Este estudo foi suportado por concessões do NIH RO1CA118678 e RO1CA127913, pela Fundação Família Sands, ea descoberta para curar Programa.

O Comitê de Cuidados e Uso de Animais Institucional da Universidade de Yale aprovar todo o trabalho in vivo descrito. A coleta de amostras foi realizada com o consentimento do paciente e aprovado pelo Comitê da Escola de Medicina da Universidade de Yale de Investigações Humanos. 1. Preparação de células de câncer de ovário humano <ol><li> Antes de preparar as células se certificar de todos os materiais necessários para a injeção intra-uterino descrito abaixo estão prontos e de fácil acesso. Injectar a suspensão de células, logo que ele está pronto. <ol><li> Crescer células cancerígenas fluorescentes marcadas na cultura. Usamos um F2-geração de CD44 humano + / MyD88 + células câncer epitelial de ovário, que já demonstraram a abrigar propriedades stemness como tumorigenicity, chemoresistance e alta capacidade de reparação tumor 14-19. Estas células foram geradas a expressar estavelmente mCherry fluorescência (F2-mCherry, Fig. 1) utilizando lentivírus produzido a partir da polietilenimina(PEI) protocolo de 20,21. </li><li> No dia da injecção, a colheita das células por tripsinização e lavar uma vez com solução salina tamponada com fosfato (PBS). </li><li> Determinar a contagem de células e suspender as células a 3 x 10 6 células / 50 ul em meio de crescimento adequado. Para as células de cancro do ovário usamos 160 RPMI com 10% de FBS. Mantenha as células na incubadora até que esteja pronto para injetar, mas não manter mais de 15 min. Isso é suficiente para uma injecção mouse. </li></ol></li></ol> 2. Injeção Intra-uterino de células de câncer de ovário humano em atímicos Nude Mice Note-se que o procedimento a seguir requer a ajuda de uma segunda pessoa. Além disso, uma vez que esta é a cirurgia de sobrevivência, usar instrumentos cirúrgicos estéreis. Este procedimento de cirurgia sobrevivência deve levar cerca de 10 a 15 min. <ol><li> Anestesiar o mouse usando 2% de isoflurano. 7 a 8 semanas de idade, ratinhos nus atímicos é tipicamente utilizado. </li><li> Verifique se o animal está completEly anestesiados por beliscar a almofada do pé usando os dedos ou uma pinça. O animal deve ser completamente não-responsivos à dor antes de iniciar a cirurgia. </li><li> Posicione o mouse anestesiado lado ventral em uma compressa de gaze estéril com a cabeça longe do investigador. </li><li> Aplicar pomada nos olhos com um aplicador de algodão-dica para evitar o ressecamento, enquanto sob anestesia. </li><li> Imediatamente inserir a cabeça de um sistema cone de nariz ligada a um vaporizador de isoflurano (Fig. 2A). Isto proporciona a anestesia durante o procedimento cirúrgico. </li><li> Desinfetar a esquerda (ou direita) lado do abdômen, utilizando almofadas de álcool (Fig. 2B), seguido por iodo em seguida, coloque um campo cirúrgico estéril sobre o local da cirurgia. </li><li> Utilizando uma tesoura cirúrgica fórceps estéreis e fazer uma incisão na pele de 1-2 cm no quadrante inferior esquerdo do rato (Fig. 2C). </li><li> Levantar o músculo e fazer uma incisão a fim de atingir o peritoneu. </li> &lt;li&gt; Dissecar o músculo oblíquo para expor a cavidade abdominal. </li><li> Localizar e identificar o corno uterino esquerdo (Fig. 2D). </li><li> Usando pinça hemostática estéril, prenda as duas anteriores e posteriores lados do chifre (Fig. 2E). Coloque a braçadeira anterior logo abaixo da trompa de Falópio e do grampo posterior logo acima do colo do útero. </li><li> Tem a segunda pessoa injetar a suspensão de células. Inserir a agulha contendo células, a 45 ° ângulo perpendicular à trompa (Fig. 2F). Muito lentamente injectar 50 jil de suspensão de células para o lúmen da trompa uterina. </li><li> Remova a agulha e solte a braçadeira anterior. </li><li> Libertar a braçadeira posterior e substituir o corno uterino na cavidade abdominal. </li><li> Feche o peritoneu utilizando uma sutura absorvível sintética e fechar a pele com um adesivo de tecido. </li><li> Retire o mouse do cone do nariz e coloque de volta na gaiola. Se necessário, altere os fundamentos para garantir um clean gaiola após a cirurgia. Certifique-se que todos os animais estão acordados e ativos antes de sair desacompanhado. </li><li> Fornecer Ibuprofeno em 0,11 mg / ml de água potável para as primeiras 48 horas após a cirurgia. Depois, substitua-o por água potável regular. <ol><li> Nota: que se ratinhos nus atímicos são utilizados e a pele é fechada com cola de tecido em vez de suturas, não é necessário separar os ratos após a cirurgia. Ratinhos SCID são mais agressivas e podem ter de ser separados. </li></ol></li><li> Acompanhar de perto o local da incisão para uma possível infecção devido a ferida aberta. </li></ol> 3. Detecção de início de carreira intra-peritoneal câncer de ovário por Live in vivo de imagens Determinar a presença da doença ip intra-peritoneal por live in vivo de imagens. Um animal sistema de rotação Multimodal (MARS) é usado neste protocolo. <ol><li> Acesse o software de captura de MARS de dentro do software MI. Este