Este estudo foi financiado pelo NIH R37 e R01 DK54824 DK57284 subvenções a LB.

Todos os procedimentos aqui descritos são aprovados pelo comitê IACUC na Universidade de Pittsburgh. 1. Solutions <ol><li> Preparar a solução de Krebs de acordo com a receita. Composição em mM: NaCl 118, KCl 4,7, CaCl2 1,9, MgSO4 1,2, NaHCO3 24,9, KH 2 PO 4 1,2, dextrose 11,7. </li><li> Arejar Krebs com 95% de O2, 5% de CO 2 e coloque-o em um banho de 37 ° C a água para ser usado durante todo o experimento. Coloque lado ~ 200 ml de solução de Krebs arejada à temperatura ambiente até ser utilizado para a dissecção do tecido. </li><li> Medir pH (~ 7,4) e osmolaridade (~ 300 mOsm) de aerado Krebs. </li></ol> 2. Experimental Set-up (esquemático Figura 1A) <ol><li> Encha gaseificado (95% O2, 5% de CO 2) câmaras com 10 ml de Krebs. </li><li> Ligue a bomba de circulação de água para aquecer as câmaras a 37 ° C; ligar o equipamento necessário: amplificador (s), estimulador (s) e gravação de software. </li><li> Calibração de transdutores com um peso de 1 g. </li></ol> 3 Tecido (Figura 1B) Retire a bexiga de um adulto do sexo feminino ingênuo Sprague Dawley (200-250 g; ~ 10-12 semanas de idade) seguindo estes passos: <ol><li> Prepare área de dissecção e instrumentos necessários: máquinas de barbear, pinças com dentes, lâmina de bisturi, tesouras de dissecação, microtesouras, duas pinças de dissecação (autores preferem Dumont fórceps # 3), clips de tecido (ou fio de seda), um prato dissecção Sylgard revestido com Krebs e pinos de dissecação de tecidos. </li><li> Anestesiar os animais com a inalação de isoflurano (4% em O 2) na câmara de indução. Use pomada veterinária nos olhos para evitar a secura sob anestesia. Continuamente monitorizar o nível de anestesia mediante a observação da taxa de respiração, resposta a estímulos externos, e perda do membro posterior retirada reflexa. </li><li> Quando o animal é anestesiado barbear a um menor abdominalrea. Expor os órgãos pélvicos através de uma incisão abdominal na linha média. Identificar a bexiga e uretra. Retirar a bexiga através do corte no colo da bexiga perto da uretra proximal. Colocar o tecido imediatamente no prato revestido Sylgard cheio com solução de Krebs arejada. </li><li> Se for necessário, remover o tecido adicional neste momento: uretra, pedaços de gastrintestinais (GI) e / ou da próstata, etc </li><li> Sacrificar o animal, utilizando métodos IACUC aprovados (por exemplo, por overdose do anestésico ou CO 2 asfixia seguida de um método secundário). </li><li> Insira tecido dissecando pinos através da cúpula da bexiga, pescoço e ureteres, para estabilizar o tecido para posterior dissecação. Não estique o tecido. Remover o tecido adiposo, conjuntivo, uretra proximal e ureteres se presente. </li><li> Abra a bexiga a partir da base de cúpula para criar uma folha plana, lado serosa baixo / lado luminal up (Figura 1B). Coloque dissecando pinos em cada canto do tecido. Remover dom bexigae tecido e pescoço. </li><li> Se o objectivo da experiência é determinar a contribuição da mucosa (urotélio e lâmina própria - ver diagrama Figura 1C) para a contracção do músculo liso, comparar as propriedades das tiras do detrusor, com e sem a mucosa ligada. Por isso, antes de cortar o tecido em tiras, retire cuidadosamente a camada mucosa usando íris primavera tesouras e pinças finas sob um microscópio de dissecação. No final da experiência, para fixar as tiras de coloração de H &amp; E para confirmar a remoção completa da mucosa. Note-se que este procedimento é mais fácil em rato bexiga do que em bexiga de ratos. </li><li> Cortar o tecido longitudinalmente a partir da base de cúpula em tiras de ~ 2 x 8 mm (Figura 1B). Amarre ou anexar um clipe de tecido para ambas as extremidades de cada tira. Observação: Uma bexiga de rato pode normalmente ser cortado em tiras de 4, mas o número de tiras pode aumentar ou diminuir de acordo com o tamanho do animal / bexiga. </li><li> Transfira as tiras para o expercâmaras imental. Anexar uma extremidade de cada tira de um transdutor de força, que mede a contracção do tecido, e a outra para uma vareta de vidro / metal fixo. NOTA: câmaras do tecido variam em tamanho (0,2 ml a 20 ml ou maiores). Câmaras típicas para bexigas de roedores são 5-20 ml, as quais proporcionam uma altura suficiente para que as tiras ser completamente submerso na solução. Algumas câmaras vêm com alto-eletrodos de estimulação, outros não. Cuidados devem ser tomados para garantir que todas as conexões dos eletrodos estão em boas condições, caso contrário, a estimulação campo elétrico não é confiável. </li><li> Aplicar uma quantidade definida de força para cada tira de tecido que se estende suavemente até que a tensão da linha de base atinge um g (~ 10 min). Inicialmente, o tecido tende a relaxar, que é registrado como uma diminuição da tensão da linha de base. Tecido de lavagem aproximadamente a cada 15 min, utilizando a quente de Krebs gaseificado e ajustar a tensão da linha de base de 1 g após cada lavagem. Permitir que o tecido equilibrar durante ~ 1-2 horas ou até que a tensão da linha de base é estável (ou seja, não mais relaxamento do tecido). </li><li> Teste de viabilidade do tecido pela adição de KCl (80 mM) directamente para o banho de ~ 5 minutos, ou até que uma resposta de patamar é atingido. As respostas às elevadas concentrações de KCI, também pode ser repetida durante a experiência ou no fim da experiência e utilizada para normalizar as respostas a outras drogas ou entre as tiras (ver normalização na secção de