente-remitente da doença, que é especialmente adequado para a avaliação da terapêutica efeitos sobre recidivas). O protocolo descrito pode também ser usado para as experiências de transferência adoptiva de EAE (passiva). Neste modelo, ratinhos C57BL / 6 são imunizados com MOG 35-55 péptido e CFA como descrito acima. Em contraste, a toxina da tosse convulsa não é necessária. Após 7-15 dias, baço ou nódulos linfáticos são isoladas e células do sistema imune são estimuladas de novo in vitro com MOG 35-55 péptido e várias citocinas antes de serem transferidos para um novo grupo de ratinhos C57BL/6se. Estes ratos receptores desenvolver EAE alguns dias mais cedo do que em cima de clasimunização Sical. condições in vitro podem ser variadas para questões imunológicas específicas (por exemplo, a polarização em T H 1 ou T H 17 células). Às vezes, a incidência da doença baixa ou sintomas fracos pode ser um desafio experimental. Algumas recomendações para solução de problemas são: - A severidade da doença pode variar com diferentes quantidades de péptido / rato. - Concentração óptima CFA pode variar de 1-5 mg / ml. Considere-se uma titulação do CFA ao estabelecer os experimentos. Por favor, consulte as respectivas diretrizes da respectiva comissão cuidados com os animais institucional e uso para as concentrações de CFA permitidos como muitos regulamentos proíbem concentrações CFA superiores a 2 mg / ml. - Diferentes métodos são descritos para a preparação da emulsão. Métodos alternativos, tais como a centrifugação durante 1 hora ou de ultra-sons pode ser considerada se pobre emulsificação é considerado como possibilifonte de erro le. - Idade, sexo, estação do ano e das condições ambientais dentro das instalações dos animais são factores importantes que influenciam a susceptibilidade EAE. Deve assegurar-se que as condições são comparáveis ​​entre experimentos independentes. Como descrito acima, o protocolo mencionado pode ser utilizado como ponto de partida para as experiências de EAE adoptivos. Este modelo é especialmente adequado para a separação de efeitos periféricos e do sistema nervoso central de um fenótipo genético (por exemplo, por transferência de células encefalitogénicas knockout em ratinhos receptores de tipo selvagem) e por questões imunológicas específicas como o fenótipo das células transferidas podem ser completamente caracterizado. O mais recente desenvolvimento na pesquisa EAE durante os últimos anos são receptores de células T camundongos transgênicos. Esses camundongos desenvolvem sintomas EAE espontaneamente, sem influência externa contornando o problema da inoculação adjuvante. No entanto, este modelo requer grandes quantidades de animais para breeding a assegurar o tamanho dos grupos suficientes. Avaliação de ratinhos knockout requer cruzamento antes das experiências de EAE em contraste com aEAE. À medida que cada rato desenvolve sintomas da doença em um dia diferente, a avaliação de novas substâncias pode ser bastante complicado. Portanto, o valor do clássico aEAE para neuroimunológicos permanece incontestado.