módulo oferececontrolo coordenado da MARS capturar configurações, aproveitando recursos de captura e análise do sistema de imagem. Otimize as configurações de captura individuais para cada modalidade utilizando uma visão única de imagem antes de desenvolver o protocolo de rotação na etapa 3.4. </li><li> Entrada predeterminado valores de captura. Para captura de fluorescência, use 10 segundos de exposição, 2 x 2 binning, f-stop 2.8, FOV 120 mm, ex: 550 nm, em: configuração de captura filtro de 600 nm. Para a captura de raios-X, utilizar uma exposição de 10 seg, 2 x 2 bins, 2,8 f-stop, FOV 120 mm, 35 kVp, 0,4 milímetros configuração de captura filtro Al. </li><li> Salve os parâmetros no passo 3.2 como arquivos de sessão individuais. </li><li> Criar um protocolo de sequência de rotação selecionando o botão Criar / Editar protocolos de janela adquirir a interface do sistema. </li><li> Selecione o arquivo de sessão de fluorescência salvo anteriormente e salvar como Primeiro Passo. Em seguida, selecione o arquivo de sessão de raios-X correspondente e salvar como Passo Dois. </li><li> Com Step One selecionado, use o conjunto de rotaçãoSérie a partir do menu pop-up de Captura de Imagem Antes de definir o ângulo inicial, alcance e incremento desejado para garantir a visualização perfeita de características. Os valores específicos incluem um ângulo inicial de -180 graus, uma faixa de 375 graus, e um incremento de 15 graus. </li><li> Salve o protocolo e clique no botão Done para inicializar o MARS e mapear as posições do motor de passo correspondentes a cada um dos incrementos angulares. </li><li> Executar a calibragem final como descrito abaixo para alinhar o ventral, dorsal e vistas laterais para o animal específico posicionado no suporte animal com graus de rotação específicos para ser utilizada pelo protocolo de software. </li><li> Anestesiar o rato utilizando uma mistura de ar medicinal e isoflurano a 2% a uma taxa de fluxo de 2 L / min. </li><li> Iniciar o alinhamento, selecionando o botão de visualização a partir do menu Acquire para abrir o guia Rotator. Use a modalidade de luz reflexiva ao invés do multiwavelength ou X-ramodalidades y para agilizar o processo. </li><li> Selecione a opção de carga Mouse e prosseguir com a série de menus de posicionamento. </li><li> Certifique-se de que o fim entubado da nosecone dobrável é no recesso nosecone e coloque o mouse na orientação ventral com a cabeça na nosecone. </li><li> Comece a calibração na posição de 0 graus com o lado ventral do animal voltada para baixo. Use os dois botões no sistema de rotação para posicionar o animal para que ele aparece centralizado na janela de visualização. </li><li> Repita o processo conforme solicitado para -180, - 90, 90 e 180 graus posições e clique em Concluído. </li><li> Executar o protocolo salvo anteriormente, clicando no botão Executar Protocolo da janela adquirir principal. Durante a execução do protocolo, observar uma janela de status fornecendo atualizações de status em tempo real para a captura atual, Exposição Duração e passo global protocolo. </li><li> Montar imagens individuais em um formato de filme usando oSoftware de rotação. Use os controles de vídeo para ajustar o brilho / contraste, transparência, e para definir a cor de exibição do sinal de fluorescência. </li><li> Exportar a seqüência final de imagens no formato de arquivo * .AVI para a apresentação. </li></ol> 4. Administração de 1ª e 2ª Quimioterapia Redonda <ol><li> Após a detecção do tumor ip por MARS, determinar a região inicial carga tumoral de interesse (ROI) usando posicionamento bidimensional padrão. Isto é realizado em uma bandeja animais transparente montado no sistema de imagem como descrito abaixo na Secção 5. Uma vez ROI inicial é determinada, administram 4 doses de 12 mg / kg ip O paclitaxel a cada três dias. O paclitaxel é obtido a partir Hospira Inc. em uma formulação pronta-a-go com cremaphor como veículo. Nós anteriormente demonstrado que este regime de tratamento tem uma actividade anti-tumoral significativa contra o modelo de xenoenxerto em comparação com o controle do veículo e induz a erradicação completa da detectável tumor carga 20. No entanto, devido à natureza da doença, tumores ip reincidência de alguns dias após o tratamento termina 20. </li><li> Monitorizar a resposta ao tratamento por imagem a cada 3 dias usando o posicionamento de duas dimensões padrão. </li><li> Após a quarta dose de Paclitaxel, classificar os ratinhos tendo como resposta completa (ROI inferior a 2.000), resposta parcial (redução de até 35% a partir do ROI inicial obtido a partir do passo 4.1, a doença estável (até 50% de aumento a partir da ROI inicial ), ou a progressão com o tratamento (aumento de mais de 50% de ROI inicial) com base no sinal fluorescente observado. </li><li> Para ratos com resposta completa, monitorar a recorrência por imagem a cada 3 dias. Uma vez que a recorrência é observado (ROI = rubricar ROI no passo 4.1), re-iniciar a segunda rodada de Paclitaxel como descrito em 4.1. </li><li> Em camundongos com doença parcial, doença estável, ou aqueles que