análise de dados). </li><li> Tecidos de lavagem várias vezes (3-5x) com a quente de Krebs gaseificado para permitir que o tecido para voltar às condições de pré-tratamento. </li></ol> 4. Estimulação Protocolos <ol><li> Para investigar os efeitos da patologia sobre a actividade miogénica espontânea ou tom do músculo liso, usar tiras de músculo liso a partir de modelos de animais diferentes, tais como a SCI, BOO, ou recém-nascidos. Figura 2 ilustra a utilização deste método para investigar mudanças na actividade da bexiga e espontânea durante o desenvolvimento após SCI. Além disso, os agentes farmacológicos podem ser usados ​​para modular spontaneous actividade. Figura 3 ilustra o efeito dos moduladores de canais KCNQ, a flupirtina e XE991, sobre a actividade espontânea e tonicidade do músculo liso. </li><li> Para a estimulação do músculo construção de curvas de concentração-resposta lisas farmacológicas por adição de compostos a partir de soluções de reserva concentradas directamente para o banho em intervalos de tempo definidos. Uso de drogas e veículos em faixas paralelas para dar conta de veículos e tempo efeitos. <ol><li> Faça soluções estoque de compostos de teste desejados em 1000x a concentração de trabalho final. Para carbacol (CCh), um agonista do receptor muscarínico, preparar seguintes unidades: 10 -5 M, 3 x 10 -5 M, 10 -4 M, 3 x 10 ~ 4 M, 10 -3 M, 3 x 10 -3 M , 10 -2 M. As concentrações finais no banho é de 10 ~ 8 M a 10 -5 M (Figuras 4C, D). Para neuromedina B (NMB), um receptor bombesina subtipo 1 agonista, preparar seguintes unidades populacionais: 10 -8 M, 10 -7M, 10 -6 M, 10 -5 M, 10 -4 M, 10 -3 M e as concentrações finais no banho são 10 -11 M a 10 -6 M. Ambos CCh e NMB são esperados para aumentar a contratilidade do tecido. </li><li> Para um banho de tecido de 10 ml, adicionar 10 ul de cada solução de estoque CCh, logo que a resposta atinge um platô (Figura 4C, D). Em tiras paralelas adicionar quantidades iguais de veículo (água). Da mesma forma, adicionar 10 ul de cada solução de estoque neuromedina B cada ~ 5 min. NOTA: Observe o efeito excitatório do NMB e CCh no tônus ​​da musculatura lisa em tiras de diferentes espécies na Figura 4. </li><li> Investigar as propriedades de relaxamento da musculatura lisa em tecido pré-contraído com um agente excitatório, geralmente CCh ou KCl. </li><li> Para bloquear uma resposta agonista, o pré-tratamento de tecidos durante 10-20 minutos com o antagonista para permitir a penetração do tecido, antes da estimulação agonista. </li></ol></li><li> Para stim neuraismento do músculo liso, também chamado de estimulação campo elétrico (EFS) siga os passos de 1-3,13 e continuar como descrito abaixo. EFS destina-se a activar selectivamente nervos, contra o músculo liso. Parâmetros para a estimulação deve ser cuidadosamente escolhido para evitar a estimulação direta do músculo liso. <ol><li> Estabelecer parâmetros de estimulação: tipo de estímulo (pulsos individuais ou trens), duração (duração do pulso ea duração de trem), frequência e intensidade, conforme descrito nas etapas a seguir e ilustrado nas Figuras 5A, B. <ol><li> Para a estimulação único pulso, duração de pulso set, intervalo inter-estímulo e número de estímulos desejados. Parâmetros de duração estimulação usuais são pulsos únicos de 0,05-0,3 mseg de duração entregue em intervalos desejados (Figura 5A). Siga o passo 4.3.1.4 para a intensidade do estímulo. </li><li> Para a estimulação trem, definir a duração do trem e inter intervalo de trem. Os valores típicos para o tecido da bexiga são 3-10 seg entregue pelo menos 1 mem separado (Figura 5B). Se ocorrer fadiga tecido (ou seja, EFS contrações diminuir durante o período de controle), aumente o intervalo entre trem. </li><li> Estabelecer a freqüência de estímulos de trem (número de pulsos em um trem - A Figura 5B). Executar uma curva de resposta de freqüência que varia 0,5-50 Hz. Frequências típicas para bexiga são 10-20 Hz, que dão contrações reprodutíveis e estáveis ​​mediadas pelo ATP e acetilcolina. Observe as respostas dependentes de freqüência à estimulação EFS em tiras rato bexiga na Figura 5 que demonstram como este método pode ser utilizado para avaliar a contribuição de mecanismos colinérgicos e purinérgicos a neurotransmissão. </li><li> Estabelecer intensidade do estímulo: aumentar sistematicamente a intensidade (voltagem) do estímulo até que a amplitude da contração atinge um patamar (se estiver usando trens manter constante a freqüência). </li><li> Definir a intensidade do estímulo, dependendo doobjetivo do experimento. Se o objectivo é o de aumentar as contracções evocadas por neuralmente, em seguida, utilizar a intensidade sub-máxima tal que a amplitude da contracção é de ~ 50% da contracção máxima. Se o objetivo é diminuir as contrações evocadas por Neurally, em seguida, definir a intensidade de ~ 80% da amplitude máxima para evitar a fadiga dos tecidos. </li></ol></li><li> Uma vez que os parâmetros de estimulação (duração, frequência e intensidade) são estabelecidos, permitir ~ 20-30 min para EFS- evocado contrações para estabilizar antes de testes de drogas. NOTA: Para verificar a seletividade de EFS para a transmissão neural, transmissão neural bloco com o bloqueador do canal de Na +, a tetrodotoxina (TTX; 0,5-1 mM). Executar este passo, no início da experiência, enquanto TTX lava relativamente fácil. Além disso, esta realização, no final da experiência (ver o passo 4.3.5. Abaixo). </li><li> Preparar soluções estoque de 1000X as concentrações de trabalho finais para: alfa, beta-metileno ATP (ABMA; um ativador do receptor purinérgicoe dessensibilizante) 10 -2 M, atropina (um antagonista do receptor muscarínico) 10 -3 M (Figura 5C). Observar outros exemplos na Figura 6. O agonista do receptor 5HT4, cisaprida (3 x 10 -6 M, 10 -6 M, 3 x 10 -5 M, 10 -5 M, 3 x 10 ~ 4 M, 10 -4 M, 3 x 10 -3 M, 10 -3 M), aumenta a contractilidade do tecido e SB-203186 (3 x 10 -3 M), um antagonista do receptor 5HT4, inverte os efeitos de cisapride. </li><li> Para testar os efeitos da ABMA e atropina sobre EFS (Figura 5C), realizar duas curvas de resposta de freqüência de controle. Adicionar 10 ul de 10 -2 M ABMA para o banho para uma concentração final de 10 uM. Isto irá contrair o tecido devido a estimulação directa do receptor purinérgico do músculo liso. Após a resposta retorna à linha de base, repita as curvas de resposta de freqüência. Adicionar 10 ul de 10 -3 M de atropina para um final de concentratião de 1 uM. Após cerca de 10 min (necessário para a atropina para bloquear os receptores muscarínicos), curvas de resposta de freqüência de repetição. Em tiras paralelas adicionar 10 ul de veículo, água, em cada passo. NOTA: Para outros exemplos na Figura 6, adicionar 10 ul de cada solução de cisaprida em intervalos definidos de tempo (~ 15 min cada, ver a discussão), seguidos por 10 ml de SB-203186 solução estoque directamente para o banho e monitorizar o seu efeito em EFS contração induzida. Em tiras paralelas adicionar 10 ul de veículo, DMSO. Observar os efeitos de cisaprida, um agonista do receptor 5HT4, em contrações EFS-evocados em bexiga e íleo tecidos humanos na Figura 6. Além disso, observar o efeito do DMSO, o veículo para a cisaprida, a EFS evocados contrações na bexiga humana e tecidos íleo . </li><li> No final do protocolo de EFS verificar a selectividade de EFS, bloqueando a transmissão nervosa com o bloqueador do canal de Na +, a tetrodotoxina (TTX; 0,5-1 &amp;# 181; M). Se contracções resistentes TTX estão ainda presentes, recomenda-se a ajustar a duração e intensidade do estímulo em experiências subsequentes. </li></ol></li><li> Para determinar os efeitos das drogas em locais pré ou pós-sináptica (Figura 7A) siga os passos de 1 a 4.3.2. Estabelecer respostas reprodutíveis ao carbacol e EFS, em seguida, adicione X. droga </li><li> No final da experiência, ou desatar desencaixe das tiras, apagá-las cuidadosamente sobre um pedaço de papel de tecido para eliminar o fluido extra e medir o peso de cada tira utilizando uma balança. Também medir o comprimento do tecido, utilizando um paquímetro para determinar a área transversal. Esta informação é usada para a normalização dos dados (ver secção 5.4). </li></ol> Análise de Dados 5. Analisar dados usando o software adequado (por exemplo, Windaq, LabChart). <ol><li> Para a atividade espontânea, selecione uma janela de pelo menos 30 segundos antes e no pico da resposta induzida por drogas e meamplitude asure e frequência de atividade miogênica (Figura 3). <ol><li> Use a análise de transformação rápida de Fourier para determinar o espectro de freqüências que contribuem para respostas contráteis e se há diferenças entre as diferentes partes da bexiga (por exemplo, a cúpula vs. pescoço) ou com o desenvolvimento, patologia e medicamentos 8. </li></ol></li><li> Para efeitos no tônus ​​da musculatura lisa selecionar uma janela de pelo menos 10-30 segundos antes e no pico da resposta induzida por drogas e medir a amplitude de contração. </li><li> Para efeitos sobre as contracções evocadas neuralmente medem a amplitude, a duração e a área sob a curva de contracções (pelo menos 3), antes e no pico da resposta induzida por drogas. NOTA: É necessário medir a amplitude e área sob a curva de contracções induzidas por EFS, porque os componentes purinérgicos e colinérgicos têm diferentes cinéticas. O componente purinérgico é rápida e transiente (ATP activa purinergic canais ionotrópicos como P2X1, que permitem o influxo rápido de cálcio, em seguida, eles dessensibilizar), contribuindo, assim, mais para o pico de resposta de amplitude e menos para a área sob a curva. O componente colinérgica é mais lenta e sustentada (ACh activa receptores muscarínicos metabotrópicos, que necessitam de mais tempo para activar vias de sinalização intracelular que em última análise, activam os canais iónicos que despolarizar o músculo liso para induzir uma contracção). Assim, o componente muscarínico é capturado melhor através da medição da área sob a curva. </li><li> Normalizar os dados para poder comparar resultados entre tiras e tratamentos farmacológicos. O parâmetro escolhido para a normalização não deverá ser influenciada por os compostos de teste, estudou condição patológica ou desenho experimental. Entre estes parâmetros, a utilização de peso tira, a área de corte transversal, as respostas de KCl (Figura 4B),% da resposta máxima (Figura 7B) ou% da resposta máxima para um outro agente contráctil(Por exemplo, CCh) ou agentes relaxantes (por exemplo, papaverina). </li></ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Neste artigo descrevemos um simples método in vitro contratilidade do músculo liso que pode ser usada para abordar uma série de questões científicas importantes relacionados à fisiologia e patologia da bexiga, bem como auxiliando na descoberta de novos medicamentos para tratar disfunções de bexiga. Ilustramos o uso deste método para avaliar as propriedades de desenvolvimento, patológicos e farmacológicos da contractilidade do músculo liso da bexiga (Figuras 2-4), modulação da neur...