A esclerose múltipla (EM) é uma doença desmielinizante inflamatória crónica do sistema nervoso central, em que a destruição de oligodendrócitos e neurónios resulta em sintomas clínicos heterogéneos e que se acumulam. MS é considerada como uma doença auto-imune protótipo do sistema nervoso central (SNC) e modelos animais têm sido desenvolvidos para lançar luz sobre a sua patogénese complexo. Além disso, as terapias actuais são apenas parcialmente eficazes e principalmente alvo a fase inflamatória da doença, enquanto a componente neurodegenerativa é, provavelmente, o maior desafio para futuras abordagens terapêuticas 1,2. Embora a etiologia exacta da doença é ainda pouco claro, uma reacção auto-imune contra epitopos sobre a bainha de mielina dos axónios no SNC é assumido para provocar o aparecimento da doença. A desregulação do sistema imunológico, vulnerabilidade genética e fatores ambientais (por exemplo, infecções, vitamina D) Acredita-se queinfluenciar os aspectos centrais dos mecanismos fisiopatológicos da MS. Três tipos diferentes de modelos animais atualmente estabelecido para a exploração de padrões patológicos de MS: modelos virais como o vírus da encefalomielite murina de Theiler (TMEV), os modelos induzidos por agentes tóxicos como cuprizone e, finalmente, diferentes variantes de encefalomielite autoimune experimental (EAE) 3, 4. Embora todos eles imitam características do MS, eles diferem enormemente em características patológicas subjacentes, como o envolvimento do sistema imunológico adaptativo. EAE é o modelo animal mais comum, uma vez que é especialmente útil para investigar as vias neuroinflamatórias e muitas vezes serve como um modelo de &quot;prova de princípio&quot; para a eficácia de novas estratégias de tratamento 5,6. A EAE pode ser induzida em muitos animais diferentes (por exemplo, ratos, ratazanas, miniswine, cobaias, frangos, ou primatas). No entanto, os ratos se tornaram mais amplamente utilizar espécies que é, pelo menos em parte devidopara a expansão repertório de transgênicos sofisticado ou camundongos knockout 7. A patofisiologia da EAE é baseado na reacção do sistema imunitário contra antigénios específicos do cérebro. Esta reação provoca inflamação e destruição das estruturas contábeis antígeno, resultando em características neurológicas e patológicas que comparáveis ​​aos observados em pacientes com EM. Três abordagens diferentes podem ser distinguidos: EAE induzida por ativamente (aEAE; imunização activa), passivamente transferida EAE (peae; transferência de células de um animal encefalitogénicas imunizados), e os modelos mais recentemente espontâneas EAE rato (SEAE), que permitem o estudo da auto-imune mecanismos sem manipulação exógena. O modelo mais simples é induzida em ratos aEAE rendendo em resultados rápidos e robustos. Este modelo é considerado como o &quot;padrão ouro&quot; de modelos animais neuroimunológicas por muitos pesquisadores da área 8. Para a indução aEAE, o animalé imunizado com uma injecção subcutânea de uma emulsão que consiste no antigénio escolhido e completar adjuvantes de Freund (CFA), acompanhados por uma injecção intraperitoneal de toxina pertussis no dia da imunização e dois dias mais tarde. Por conseguinte, linfócitos T específicos da mielina T são activadas na periferia e migrar para o SNC através do-barreira hematoencefálica. Após a entrada no CNS, as células T são reactivadas por células apresentadoras de antigénios e do local em que se infiltram resultantes subsequente cascatas inflamatórias, o envolvimento de outras células, como monócitos ou macrófagos e, eventualmente, na desmielinização e morte celular axonal 9. Dependendo do protocolo de imunização e combinação da estirpe de ratinhos (por exemplo, ratinhos C57BL / 6, ratinhos SJL / J, Biozzi) e antigénio (por exemplo, glicoproteína oligodendrocítica de mielina (MOG), proteína básica de mielina (MBP), proteína proteolipidica de mielina (PLP)), a doença curso pode ter um curso progressivo ou recidivante aguda, crônica doença remitente. <p class= &quot;Jove_content&quot;&gt; C57BL / 6 tornaram-se a estirpe mais comumente usado para camundongos transgênicos construção e uma multidão crescente de nocaute ou camundongos transgênicos está disponível. Nós aqui descrever um protocolo para a imunização de camundongos C57BL / 6 com MOG 35-55 peptídeo 10, que resulta em uma EAE monofásico com os primeiros sintomas após 9-14 dias, a máxima da doença cerca de 3-5 dias após o início da doença e recuperação sintoma lenta e parcial ao longo dos próximos 10-20 dias. À medida que o potencial imunogénico de MOG 35-55 péptido por si só não é suficiente para induzir a doença, os adjuvantes, tais como CFA são necessárias. Supõe-se que os componentes do CFA activar fagócitos mononucleares induzindo a fagocitose destas moléculas e a secreção de citocinas. Isto resulta no prolongamento da presença de antigénios e um transporte mais eficiente destes para o sistema linfático. Indução de EAE é facilitada pela aplicação de toxina pertussis (PT) que tem entre outros sido sugerido para modulara barreira sangue-cérebro e o próprio 11 a resposta imunitária. Após a indução da doença, cuidados especiais devem ser tomados para a avaliação diária de ratos para os sintomas da doença.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="707">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Female C57BL/6 mice, age 10-12 weeks, ~20 g weight</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Jackson Laboratory, Charles River</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">MOG35-55 (MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK)</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Pepceuticals Ltd</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Incomplete Freund&#8217;s adjuvant (IFA)</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Sigma-Aldrich Co.</td>
			<td style="width:119px;">F5506</td>
			<td>Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Syringes, 1 ml with 26G3/8 needle&#160;</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Becton Dickinson &#38; Co.</td>
			<td style="width:119px;">309625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringes, 2 ml</td>
			<td style="width:205px;">e.g. B. Braun</td>
			<td style="width:119px;">7389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Needles, 25G5/8 and 30G1/2&#160;</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Becton Dickinson &#38; Co.,</td>
			<td style="width:119px;">305122, 305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Three way halve</td>
			<td style="width:205px;">e.g. B. Braun</td>
			<td style="width:119px;">16494 C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pertussis toxin, lyophilized in buffer</td>
			<td style="width:205px;">Enzo Life Sciences Inc.</td>
			<td style="width:119px;">BML-G100</td>
			<td>Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">M. tuberculosis H37 RA</td>
			<td style="width:205px;">BD Difco&#160;</td>
			<td style="width:119px;">231141</td>
			<td>Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