evoluíram com o tratamento, re-iniciar a segunda rodada de Paclitaxel 3 dias após a 4ª dose dede paclitaxel. Da mesma forma, a imagem destes a cada três dias. </li></ol> Resposta 5. Monitoramento de Tratamento Usando Posicionamento Standard Two-dimensional <ol><li> Anestesiar os ratos para ser fotografada usando uma mistura de ar medicinal e isoflurano a 2% a uma taxa de fluxo de 2 L / min. </li><li> Coloque a cabeça dos ratos anestesiados em nosecones individuais na bandeja animais transparente dentro da câmara de imagem (Fig. 3). </li><li> Entrada de parâmetros pré-determinados para exposição de fluorescência (10 seg exposição, 2 x 2 bins, f-stop 2,8, FOV 120 mm, ex: 550 nm, em: 600 nm) e de raios-X (exposição de 20 seg, 2 x 2 bins, f-stop 2.8, FOV 120 mm, 35 kVp, 0,4 milímetros Al filtro). </li><li> Clique Exposé para capturar duas imagens em sequência. </li><li> Abra as imagens no software Bruker MI para inspeção visual e região de análise de interesse. </li></ol> 6. superposição de imagem e Análise Para fornecer uma comparação válida para boanálise visual e quantitativa th do processo de sequência de imagens curso de tempo todas as imagens do primeiro plano e de forma semelhante. <ol><li> Abra tanto a imagem de primeiro plano (ou seja, fluorescência) ea imagem de fundo no software e seleccione a função de telha a partir do menu Janela, na parte superior (Fig. 4A). </li><li> Para processar a imagem em primeiro plano; abra a aba Exibição de imagem na barra superior (Fig. 4A, seta vermelha) e defina os valores min / max de 260 e 5.000, respectivamente (Fig. 4A, seta azul) Nota: Faixa de exibição da imagem difere de estudo para estudo, dependendo das intensidades de sinal de fluorescência capturados em imagens. Imagens deve ser contrastado com um min / max que irá mostrar massas tumorais, ainda não mostram o fundo da autofluorescência do animal. </li><li> Próxima aba aberta Auto-ROIs no painel de navegação à esquerda (Fig. 4B, seta vermelha) e selecione o Novo Conjunto de ROI a partir do menu (Fig. 4C, um vermelhorrow). Ajuste as configurações para usar o algoritmo Limiar em 630 níveis de cinza e desmarque a restringir o tamanho máximo para garantir que todos os potenciais de ROI são gravados (Fig. 4C). Nota: As configurações de limite pode variar de estudo para estudo, dependendo das intensidades de sinal de fluorescência capturados em imagens. Imagens thresholded para quantificar sinal de massas tumorais ainda não medir sinal de fundo de autofluorescência do animal. </li><li> De dentro da Montra Imagem selecionar a função Mask. Agora somente a área correspondente aos pixels que têm valores iguais ou superiores ao valor limite de 630 níveis de cinza será exibida. </li><li> Para visualizar os resultados quantitativos selecione a guia Análise a partir da barra de menu superior e selecione a guia de visualização (Fig. 4D, setas vermelhas). </li><li> No menu Exibir, selecione o número de série, soma, média, e da área de caixas de seleção e clique em OK. </li><li> Salve a imagem para que os valores podem ser exportado ao longo de uma vez todas as imagens de fluorescência são processados. </li><li> Em seguida, destacar a imagem de raios-X e novamente abrir o Visor da imagem na barra de menu superior. Defina os valores para min, max e gama para dar a melhor representação visual do esqueleto mouse. Nota: Uma vez que nenhuma quantificação é realizada nas imagens de raios-X de cada imagem de raios-X individual da sequência de tempo podem ser processados ​​(ou seja, min, max e valores de gama) para produzir a melhor representação à procura desse conjunto de dados. </li><li> Mais uma vez a imagem de raios-X com destaque selecionar a caixa de seleção Overlay e escolha o nome do arquivo de imagem de fluorescência correspondente no menu drop (Fig. 4E) para baixo. </li><li> Para extrair a saída sobreposta, selecione a guia Anotações a partir do menu de navegação (Fig. 4B, seta azul) à esquerda. Selecione guias apropriadas para adicionar quaisquer dados ou texto adicionais e, finalmente, adicionar a barra de escala de intensidade de modo que os dados de intensidade de fluorescência pode ser rapidamente determinada a partir da imidade. </li><li> Uma vez que as anotações sejam concluídas destaque todos os objetos na página Anotações e selecione Copiar no menu Editar no topo e colar os dados de imagem superpostos para o arquivo adequado (por exemplo, Word, PowerPoint, e / ou Photoshop) para exibição. </li><li> Repita os passos 6.1- 6,11 para todos os pares de fluorescência de raios-X e imagens na seqüência. Certifique-se de seguros todas as imagens antes de fechá-los. </li><li> Para a quantificação final de abrir todas as imagens de fluorescência, ao mesmo tempo e escolha a partir do menu da telha ao longo da parte superior da janela. </li><li> Em seguida, selecione os documentos de exportação, todos abertos para ver os dados. Nota: Na ausência de programa Excel, desmarque a guia. MI irá gerar uma guia delimitado texto (ou seja, .txt) que podem ser transferidos para um computador adequado para uma análise mais aprofundada. </li></ol>