O músculo liso da bexiga relaxa para permitir o armazenamento da urina, e os contratos para provocar a eliminação de urina. Relaxamento é mediada por propriedades intrínsecas do músculo liso e pela liberação tônica de norepinefrina (NE) dos nervos simpáticos, que ativa os receptores adrenérgicos beta (β 3 AR em humanos) no detrusor. Anulação é conseguido através da inibição da entrada simpático e ativando os nervos parassimpáticos que liberam acetilcolina / ATP para contrair o músculo liso da bexiga 1. Diversas condições patológicas, incluindo cérebro e / ou lesão da medula espinhal, doenças neurodegenerativas, diabetes, obstrução da saída da bexiga ou cistite intersticial, pode alterar profundamente a função da bexiga, com grave impacto na qualidade de vida do paciente 2. Estas condições de alterar a contractilidade do músculo liso por afectar um ou mais componentes da bexiga: a musculatura lisa, o aferente ou nervos eferentes e / ou omucosa. Vários in vivo e em métodos in vitro para estudar a função da bexiga têm sido desenvolvidos. In vivo, a cistometria é a medida primária da função da bexiga. Embora isto seja uma preparação intacta que permite a recolha de informação em condições próximas das condições fisiológicas, há um número de circunstâncias, em que é preferido o uso de tiras de músculo liso. Estes incluem situações em que as manipulações cirúrgicas e / ou farmacológicos que afectam a sobrevivência e estabilidade da preparação, in vivo, ou quando os estudos requerem a utilização de tecido humano ou de produtos químicos caros. Este método também facilita o exame dos efeitos de drogas, a idade e patologia em cada componente da bexiga, do músculo liso, ou seja, a mucosa, nervos aferentes e eferentes. Tiras de bexiga têm sido utilizados ao longo dos anos por muitos grupos para responder a uma série de questões científicas. Eles foram usados ​​para evamudanças luate em atividade espontânea miogênica induzida pela patologia. Acredita-se que esta atividade para contribuir para a urgência e frequência sintomas de bexiga hiperativa (OAB), e é, portanto, um alvo para drogas que está sendo desenvolvido para OAB 3-9. Tiras de bexiga também foram utilizados para investigar fatores miogênicos e neuronais que modulam tônus ​​da musculatura lisa, com o objetivo de descobrir os canais iônicos e / ou receptores e / ou vias intracelulares que poderiam ser direcionados para induzir qualquer relaxamento ou contração da musculatura lisa 3,10- 13. Outros estudos focaram-se na natureza da neurotransmissão, incluindo os transmissores e receptores envolvidos e as mudanças induzidas pela patologia 14,15. Além disso, o método tem sido usado para as comparações entre os tecidos a partir de diferentes espécies de 16 a 18, entre os órgãos de 19-21, e a avaliação das relações estrutura-actividade de drogas 22-24. Uma extensão deste método tem sido usado para MEASURÊ O efeito de drogas na liberação do transmissor de nervos eferentes 25. Além disso, uma variedade de tecidos (bexiga, uretra, tracto gastrintestinal, GI), colhidas a partir de animais ou seres humanos (a partir de cirurgias ou tecido do dador de órgãos aprovados para a pesquisa) e a partir de uma variedade de modelos animais, incluindo lesão da medula espinal (SCI), obstrução da saída da bexiga (BOO), ou cistite intersticial (IC) pode ser investigada usando esta técnica. Neste trabalho, ilustramos o uso deste método, juntamente com protocolos experimentais necessárias, para solucionar diversas questões científicas mencionadas acima.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="658">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:123px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:180px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Equipment</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Tissue Bath System with Reservoir</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">159920</td>
			<td style="width:180px;">isolated tissue baths</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Warm water recirculator pump</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">TPZ-749</td>
			<td style="width:180px;">to keep tissue baths to 37 C</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Computer</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Data Acquisiton System</td>
			<td style="width:123px;">DataQ Instruments</td>
			<td style="width:119px;">DI-710-UH</td>
			<td style="width:180px;">To view, record and analyze data</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Transbridge Transducer Amplifier</td>
			<td style="width:123px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">SYS-TBM4M</td>
			<td style="width:180px;">Transducer amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Grass stimulator</td>
			<td style="width:123px;">Grass Technologies</td>
			<td>Model S88</td>
			<td style="width:180px;">Stimulator</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia System</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td>ACV-1205S</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:237px;"><a name="RANGE!A10">Anesthetizing Box</a></td>
			<td style="width:123px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">500116</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Anesthesia Masks</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">AC-09508</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Materials and surgical instruments</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">sylgard</td>
			<td>Dow Corning Corp</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT</td>
			<td style="width:180px;">To pin, dissect &#38; cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Petri Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3160-152</td>
			<td style="width:180px;">To dissect/cut tissue</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:237px;">Insect Pins</td>
			<td style="width:123px;">ENTOMORAVIA Austerlitz Insect Pins</td>
			<td style="width:119px;">Size 5</td>
			<td style="width:180px;">To pin tissue</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Bench Pad</td>
			<td style="width:123px;">VWR International</td>
			<td style="width:119px;">56617-014</td>
			<td style="width:180px;">Absorbent bench underpads</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Rat surgical Kit</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INSRATKIT</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">2 Dumont #3 Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500064</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Forceps</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500092</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500236</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Scalpel blade</td>
			<td style="width:123px;">Kent Scientific Corporation&#160;</td>
			<td style="width:119px;">INS500239</td>
			<td style="width:180px;">To remove and dissect tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Professional Clipper&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Braintree Scientific, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">CLP-223&#160;45</td>
			<td style="width:180px;">To remove fur</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Suture Thread</td>
			<td style="width:123px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">18020-50</td>
			<td style="width:180px;">Tie tissue</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Tissue Clips</td>
			<td>Radnoti, LLC</td>
			<td style="width:119px;">158802</td>
			<td style="width:180px;">Attach tissue to rod/transducer</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">1g weight</td>
			<td style="width:123px;">&#160;Mettler Toledo</td>
			<td>11119525</td>
			<td style="width:180px;">For transducer calibration</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Chemicals</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
			<td style="width:180px;"></td>
		</tr>
		<tr height="170">
			<td height="170" style="height:170px;width:237px;">Krebs Solution:&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Sodium Chloride 
			Potassium Chloride 
			Monobasic Potassium Phosphate 
			Magnesium Sulfate 
			Dextrose 
			Sodium Bicarbonate 
			Calcium Chloride 
			Magnesium Chloride</td>
			<td style="width:123px;">Sigma&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Fisher 
			Sigma 
			EMD 
			Baker</td>
			<td style="width:119px;">&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; S7653 
			P217-500 
			P285-3 
			M65-500 
			D16-500 
			S5761 
			CX0130-2 
			2444</td>
			<td style="width:180px;">To prepare Krebs solution</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:237px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:123px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:119px;">029405</td>
			<td style="width:180px;">To anesthetesize the animal</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">&#160;Oxygen tank</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">ox251</td>
			<td style="width:180px;">To use with anesthesia system</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:237px;">Carbogen Tank (95% Oxygen; 5% Carbon Dioxide)&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Matheson Tri Gas</td>
			<td style="width:119px;">Moxn00hn36D</td>
			<td style="width:180px;">To aerate Krebs solutions</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bladder smooth muscle strip contractility as a method to evaluate lower urinary tract pharmacology