myelin oligodendrocyte glycoprotein (mog35-55) induced experimental autoimmune encephalomyelitis (eae) in c57bl/6 mice

A esclerose múltipla é um distúrbio neuroinflamatória desmielinizante crónica do sistema nervoso central com uma componente neurodegenerativa forte. Embora a etiologia exacta da doença é ainda incerto, linfócitos T auto-reactivas são pensados ​​para desempenhar um papel central na patofisiologia. Terapia MS é apenas parcialmente eficaz até o momento e os esforços de pesquisa continuam a expandir o nosso conhecimento sobre a fisiopatologia da doença e para desenvolver novas estratégias de tratamento. Encefalomielite autoimune experimental (EAE) é o modelo animal mais comum para MS partilha muitas características clínicas e fisiopatológicas. Há uma grande diversidade de modelos de EAE que refletem diferentes aspectos clínicos, imunológicos e histológicos de MS humanos. EAE induzida por ativamente em ratos é o modelo mais fácil induzida com resultados robustos e replicáveis. É especialmente indicado para investigar os efeitos de drogas ou de genes específicos, utilizando camundongos transgênicos desafiados por Neuroi auto-imunenflammation. Portanto, os ratinhos são imunizados com homogenatos do SNC ou péptidos de proteínas da mielina. Devido ao baixo potencial imunogénico destes péptidos, adjuvantes fortes são utilizados. EAE susceptibilidade e fenótipo depende do antigénio escolhido e roedor estirpe. C57BL / 6 são a tensão comumente usado para a construção de camundongo transgênico e responder entre outros, para mielina oligodendrócitos glicoproteína (MOG). O epitopo imunogénico MOG 35-55 é suspensa em adjuvante de Freund completo (CFA), antes da imunização e toxina da tosse convulsa é aplicado no dia da imunização e dois dias mais tarde. Ratos desenvolver um &quot;clássico&quot; EAE monofásica auto-limitada com ascendente paralisia flácida dentro de 9-14 dias após a imunização. Ratos são avaliados diariamente utilizando-se um sistema de pontuação clínica para 25-50 dias. São discutidas as considerações especiais para cuidar de animais com EAE, bem como aplicações potenciais e limitações deste modelo.