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J., Piquette-Miller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+sustained+and+intermittent+paclitaxel+therapy+on+tumor+repopulation+in+ovarian+cancer.">Effects of sustained and intermittent paclitaxel therapy on tumor repopulation in ovarian cancer.</a> Mol Cancer Ther. 7, 630-637 (2008).</li></ol>

Taxas de publicação para este artigo foram parcialmente patrocinado pela Bruker Corporation.

Nós descrevemos um protocolo para estabelecer um modelo animal ip humana câncer de ovário que imita o perfil clínico observado nos pacientes. Além disso, descreve-se a utilização de um dispositivo de rotação animal que aborda a limitação de sensibilidade de imagem 2D. Tomados em conjunto, estas técnicas podem servir como plataformas para descobrir novos compostos que podem direcionar o cancro do ovário recorrente resistente à quimioterapia. Além disso, esse modelo pode ser usado para entender a biologia da recidiva e progressão do cancro. Devido à sua localização retroperitoneal, em estágio inicial ip xenotransplantes de câncer de ovário são quase impossíveis de detectar através do exame físico do mouse. Na maioria dos casos, uma vez que a doença pode ser palpado, a carga tumoral é já significativa e, por conseguinte, limita a avaliação da eficácia do tratamento. A utilização de células marcadas por fluorescência permite-nos avaliar o estabelecimento de tumor ip em tempo real e, consequentemente, identificar o tempo óptimo para começar tratamento. De um modo semelhante, xenoenxertos fluorescentes marcado permitir a monitorização da resposta ao tratamento. Deve salientar-ip, contudo, que os tumores mais profundo que 1 cm não são tipicamente detectáveis ​​independentemente do sistema repórter. A utilização de células estaminais humanas de cancro do ovário 14,15,17,22 gera xenoenxertos que imitam o perfil clínico observado em pacientes. Como uma doença primária, o modelo é sensível ao Paclitaxel, mas a cessação do tratamento, eventualmente, conduz a doença recorrente resistente à quimioterapia. Apresentando as células através dos cornos uterinos, na densidade especificada na seção Protocolo geralmente resulta em tumores de ovário dentro de 10 dias, com alguns implantes peritoniais e, portanto, imita a doença em estágio inicial. A utilização de células marcadas por fluorescência permite-nos avaliar o estabelecimento de tumor ip em tempo real e, consequentemente, identificar o tempo óptimo para começar o tratamento. De um modo semelhante, xenoenxertos fluorescentes marcado permitir o acompanhamentof resposta ao tratamento. Se forem utilizados outros tipos de linhas celulares de cancro, do ovário ou de outra forma, é possível que este perfil não pode ser observado. Quando SKOV3 é utilizada, por exemplo, tem sido relatado que os tumores iniciais ip já são resistentes 23. No entanto, se marcado com um repórter tal como fluorescência, ip, a doença pode ser seguido em tempo real. Se outro repórter fluorescente é usado, é importante realizar imagem inicial com um controlo (nenhum tumor) dos animais. Isso permitirá a otimização do protocolo de imagem para atingir o melhor fundo para sinalizar a relação. Em nossa experiência, os camundongos nus normalmente têm alta de fundo quando fotografada usando as configurações de aquisição de GFP. É importante que as células injectadas intra-uterino estão em suspensão única para evitar o estabelecimento de tumores no útero. É também importante para evitar riscar a camada epitelial do útero, o que também facilita o enxerto da célula cancerosas no útero, produzindo assim um tumor intra-uterina em vez de uma doença ip. Além disso, durante a análise de dados, é importante para definir o valor de gama para 1. Isso assegura que a intensidade das imagens é linear e permite a comparação entre as imagens. Durante a aquisição de imagens MARS, é importante para garantir que a extremidade do cone de protecção, entubado é dobrável no recesso cone de protecção. O nosecone serve como um ponto de contato para o rato e, portanto, é necessário para a obtenção dos ângulos precisamente calibrados. Para protocolos de imagem mais longos (isto é, mais do que 1 hora), injectar 100 ul de solução salina estéril por via subcutânea para ajudar a prevenir a desidratação. A temperatura do corpo de animal deve ser mantida usando ar quente fluiu através do sistema a cerca de 37 ° C. Uma limitação do sistema MARS é que apenas um animal pode ser trabalhada ao mesmo tempo com um tempo total de funcionamento de cerca de 1 hora por animal. Em conclusão, podemos descrever o establishment de um modelo animal que imita o câncer de ovário, tanto doença primária e recorrente. Este modelo pode ser utilizado para avaliar a eficácia de modalidades de diagnóstico ou terapêuticos.