Descreve-se um método in vitro para medir a contractilidade do músculo liso da bexiga, e a sua utilização para a investigação de propriedades fisiológicas e farmacológicas do músculo liso, assim como as alterações induzidas pela patologia. Este método proporciona informação crítica para compreender a função da bexiga ao superar grandes dificuldades metodológicas encontradas em experimentos in vivo, tais como as manipulações cirúrgicas e farmacológicas que afetam a estabilidade ea sobrevivência das preparações, o uso de tecidos humanos, e / ou o uso de produtos químicos caros. Também proporciona uma forma a investigar as propriedades de cada componente da bexiga (por exemplo, músculo liso, mucosa, nervos) em condições saudáveis ​​e patológicas. A bexiga é removida a partir de um animal anestesiado, colocada em solução de Krebs e cortada em tiras. As tiras são colocadas dentro de uma câmara cheia com solução de Krebs quente. Uma das extremidades é conectada a um tenso isométrican transdutor para medir a força de contracção, a outra extremidade está ligada a uma haste fixa. O tecido é estimulado pela adição de compostos diretamente para o banho ou por campo de eletrodos de estimulação elétrica que ativam os nervos, semelhante a provocar contrações da bexiga in vivo. Nós demonstramos a utilização deste método para avaliar a contractilidade do músculo liso espontânea durante o desenvolvimento e depois de uma lesão da medula espinal experimental, a natureza da neurotransmissão (transmissores e receptores envolvidos), os factores envolvidos na modulação da actividade do músculo liso, o papel dos componentes individuais da bexiga, e as espécies e as diferenças de órgãos em resposta a agentes farmacológicos. Além disso, poderia ser utilizada para investigar as vias intracelulares envolvidas na contracção e / ou relaxamento do músculo liso, drogas relações estrutura-actividade e da avaliação da libertação do transmissor. O método in vitro a contractilidade do músculo liso tem sido usado extensivamente for mais de 50 anos, e forneceu dados que contribuíram significativamente para a nossa compreensão da função da bexiga, bem como para o desenvolvimento farmacêutico de compostos actualmente utilizados clinicamente para o controle da bexiga.