Após a imunização, os murganhos têm de ser avaliados diariamente quanto a mudanças de peso e os sintomas clínicos. O início da doença é geralmente correlacionada com uma redução de peso, que pode começar 1-2 dias antes dos sintomas de EAE são visíveis. Os sinais clínicos da EAE geralmente começam entre os dias 9 e 14 de pós-imunização. Como as lesões são predominantemente localizadas na medula espinhal em MOG-EAE em camundongos C57BL / 6, eles geralmente desenvolvem sintomas predominantemente motoras em um caudal de padrão rostral. Uma imagem exemplificativa de um ratinho imunizado com sintomas de EAE (pontuação 6) é apresentada na Figura 1A. Alguns sintomas atípicos EAE também pode ocorrer como rolar de forma axial-rotativo, aparência corcunda ou hipersensibilidade que não são refletidas dentro da EAE clássico pontuação representado na Tabela 1. Como sintomas motores são a principal característica deste modelo, esta pontuação nos dá uma boa indicação da gravidade da doença. Sistemas de monitoramento diferentes (por exemplo, 0 -5 ou 0-6) e mais escores compostos complexos que avaliam diferentes déficits também foram publicados. Por favor note que os ratos com sintomas graves têm de ser retirados da experiência de acordo com o respectivo comité institucional de cuidados animais e uso. Ratos mostram recuperação parcial dos sintomas, geralmente ao longo dos próximos 10-20 dias. Um curso da doença representativa está representada na Figura 1B. Existem diferentes pontos de tempo durante EAE que são de interesse para avaliar parâmetros de resultados. Alguns ensaios típicos que podem ser encontrados estão descritos de forma muito breve. No máximo doença, os ratos podem ser avaliadas para a produção ou a proliferação de citocinas após restimulação de células imunes isoladas com MOG 35-55 peptídeo in vitro (teste de recordação MOG). As células imunes pode também ser isolado a partir do cérebro e espinal-medula de ratos com sintomas de EAE e tratados, por exemplo, por citometria de fluxo. A análise histológica de secções da espinal medula pode ser realizada a doença maximum para carga lesão e desmielinização, ao momento posterior aponta marcadores para neurodegeneração e morte celular neuronal pode ser do seu interesse. <img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51275/51275fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51275/51275fig1.jpg" width="600px" /> Figura 1. Resultados Representante EAE. A. imagem representativa de um imunizados C57BL / 6 rato com sintomas de EAE (EAE marcar 6) o curso da doença. B. Representante após a imunização de mais de 30 dias. Os dados são apresentados como média e erro padrão da média (n = 5). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51275/51275fig1highres.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver a imagem ampliada</a> .

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Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Encefalomielite autoimune experimental (EAE) é um modelo animal estabelecido de esclerose múltipla. C57BL / 6 são imunizados com mielina de oligodendrócitos glicoproteína (MOG) peptídeo 35-55 (MOG 35-55), o que resulta em uma paralisia flácida ascendente causada por células imunes autorreactivas no sistema nervoso central. Protocolos para indução e monitoramento de doenças serão discutidos.

Mielina Oligodendrocyte glicoproteína (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induzida Encefalomielite Auto-imune Experimental (EAE) em murganhos C57BL / 6

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

myelin-oligodendrocyte-glycoprotein-mog35-55-induced-experimental

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

80.9K visualizações.  University of Münster.  Encefalomielite autoimune experimental (EAE) é um modelo animal estabelecido de esclerose múltipla. C57BL / 6 são imunizados com mielina de oligodendrócitos glicoproteína (MOG) peptídeo 35-55 (MOG 35-55), o que resulta em uma paralisia flácida ascendente causada por células imunes autorreactivas no sistema nervoso central. Protocolos para indução e monitoramento de doenças serão discutidos. 