Os modelos animais são ferramentas indispensáveis ​​na pesquisa de ciências biológicas. No câncer particularmente, os dados adquiridos a partir de estudos com animais fornecem as informações necessárias para iniciar o teste de aplicações de diagnóstico ou terapêuticos em humanos 1-3. Modelos animais para tumores sólidos são classicamente estabelecida por via subcutânea, uma vez que fornece um meio fácil de medir a carga tumoral e avaliar a eficácia do tratamento sem ter que sacrificar os animais. De fato, os modelos intra-peritoneal (ip) exigem que os animais sejam sacrificados para detectar e medir as alterações no crescimento do tumor. No entanto, para cancros, tais ip cancro do ovário, modelos ortotrópicos oferecem a vantagem de se estudar a doença no seu próprio ambiente de 4-6. Para um tal modelo para ser de uso na avaliação da actividade anti-tumor, os métodos de imagem não-invasivos têm de ser desenvolvidas que permitem a quantificação da carga tumoral ip em ratos vivos. Um grande desafio nauso de modelos animais IP é a dificuldade em quantificar com precisão a carga tumoral pelo exame físico. Quantificação precisa dos tumores ip normalmente exigem os ratos para ser sacrificado para dissecção. Esta abordagem requer a utilização de um elevado número de animais, o que poderia ser sacrificados em diferentes pontos de tempo. Em adição ao custo, que introduz a variabilidade dos dados elevado, devido a variações inerentes dentro de cada animal. Não-invasiva em imageamento óptico vivo fornece uma abordagem mais adequada para monitorar a carga tumoral ip em camundongos vivos. Vários métodos de imagem não invasivos são atualmente utilizados em pesquisa pré-clínica para o acompanhamento do crescimento do tumor e respostas terapêuticas. Estes incluem a tomografia computadorizada (TC), ultra-sonografia (US), ressonância magnética (MRI), tomografia por emissão de pósitrons (PET) e de imagem óptico, tais como fluorescência e bioluminescência 12/07. TC é um processo de transmissão de imagem combina raios-X e computtecnologia er. Ela produz uma imagem de corte transversal de feixes detectados de fotões de alta energia, que passa através do corpo com uma velocidade diferente. EUA é um tipo de imagem de reflexão, que envia sons de alta frequência para o corpo criando ondas sonoras que são refletidas com velocidade diferente dependendo da densidade do tecido e reconhecido pelo computador para produzir uma imagem visual de. Ressonância magnética e PET são modalidades de imagem de emissões que usam energia magnética e partículas nucleares, respectivamente para produzir a imagem. RM cria um forte campo magnético que induz as células a produzir os seus próprios frequências de rádio, os quais são usados ​​para criar uma imagem, enquanto o PET requer uma câmara sensível para detectar a radioactividade do rotulado 7,9,11-2 fluorodeoxy-D-glicose administrada. Finalmente, imagiologia óptica baseia-se na detecção da emissão de luz de repórteres ou sondas fluorescentes ou 9,12 bioluminescentes. Neste relatório, nós descrevemos o uso de fluorescência, que oferecealgumas vantagens sobre os outros tipos de modalidades de imagem. Com imagens de fluorescência, as células podem ser geneticamente modificadas para expressar proteínas fluorescentes constantemente sem exigir a adição de um substrato à base de sondas ou de ligação, que são necessários para a bioluminescência e ressonância magnética, respectivamente. Repórteres de fluorescência também expressam tipicamente um sinal brilhante permitindo assim a utilização de um método de detecção menos sensível 8,12. Além disso, com a imagem de fluorescência, é possível detectar tumores menores do que 1 cm, o que não é realizável com CT 7-9. Finalmente, em contraste com a bioluminescência, sinal de fluorescência não requer um ambiente aeróbico e, portanto, o sinal não é limitado em ambientes hipóxicos, que estão normalmente presentes nos núcleos de tumores grandes 13. No entanto, como qualquer outra tecnologia, métodos de imagem baseados em fluorescente tem suas desvantagens. Uma delas é a incapacidade do machifótons de baixa energia gerada por ne para penetrar a uma profundidade suficiente. Assim, para minimizar a quantidade de fotões difusos dos tecidos dos animais deve ser fotografada em ângulos diferentes. Nós descrevemos um protocolo para estabelecer um câncer de ovário ip em camundongos nus e uma abordagem para monitoramento tumor ip que fornece imagens animal inteiro através da rotação. O rotador ângulos do rato para posições específicas e repetíveis diminuindo a interferência do tecido que ocorre frequentemente entre a fonte de luz e o detector. Isso otimiza a visualização de tumores menores, que podem passar despercebidos.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="705">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:203px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RPMI 1640 media</td>
			<td style="width:203px;">GIBCO, by Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">23400-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">fetal bovine serum</td>
			<td style="width:203px;">Gemini Bioproducts</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">T75 cell culture flasks</td>
			<td style="width:203px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">430641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PBS</td>
			<td style="width:203px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trypsin</td>
			<td style="width:203px;">GIBCO, by Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">25300-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:203px;">Butler Schein</td>
			<td style="width:119px;">NDC 11695-6776-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Alcohol pads</td>
			<td style="width:203px;">Fischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">06-669-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 ml syringe</td>
			<td style="width:203px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">309602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">25 gauge needle</td>
			<td style="width:203px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">synthetic absorbable suture</td>
			<td style="width:203px;">Covidien</td>
			<td style="width:119px;">SL-636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">tissue adhesive</td>
			<td style="width:203px;">Vetbond</td>
			<td style="width:119px;">1469SB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">surgical scissors</td>
			<td style="width:203px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82027-584</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">surgical forceps</td>
			<td style="width:203px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82027-386</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">hemostat</td>
			<td style="width:203px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82027-422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Paclitaxel</td>
			<td style="width:203px;">Hospira, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">NDC 61703-345-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ibuprofen</td>
			<td style="width:203px;">Walgreens</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Children&#39;s Ibuprofen 100 (100 mg/5ml)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Puralube Vet ointment</td>
			<td style="width:203px;">Pharmaderm</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">In vivo MS FX PRO</td>
			<td style="width:203px;">Bruker Corporation</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MI software</td>
			<td style="width:203px;">Bruker Corporation</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">athymic nude mice</td>
			<td style="width:203px;">Harlan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine model for non-invasive imaging to detect and monitor ovarian cancer recurrence