Espontâneo Atividade Miogênica Atividade miogênica espontâneo é uma importante característica do músculo liso que sofre alterações com o desenvolvimento pós-natal 6-9 e patologia (por exemplo, SCI, BOO) 3-5. Porque se acredita que essa atividade contribui para os sintomas de bexiga hiperativa (OAB) 2, uma avaliação de receptores, vias intracelulares e agentes farmacológicos que modulam, é de grande interesse para o dese...

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Bladder Smooth Muscle Strip Contractility as a Method to Evaluate Lower Urinary Tract Pharmacology

Este manuscrito apresenta um simples, mas poderoso, método in vitro para a avaliação da contratilidade do músculo liso em resposta a agentes farmacológicos ou estimulação do nervo. As principais aplicações são triagem de drogas e fisiologia do tecido entendimento, farmacologia e patologia.

Músculo liso da bexiga Faixa Contractility como um método para avaliar do trato urinário inferior Farmacologia

We describe an in vitro method to measure bladder smooth muscle contractility, and its use for investigating physiological and pharmacological properties ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

26.1K visualizações.  University of Pittsburgh School of Medicine.  Este manuscrito apresenta um simples, mas poderoso, método in vitro para a avaliação da contratilidade do músculo liso em resposta a agentes farmacológicos ou estimulação do nervo. As principais aplicações são triagem de drogas e fisiologia do tecido entendimento, farmacologia e patologia. 

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Manual Muscle Testing:  A Method of Measuring Extremity Muscle Strength Applied to Critically Ill Patients

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, and persistent nerve and muscle impairments after hospital discharge.1-6 Using an explicit protocol with a structured approach to training and quality assurance of research staff, manual muscle testing (MMT) is a highly reliable method for assessing strength, using a standardized clinical examination, for patients following ARDS, and can be completed with mechanically ventilated patients who can tolerate sitting upright in bed and are able to follow two-step commands. 7, 8 
This video demonstrates a protocol for MMT, which has been taught to &ge;43 research staff who have performed &gt;800 assessments on &gt;280 ARDS survivors. Modifications for the bedridden patient are included. Each muscle is tested with specific techniques for positioning, stabilization, resistance, and palpation for each score of the 6-point ordinal Medical Research Council scale.7,9-11 Three upper and three lower extremity muscles are graded in this protocol: shoulder abduction, elbow flexion, wrist extension, hip flexion, knee extension, and ankle dorsiflexion. These muscles were chosen based on the standard approach for evaluating patients for ICU-acquired weakness used in prior publications. 1,2.

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and critical illness frequently develop long-lasting muscle weakness. Manual muscle testing (MMT) is a standardized clinical examination commonly used to measure strength of peripheral skeletal muscle groups. This video demonstrates MMT using the 6-point Medical Research Council scale.

Teste muscular manual: um método de medir a força muscular Extremidade Aplicada à pacientes criticamente enfermos

Survivors of acute respiratory distress syndrome (ARDS) and other causes of critical illness often have generalized weakness, reduced exercise tolerance, ...

Medicina

Probe-based Confocal Laser Endomicroscopy of the Urinary Tract: The Technique

Probe-based confocal laser endomicroscopy (CLE) is an emerging optical imaging technology that enables real-time in vivo microscopy of mucosal surfaces during standard endoscopy. With applications currently in the respiratory1 and gastrointestinal tracts,2-6 CLE has also been explored in the urinary tract for bladder cancer diagnosis.7-10 Cellular morphology and tissue microarchitecture can be resolved with micron scale resolution in real time, in addition to dynamic imaging of the normal and pathological vasculature.7
The probe-based CLE system (Cellvizio, Mauna Kea Technologies, France) consists of a reusable fiberoptic imaging probe coupled to a 488 nm laser scanning unit. The imaging probe is inserted in the working channels of standard flexible and rigid endoscopes. An endoscope-based CLE system (Optiscan, Australia), in which the confocal endomicroscopy functionality is integrated onto the endoscope, is also used in the gastrointestinal tract. Given the larger scope diameter, however, application in the urinary tract is currently limited to ex vivo use.11 Confocal image acquisition is done through direct contact of the imaging probe with the target tissue and recorded as video sequences. As in the gastrointestinal tract, endomicroscopy of the urinary tract requires an exogenenous contrast agent&mdash;most commonly fluorescein, which can be administered intravenously or intravesically. Intravesical administration is a well-established method to introduce pharmacological agents locally with minimal systemic toxicity that is unique to the urinary tract. Fluorescein rapidly stains the extracellular matrix and has an established safety profile.12 Imaging probes of various diameters enable compatibility with different caliber endoscopes. To date, 1.4 and 2.6 mm probes have been evaluated with flexible and rigid cystoscopy.10 Recent availability of a &lt; 1 mm imaging probe13 opens up the possibility of CLE in the upper urinary tract during ureteroscopy. Fluorescence cystoscopy (i.e. photodynamic diagnosis) and narrow band imaging are additional endoscope-based optical imaging modalities14 that can be combined with CLE to achieve multimodal imaging of the urinary tract. In the future, CLE may be coupled with molecular contrast agents such as fluorescently labeled peptides15 and antibodies for endoscopic imaging of disease processes with molecular specificity.

Probe-based confocal laser endomicroscopy enables real-time microscopy of the human urinary tract during cystoscopy, providing dynamic, intravital imaging of pathological states such as bladder cancer with cellular resolution. Endomicroscopy may augment the diagnostic accuracy of standard white light endoscopy and provide intraoperative image guidance to improve surgical resection.

Sonda baseada Endomicroscopy Laser Confocal do Trato Urinário: A Técnica

Probe-based  confocal laser endomicroscopy (CLE) is an emerging optical imaging technology  that enables real-time in vivo microscopy of mucosal surfaces ...