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Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

Indução de hipofisite Auto-Imune Experimental em Ratos SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Imunologia e Infecção

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for study of the human demyelinating disease, multiple sclerosis (MS). EAE is characterized by pathologic infiltration of mononuclear cells into the CNS and by clinical manifestation of paralytic disease. Similar to MS, EAE is also under genetic control in that certain mouse strains are susceptible to disease induction while others are resistant. Typically, C57BL/6 (H-2b) mice immunized with myelin basic protein (MBP) fail to develop paralytic signs. This unresponsiveness is certainly not due to defects in antigen processing or antigen presentation of MBP, as an experimental protocol described here had been used to induce severe EAE in C57BL/6 mice as well as other reputed resistant mouse strains. In addition, encephalitogenic T cell clones from C57BL/6 and Balb/c mice reactive to MBP had been successfully isolated and propagated.
The experimental protocol involves using a cellular adoptive transfer system in which MBP-primed (200 &mu;g/mouse) C57BL/6 donor lymph node cells are isolated and cultured for five days with the antigen to expand the pool of MBP-specific T cells. At the end of the culture period, 50 million viable cells are transferred into naive syngeneic recipients through the tail vein. Recipient mice so treated normally do not develop EAE, thus reaffirming their resistant status, and they can remain normal indefinitely. Ten days post cell transfer, recipient mice are challenged with complete Freund adjuvant (CFA)-emulsified MBP in four sites in the flanks. Severe EAE starts to develop in these mice ten to fourteen days after challenge. Results showed that the induction of disease was antigenic specific as challenge with irrelevant antigens did not induce clinical signs of disease. Significantly, a titration of the antigen dose used to challenge the recipient mice showed that it could be as low as 5 &mu;g/mouse. In addition, a kinetic study of the timing of antigenic challenge showed that challenge to induce disease was effective as early as 5 days post antigenic challenge and as long as over 445 days post antigenic challenge. These data strongly point toward the involvement of a "long-lived" T cell population in maintaining unresponsiveness. The involvement of regulatory T cells (Tregs) in this system is not defined.

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Certain mouse strains are able to resist induction of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) with myelin basic protein. Described here is a simple immunization protocol that reverses the unresponsiveness and induces paralytic disease in several typical EAE resistant mouse stains.

Superando indiferença em Encefalomielite autoimune experimental (EAE) linhagens mais resistentes por transferência adotiva e desafio antigênico

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) resulting in cognitive and motor impairment. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a useful animal model of MS, because it is also characterized by lesion formation in the CNS, motor impairment and is also driven by autoimmune and inflammatory reactions. One of the EAE models is induced with a peptide derived from the myelin oligodendrocyte protein (MOG)35-55 in mice. The EAE mice develop a progressive disease course. This course is divided into three phases: the preclinical phase (day 0 - 9), the disease onset (day 10 - 11) and the acute phase (day 12 - 14). MS and EAE are induced by autoreactive T cells that infiltrate the CNS. These T cells secrete chemokines and cytokines which lead to the recruitment of further immune cells. Therefore, the immune cell distribution in the spinal cord during the three disease phases was investigated. To highlight the time point of the disease at which the activation/proliferation/accumulation of T cells, B cells and monocytes starts, the immune cell distribution in lymph nodes, spleen and blood was also assessed. Furthermore, the levels of several cytokines (IL-1&#946;, IL-6, IL-23, TNF&#945;, IFN&#947;) in the three disease phases were determined, to gain insight into the inflammatory processes of the disease. In conclusion, the data provide an overview of the functional profile of immune cells during EAE pathology.

This manuscript describes the methods for induction and scoring of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, together with the assessment of immune cell distribution and mRNA cytokine levels in lymph nodes, spleen, blood and spinal cord using flow cytometry and quantitative PCR, respectively, at various disease phases.