Câncer epitelial de ovário é a neoplasia maligna ginecológica mais letal nos Estados Unidos. Embora os doentes respondem inicialmente para o padrão actual de cuidados consistindo de citorredução cirúrgica e quimioterapia de combinação que consiste em compostos de platina e taxanos, quase 90% dos pacientes que se repetem dentro de poucos anos. Nestes pacientes o desenvolvimento da doença resistente à quimioterapia, limita a eficácia dos agentes de quimioterapia actualmente disponíveis e, por conseguinte, contribui para a elevada taxa de mortalidade. Para descobrir novas opções de tratamento que podem direcionar a doença recorrente, modelos animais apropriados que imitam de perto o perfil clínico dos pacientes com câncer de ovário recorrente são obrigatórios. O desafio na monitorização (ip) doença intra-peritoneal limita o uso de modelos ip e subcutânea, assim, a maioria dos xenoenxertos são estabelecidos. Nós desenvolvemos uma plataforma de imagem ótico sensível que permite a detecção e localização anatômica da massa tumoral ip. A plataforma inclui o usi de repórteres ópticas que se estendem a partir da gama de luz visível até perto do infravermelho, o que em combinação com 2-dimensional de raios X do co-registo pode fornecer a localização anatómica de sinais moleculares. A detecção pode ser significativamente melhorada pelo uso de um sistema de rotação que conduz o animal para várias posições angulares para imagiologia de 360 ​​graus, permitindo a identificação de tumores que não são visíveis na orientação única. Esta plataforma apresenta um modelo único para o crescimento do tumor monitor de forma não invasiva e avaliar a eficácia de novas terapias para a prevenção ou tratamento de cancro do ovário recorrente.