A Modified Precipitation Method to Isolate Urinary Exosomes

Identification of biomarkers that allow early detection of kidney diseases in urine and plasma has been an area of active interest for several years. Urinary exosome vesicles, 40-100 nm in size, are released into the urine under normal conditions by cells from all nephron segments and may contain protein, mRNA and microRNA representative of their cell type of origin. Under conditions of renal dysfunction or injury, exosomes may contain altered proportions of these components, which may serve as biomarkers for disease. There are currently several methods available for isolation of urinary exosomes, and we have previously conducted an experimental comparison of each of these approaches, including three based on ultracentrifugation, one using a nanomembrane ultrafiltration concentrator, one using a commercial precipitation reagent and one using a modification of the precipitation technique using ExoQuick reagent that we developed in our laboratory. We found the modified precipitation method produced the highest yield of exosome particles, miRNA, and mRNA, making this approach suitable for the isolation of exosomes for subsequent RNA profiling. We conclude that the modified exosome precipitation method offers a quick, scalable, and effective alternative for the isolation of exosomes from urine. In this report, we describe our modified precipitation technique using ExoQuick reagent for isolating exosomes from human urine.

This manuscript describes a protocol for isolating exosomes from human urine using a modified precipitation technique.

Um método de precipitação de modificação para isolar exossomas urinária

Identification of biomarkers that allow early detection of kidney diseases in urine and plasma has been an area of active interest for several years. ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

Respostas Bexiga Distensão Evocado Visceromotor como um modelo para Bexiga dor em camundongos

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells and Imaging of Aortic Calcification and Inflammation

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world. Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and calcification, develop in the coronary arteries, aortic valve, aorta, and peripheral conduit arteries and are the hallmark of cardiovascular disease. In humans, imaging with computed tomography allows for the quantification of vascular calcification; the presence of vascular calcification is a strong predictor of future cardiovascular events. Development of novel therapies in cardiovascular disease relies critically on improving our understanding of the underlying molecular mechanisms of atherosclerosis. Advancing our knowledge of atherosclerotic mechanisms relies on murine and cell-based models. Here, a method for imaging aortic calcification and macrophage infiltration using two spectrally distinct near-infrared fluorescent imaging probes is detailed. Near-infrared fluorescent imaging allows for the ex vivo quantification of calcification and macrophage accumulation in the entire aorta and can be used to further our understanding of the mechanistic relationship between inflammation and calcification in atherosclerosis. Additionally, a method for isolating and culturing animal aortic vascular smooth muscle cells and a protocol for inducing calcification in cultured smooth muscle cells from either murine aortas or from human coronary arteries is described. This in vitro method of modeling vascular calcification can be used to identify and characterize the signaling pathways likely important for the development of vascular disease, in the hopes of discovering novel targets for therapy.

Vascular calcification is an important predictor of and contributor to human cardiovascular disease. This protocol describes methods for inducing calcification of cultured primary vascular smooth muscle cells and for quantifying calcification and macrophage burden in animal aortas using near-infrared fluorescence imaging.

Calcificação das células do músculo vascular liso e de imagem da aorta calcificação e inflamação

Cardiovascular disease is the leading cause of morbidity and mortality in the world.  Atherosclerotic plaques, consisting of lipid-laden macrophages and ...

Contractility Measurements of Human Uterine Smooth Muscle to Aid Drug Development

Discovery and characterization of novel pharmaceutical compounds or biochemical probes rely on robust and physiologically relevant assay systems. We describe methods to measure ex vivo myometrium contractility. This assay can be used to investigate factors and molecules involved in the modulation of myometrial contraction and to determine their excitatory or inhibitory actions, and hence their therapeutic potential in vivo. Biopsies are obtained from women undergoing cesarean section delivery with informed consent. Fine strips of myometrium are dissected, clipped and attached to a force transducer within 1 mL organ baths superfused with physiological saline solution at 37 &#176;C. Strips develop spontaneous contractions within 2&#8211;3 h under set tension and remain stable for many hours (&#62;6 h). Strips can also be stimulated to contract such as by the endogenous hormones, oxytocin and vasopressin, which cause concentration-dependent modulation of contraction frequency, force and duration, to more closely resemble contractions in labor. Hence, the effect of known and novel drug leads can be tested on spontaneous and agonist-induced contractions.
This protocol specifically details how this assay can be used to determine the potency of known and novel agents by measuring their effects on various parameters of human myometrial contraction. We use the oxytocin- and V1a receptor antagonists, atosiban and SR49059 as examples of known compounds which inhibit oxytocin- and vasopressin-induced contractions, and demonstrate how this method can be used to complement and validate pharmacological data obtained from cell-based assays to aid drug development. The effects of novel agonists in comparison to oxytocin and vasopressin can also be characterized. Whilst we use the example of the oxytocin/ vasopressin system, this method can also be used to study other receptors and ion channels that play a role in uterine contraction and relaxation to advance the understanding of human uterine physiology and pathophysiology.

This article describes experimental protocols to study ex vivo contractions of human myometrium and their application in drug discovery. This technique is used to improve the understanding of myometrial physiology and pathophysiology as well as to validate pharmacological data from novel research probes or drug leads.

Medições de contratilidade do humano músculo liso uterino para auxílio de desenvolvimento de drogas

Discovery and characterization of novel pharmaceutical compounds or biochemical probes rely on robust and physiologically relevant assay systems. We ...

Microelectrode Impalement Method to Record Membrane Potential from a Cannulated Middle Cerebral Artery

Membrane potential (Vm) of vascular smooth muscle cells determines vessel tone and thus blood flow to an organ. Changes in the expression and function of ion channels and electrogenic pumps that regulate Vm in disease conditions could potentially alter Vm, vascular tone, and blood flow. Thus, a basic understanding of electrophysiology and the methods necessary to accurately record Vm in healthy and diseased states are essential. This method will allow modulating Vm using different pharmacological agents to restore Vm. Although there are several methods, each with its advantages and disadvantages, this article provides protocols to record Vm from cannulated resistance vessels such as the middle cerebral artery using the microelectrode impalement method. Middle cerebral arteries are allowed to gain myogenic tone in a myograph chamber, and the vessel wall is impaled using high resistance microelectrodes. The Vm signal is collected through an electrometer, digitized, and analyzed. This method provides an accurate reading of the Vm of a vessel wall without damaging the cells and without changing the membrane resistance.