Indução de encefalomielite autoimune experimental em camundongos e avaliação da distribuição da doença dependente de células imunes em vários tecidos

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses targeting myelin. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model of CNS autoimmune disease, and is typically induced via immunization with short peptides representing immunodominant CD4+ T cell epitopes of myelin proteins. However, B cells recognize unprocessed protein directly, and immunization with short peptide does not activate B cells that recognize the native protein. As recent clinical trials of B cell-depleting therapies in MS have suggested a role for B cells in driving disease in humans, there is an urgent need for animal models that incorporate B cell-recognition of autoantigen. To this end, we have generated a new fusion protein containing the extracellular domain of the mouse version of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) as well as N-terminal fusions of a His-tag for purification purposes and the thioredoxin protein to improve solubility (MOGtag). A tobacco etch virus (TEV) protease cleavage site was incorporated to allow the removal of all tag sequences, leaving only the pure MOG1-125 extracellular domain. Here, we describe a simple protocol using only standard laboratory equipment to produce large quantities of pure MOGtag or MOG1-125. This protocol consistently generates over 200 mg of MOGtag protein. Immunization with either MOGtag or MOG1-125 generates an autoimmune response that includes pathogenic B cells that recognize the native mouse MOG.

We describe a simple protocol using only basic lab equipment to generate and purify large quantities of a fusion protein that contains mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein. This protein can be used to induce experimental autoimmune encephalomyelitis driven by both T and B cells.

Produção simples e eficiente e Purificação de rato Mielina Oligodendrocyte glicoproteína de encefalomielite autoimune experimental Estudos

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with embedded pericytes, and the glia limitans composed by the parenchymal basement membrane and astrocytic end-feed embracing the abluminal aspect of central nervous system (CNS) microvessels. In addition to maintaining CNS homeostasis the NVU controls immune cell trafficking into the CNS. During immunosurveillance of the CNS low numbers of activated lymphocytes can cross the endothelial barrier without causing BBB dysfunction or clinical disease. In contrast, during neuroinflammation such as in multiple sclerosis or its animal model experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) a large number of immune cells can cross the BBB and subsequently the glia limitans eventually reaching the CNS parenchyma leading to clinical disease. 
Immune cell migration into the CNS parenchyma is thus a two-step process that involves a sequential migration across the endothelial and glial barrier of the NVU employing distinct molecular mechanisms. If following their passage across the endothelial barrier, T cells encounter their cognate antigen on perivascular antigen-presenting cells their local reactivation will initiate subsequent mechanisms leading to the focal activation of gelatinases, which will enable the T cells to cross the glial barrier and enter the CNS parenchyma. Thus, assessing both, BBB permeability and MMP activity in spatial correlation to immune cell accumulation in the CNS during EAE allows to specify loss of integrity of the endothelial and glial barriers of the NVU. 
We here show how to induce EAE in C57BL/6 mice by active immunization and how to subsequently analyze BBB permeability in vivo using a combination of exogenous fluorescent tracers. We further show, how to visualize and localize gelatinase activity in EAE brains by in situ zymogaphy coupled to immunofluorescent stainings of BBB basement membranes and CD45+ invading immune cells.

Here, we present protocols to investigate impairment of the neurovascular unit during experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo. We specifically address how to determine blood-brain barrier permeability and gelatinase activity involved in leukocyte migration across the glia limitans.&#160;

Visualizando o comprometimento das barreiras endoteliais e Glial da unidade Neurovascular durante encefalomielite auto-imune Experimental In Vivo

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T (iNKT) cells. Patients with active RA present fewer iNKT cells, defective cell function, and excessive polarization of Th1. In this study, an RA animal model was established using a mixture of hGPI325-339 and hGPI469-483 peptides. The iNKT cells were obtained by in vivo induction and in vitro purification, followed by infusion into RA mice for adoptive immunotherapy. The in vivo imaging system (IVIS) tracking revealed that iNKT cells were mainly distributed in the spleen and liver. On day 12 after cell therapy, the disease progression slowed down significantly, the clinical symptoms were alleviated, the abundance of iNKT cells in the thymus increased, the proportion of iNKT1 in the thymus decreased, and the levels of TNF-&#945;, IFN-&#947;, and IL-6 in the serum decreased. Adoptive immunotherapy of iNKT cells restored the balance of immune cells and corrected the excessive inflammation of the body.