Imagens ao vivo não invasiva permite o acompanhamento da progressão do tumor ip do mesmo ratos através do tempo. Injecção intra-uterino de células ovarianas F2 mCherry-rotulados cancro usando o protocolo descrito gera ip tumores visíveis no dia 5 e no dia 32 carcinomatose (Fig. 5). A Figura 6 mostra a correlação das imagens obtidas com carcinomatose observada após sacrificar os ratinhos . Imagiologia utilizando MARS permite a detecção de tumores ip que, de outro modo ser perdido se a imagem é adquirida a partir de apenas um único plano. Figura 7 (painel superior) mostra que, mesmo em ratinhos de controlo com carga tumoral significativa, o tamanho do tumor pode ser subestimada, dependendo do ângulo a imagem foi tomada de. A capacidade de garantir que a massa tumoral não é perdido ou subestimado é ainda mais importante na conclusão da 1ª rodada de quimioterapia, quando os animais são classificados como qualquer um responder completoer, que responde parcial, ou de não-resposta (Fig. 7 painel do meio). Da mesma forma, durante a terapia de manutenção é de extrema importância para detectar tumores muito pequenos recorrentes para designar adequadamente dias de recorrência, que define intervalo livre de progressão (Fig. 7 painel do meio). Avaliação quantitativa da carga tumoral é otimizada através da rotação animal. A rotação do animal para ângulos que irão minimizar a profundidade de excitação e emissão de luz viaja através irá permitir a captura de mais exacta de fótons da fluorescência, o que é indicativo da quantidade de células tumorais e, consequentemente, a carga do tumor. Assim, a quantificação é optimizado para tumores específicos no animal, dependendo da sua posição na sequência de rotação. Ao apresentar imagens de conjuntos de dados de rotação, é importante para atribuir as imagens de um min / max intervalo de contraste de imagem que vai exibir de forma eficaz todas as massas de tumor, permitindo ao mesmo tempo visu<html> al delimitação de massas tumorais individuais. Para este estudo, faixa de contraste ideal foi encontrado para ser um mínimo de 50 polegadas e um máximo de 1.200 contagens. Estes valores podem ser vistos como uma diretriz para outros estudos, no entanto, varia de contraste ideal será diferente de estudo para estudo, dependendo do nível tumor fardo, fluorescentes níveis de expressão de peptídeo em células, configuração de sistema de imagem e definições de captura. <img alt="A Figura 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig1highres.jpg" width="600" /> Figura 1: células de câncer de ovário F2 expressar de forma estável mCherry fluorescência. (A) imagem de fase; (B) imagem de fluorescência; (C) sobreposição de A e B. Note-se que 100% das células expressam o repórter de fluorescência. &quot;width =&quot; 600 s.jpg &quot;/&gt; Figura 2: injeção intra-uterino de células de câncer de ovário. (A) A anestesia é administrada continuamente por meio de um cone de nariz; (BE) de pele é incisada para localizar e prender o corno uterino; (F) as células cancerosas são injectados lentamente para dentro do lúmen do útero. <img alt="A Figura 3" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig3highres.jpg" width="600" /> Figura 3: (A) imagem de 2D com uma temperatura controlada e um circuito fechado ventilado bandeja animais transparente no interior da câmara de imagem; (B, C) ​​bandeja está equipado com cones do nariz para entregar a anestesia e pode armazenar até cinco camundongos. <img alt="Figura 4" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig4highres.jpg" width="600" /> &lt;fortes&gt; Figura 4: painéis de janela representativas tomadas a partir do software de análise para auxiliar na análise de dados. Por favor, veja o texto de explicação. <img alt="A Figura 5" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig5highres.jpg" width="600" /> Figura 5: Detecção de mCherry fluorescência co-localizada com raio-X em sequência de imagens longitudinal. Três ratos com tumor ip são seguidos ao longo do tempo para avaliar a progressão do tumor ip. Note-se que a progressão do tumor podem variar. Figura é uma imagem representativa de 3 camundongos com diferentes taxas de progressão do tumor e, portanto, variando a carga tumoral através do tempo. <img alt="A Figura 6" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig6highres.jpg" width="600" /> Figura 6: Correlação entre a carga tumoral ip (painel superior) e sobreposição de fluorescência / raio-X image (painel inferior). Cerca de 32 dias após a injecção de F2-mCherry células de cancro do ovário, 2D-formação de imagens é realizada e os ratinhos sacrificados para correlacionar a carga tumoral real com a imagem adquirida. As setas vermelhas apontam para a carga tumoral. <img alt="Figura 7" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51815/51815fig7highres.jpg" width="600" /> Figura 7: Rotação conjuntos de dados de imagem, permitindo multi-angular e a detecção de tumores em controlo (painel superior), Paclitaxel tratado (painel do meio), e os ratinhos recorrente (painel inferior). A Figura mostra a imagem de um único ratinho por painel, uma vez que é rodado utilizando o sistema MARS. Note-se que, mesmo nos ratos de controlo com carga tumoral significativa, o tamanho do tumor pode ser subestimada, dependendo do ângulo da imagem foi feita a partir de.

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Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer.

Modelo murino de imagem não invasivo para detectar e monitorar o cancro do ovário Recorrência

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

murine-model-for-non-invasive-imaging-to-detect-monitor-ovarian

Research

JoVE Journal

Medicine

12.0K visualizações.  Yale University School of Medicine. We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer. 

Vídeo: Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Um modelo ortotópico de câncer de bexiga murino

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Medicina

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

Muscle strains are one of the most common complaints treated by physicians. A muscle injury is typically diagnosed from the patient history and physical exam alone, however the clinical presentation can vary greatly depending on the extent of injury, the patient's pain tolerance, etc. In patients with muscle injury or muscle disease, assessment of muscle damage is typically limited to clinical signs, such as tenderness, strength, range of motion, and more recently, imaging studies. Biological markers, such as serum creatine kinase levels, are typically elevated with muscle injury, but their levels do not always correlate with the loss of force production. This is even true of histological findings from animals, which provide a "direct measure" of damage, but do not account for all the loss of function. Some have argued that the most comprehensive measure of the overall health of the muscle in contractile force. Because muscle injury is a random event that occurs under a variety of biomechanical conditions, it is difficult to study. Here, we describe an in vivo animal model to measure torque and to produce a reliable muscle injury. We also describe our model for measurement of force from an isolated muscle in situ. Furthermore, we describe our small animal MRI procedure.