The primary goal of this article is to provide details of how to record membrane potential (Vm) from the middle cerebral artery using the microelectrode impalement method. The cannulated middle cerebral artery is equilibrated to gain myogenic tone, and the vessel wall is impaled using high resistance microelectrodes.

Método do impalement do microelétrodo para gravar o potencial da membrana de uma artéria cerebral média Cannulated

Membrane potential (Vm) of vascular smooth muscle cells determines vessel tone and thus blood flow to an organ. Changes in the expression and function of ...

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel interventions have remained elusive. This is likely due, in part, to a reliance on preclinical prevention models investigating the effects of genetic manipulations or pharmacological treatments on atherosclerosis development rather than the established disease. Also, results of these studies are often confounding because of the use of superficial lesion analyses and a lack of characterization of lesion cell populations. To help overcome these translational hurdles, we propose an increased reliance on intervention models that employ investigation of changes in cellular composition at a single cell level by immunofluorescent staining and confocal microscopy. To this end, we describe a protocol for testing a putative therapeutic agent in a murine intervention model including a systematic approach for animal dissection, embedding, sectioning, staining, and quantification of brachiocephalic artery lesions. In addition, due to the phenotypic diversity of cells within late-stage atherosclerotic lesions, we describe the importance of using cell-specific, inducible lineage tracing mouse systems and how this can be leveraged for unbiased characterization of atherosclerotic lesion cell populations. Together, these strategies may assist vascular biologists to more accurately model therapeutic interventions and analyze atherosclerotic disease and will hopefully translate into a higher rate of success in clinical trials.

We propose a standardized protocol to characterize the cellular composition of late-stage murine atherosclerotic lesions including systematic methods of animal dissection, tissue embedding, sectioning, staining, and analysis of brachiocephalic arteries from atheroprone smooth muscle cell lineage tracing mice.

Análise quantitativa da composição celular em lesões ateroscleróticas avançadas de ratos de rastreamento de linhagem celular músculo liso

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

Ultrasonography of the Adult Male Urinary Tract for Urinary Functional Testing

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting in a significant economic and quality of life burden. Transgenic and other mouse models have been developed to recreate various aspects of this multifactorial disease; however, methods to accurately quantitate urinary dysfunction and the effectiveness of new therapeutic options are lacking. Here, we describe a method that can be used to measure bladder volume and detrusor wall thickness, urinary velocity, void volume and void duration, and urethral diameter. This would allow for the evaluation of disease progression and treatment efficacy over time. Mice were anesthetized with isoflurane, and the bladder was visualized by ultrasound. For non-contrast imaging, a 3D image was taken of the bladder to calculate volume and evaluate shape; the bladder wall thickness was measured from this image. For contrast-enhanced imaging, a catheter was placed through the dome of the bladder using a 27-gauge needle connected to a syringe by PE50 tubing. A bolus of 0.5 mL of contrast was infused into the bladder until a urination event occurred. Urethral diameter was determined at the point of the Doppler velocity sample window during the first voiding event. Velocity was measured for each subsequent event yielding a flow rate. In conclusion, high frequency ultrasound proved to be an effective method for assessing bladder and urethral measurements during urinary function in mice. This technique may be useful in the assessment of novel therapies for BPH/LUTS in an experimental setting.

We describe the use of high frequency ultrasound with contrast imaging as a method to measure bladder volume, bladder wall thickness, urine velocity, void volume, void duration, and urethral diameter. This strategy can be used to assess voiding dysfunction and treatment efficacy in various mouse models of lower urinary tract dysfunction (LUTD).

Ultrassonografia do trato urinário masculino adulto para testes funcionais urinários

The incidence of clinical benign prostatic hyperplasia (BPH) and lower urinary tract symptoms (LUTS) is increasing due to the aging population, resulting ...

Palatable Western-style Cafeteria Diet as a Reliable Method for Modeling Diet-induced Obesity in Rodents

Obesity is rapidly increasing in incidence in developed and developing countries and is known to induce or exacerbate many diseases.&#160;The health burden of obesity and its comorbid conditions highlight the need for better understanding of its pathogenesis, yet ethical constraints limit studies in humans. To this end externally valid models of obesity in laboratory animals are essential for the understanding of being overweight and obesity.&#160;While many species have been used to model the range of changes that accompany obesity in humans, rodents are most commonly used. Our laboratory has developed a western-style cafeteria diet that consistently leads to considerable weight gain and markers of metabolic disease in rodents. The diet exposes rodents to a variety of highly palatable foods to induce hyperphagia, modeling the modern western food environment. This diet rapidly induces weight gain and body fat accumulation in rats allowing for the study of effects of overeating and obesity. While the cafeteria diet may not provide the same control over macronutrient and micronutrient profile as purified high-fat or high-fat, high-sugar diets, the cafeteria diet typically induces a more severe metabolic phenotype than that observed with purified diets and is more in line with metabolic disturbances observed in the overweight and obese human population.

This protocol describes the use of a highly palatable, western-style cafeteria diet to model overeating and obesity in rodents. Here, we provide a detailed outline of food selection, preparation and measurement, and explain methodological factors that assist in generating a robust and reproducible phenotype.

Palatável dieta de estilo ocidental cafeteria como um método confiável para modelagem de dieta induzida obesidade em roedores

Obesity is rapidly increasing in incidence in developed and developing countries and is known to induce or exacerbate many diseases.&#160;The health ...