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

This protocol uses G6PI mixed peptides to construct rheumatoid arthritis models that are closer to that of human rheumatoid arthritis in CD4+ T cells and cytokines. High purity invariant natural killer T cells (mainly iNKT2) with specific phenotypes and functions were obtained by in vivo induction and in vitro purification for adoptive immunotherapy.

Imunoterapia adotiva de células iNKT em Isomerase Isomerase Induzida de Glicose-6-Fosfato (G6PI)-Induzido RaMice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible genetic background. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a typical disease model of MS widely used for investigating the pathogenesis in which T lymphocytes specific for myelin antigens initiate an inflammatory reaction in CNS. It is very important to assess how lymphocytes in the CNS regulate the development of disease. However, the approach for measuring the quantity and quality of infiltrated lymphocytes in the CNS is very limited due to the difficulties in isolating and detecting infiltrated lymphocytes from the brain. This manuscript presents a protocol for that is useful for the isolation, identification, and characterization of infiltrated lymphocytes from the CNS and will be helpful for our understanding of how lymphocytes are involved in the development of the CNS autoimmune disease.

This manuscript presents a protocol to induce active experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in mice. A method for the isolation and characterization of the infiltrated lymphocytes in the central nervous system (CNS) is also presented to show how lymphocytes are involved in the development of CNS autoimmune disease.

Análise Citométrica de Fluxo de Infiltração linfócito no Sistema Nervoso Central durante Encefalomielite Autoimune Experimental

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...

Aumento da imunogenicidade por Mycobacterium paratuberculosis na encefalomielite autoimune

Adjuvant Activity of Mycobacterium paratuberculosis in Enhancing the Immunogenicity of Autoantigens During Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in complete Freund&#39;s adjuvant (CFA) containing inactivated Mycobacterium tuberculosis. The antigenic components of the mycobacterium activate dendritic cells to stimulate T-cells to produce cytokines that promote the Th1 response via toll-like receptors. Therefore, the amount and species of mycobacteria present during the antigenic challenge are directly related to the development of EAE. This methods paper presents an alternative protocol to induce EAE in C57BL/6 mice using a modified incomplete Freund&#39;s adjuvant containing the heat-killed Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis strain K-10.
M. paratuberculosis, a member of the Mycobacterium avium complex, is the causative agent of Johne&#39;s disease in ruminants and has been identified as a risk factor for several human T-cell-mediated disorders, including multiple sclerosis. Overall, mice immunized with Mycobacterium paratuberculosis showed earlier onset and greater disease severity than mice immunized with CFA containing the strain of M. tuberculosis H37Ra at the same doses of 4 mg/mL. The antigenic determinants of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP)&#160;strain K-10 were able to induce a strong Th1 cellular response during the effector phase, characterized by significantly higher numbers of T-lymphocytes (CD4+ CD27+), dendritic cells (CD11c+ I-A/I-E+), and monocytes (CD11b+ CD115+) in the spleen compared to mice immunized with CFA. Furthermore, the proliferative T-cell response to the MOG peptide appeared to be highest in M. paratuberculosis-immunized mice. The use of an encephalitogen (e.g., MOG35-55) emulsified in an adjuvant containing M. paratuberculosis in the formulation may be an alternative and validated method to activate dendritic cells for priming myelin epitope-specific CD4+ T-cells during the induction phase of EAE.

Autor em destaque: Atividade adjuvante de Mycobacterium paratuberculosis no aumento da imunogenicidade de autoantígenos durante a encefalomielite autoimune experimental  

Here, we present an alternative protocol to actively induce experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice, using the immunogenic epitope myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG)35-55 suspended in incomplete Freund's adjuvant containing the heat-killed Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis.

Atividade Adjuvante de Mycobacterium paratuberculosis no Aumento da Imunogenicidade de Autoantígenos Durante Encefalomielite Autoimune Experimental

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in ...