An in vivo Rodent Model of Contraction-induced Injury and Non-invasive Monitoring of Recovery

An in vivo animal model of injury is described. The method takes advantage of the subcutaneous position of the fibular nerve. Velocity, timing of muscle activation, and arc of motion are all pre-determined and synchronized using commercial software. Post injury changes are monitored in vivo using MR imaging/spectroscopy.

Um In vivo Modelo de Contração de roedores induzida por lesões e não-invasivos acompanhamento da recuperação

Muscle strains are one of the most  common complaints treated by physicians. A muscle injury is typically diagnosed from the patient history and  physical ...

Non-invasive Imaging of Acute Allograft Rejection after Rat Renal Transplantation Using 18F-FDG PET

The number of patients with end-stage renal disease, and the number of kidney allograft recipients continuously increases. Episodes of acute cellular allograft rejection (AR) are a negative prognostic factor for long-term allograft survival, and its timely diagnosis is crucial for allograft function 1. At present, AR can only be definitely diagnosed by core-needle biopsy, which, as an invasive method, bares significant risk of graft injury or even loss. Moreover, biopsies are not feasible in patients taking anticoagulant drugs and the limited sampling site of this technique may result in false negative results if the AR is focal or patchy. As a consequence, this gave rise to an ongoing search for new AR detection methods, which often has to be done in animals including the use of various transplantation models.
Since the early 60s rat renal transplantation is a well-established experimental method for the examination and analysis of AR 2. We herein present in addition small animal positron emission tomography (PET) using 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) to assess AR in an allogeneic uninephrectomized rat renal transplantation model and propose graft FDG-PET imaging as a new option for a non-invasive, specific and early diagnosis of AR also for the human situation 3. Further, this method can be applied for follow-up to improve monitoring of transplant rejection 4.

Non-invasive Imaging of Acute Allograft Rejection after Rat Renal Transplantation Using 18F-FDG PET

We herein present a rat renal transplantation model to non-invasively assess acute allograft rejection using positron emission tomography with 18F-fluorodeoxyglucose.

Imagem não invasivo de rejeição do enxerto aguda após Rat Transplante Renal Usando<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG PET

The number of patients with end-stage renal  disease, and the number of kidney allograft recipients continuously increases.  Episodes of acute cellular ...

Non-invasive Optical Measurement of Cerebral Metabolism and Hemodynamics in Infants

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can accurately screen for brain injury, monitor injury evolution, or assess response to therapy. The energy used by neurons is derived largely from tissue oxidative metabolism, and neural hyperactivity and cell death are reflected by corresponding changes in cerebral oxygen metabolism (CMRO2). Thus, measures of CMRO2 are reflective of neuronal viability and provide critical diagnostic information, making CMRO2 an ideal target for bedside measurement of brain health.
Brain-imaging techniques such as positron emission tomography (PET) and single-photon emission computed tomography (SPECT) yield measures of cerebral glucose and oxygen metabolism, but these techniques require the administration of radionucleotides, so they are used in only the most acute cases.
Continuous-wave near-infrared spectroscopy (CWNIRS) provides non-invasive and non-ionizing radiation measures of hemoglobin oxygen saturation (SO2) as a surrogate for cerebral oxygen consumption. However, SO2 is less than ideal as a surrogate for cerebral oxygen metabolism as it is influenced by both oxygen delivery and consumption. Furthermore, measurements of SO2 are not sensitive enough to detect brain injury hours after the insult 1,2, because oxygen consumption and delivery reach equilibrium after acute transients 3. We investigated the possibility of using more sophisticated NIRS optical methods to quantify cerebral oxygen metabolism at the bedside in healthy and brain-injured newborns. More specifically, we combined the frequency-domain NIRS (FDNIRS) measure of SO2 with the diffuse correlation spectroscopy (DCS) measure of blood flow index (CBFi) to yield an index of CMRO2 (CMRO2i) 4,5.
With the combined FDNIRS/DCS system we are able to quantify cerebral metabolism and hemodynamics. This represents an improvement over CWNIRS for detecting brain health, brain development, and response to therapy in neonates. Moreover, this method adheres to all neonatal intensive care unit (NICU) policies on infection control and institutional policies on laser safety. Future work will seek to integrate the two instruments to reduce acquisition time at the bedside and to implement real-time feedback on data quality to reduce the rate of data rejection.

We combined frequency-domain near-infrared spectroscopy measures of cerebral hemoglobin oxygenation with diffuse correlation spectroscopy measures of cerebral blood flow index to estimate an index of oxygen metabolism. We tested the utility of this measure as a bedside screening tool to evaluate the health and development of the newborn brain.

Não-invasivo de medição óptica do metabolismo cerebral e Hemodinâmica em Lactentes

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality  and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can  accurately ...

Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

Avaliação não invasiva da função microvascular e endotelial

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

Protocols for Assessing Radiofrequency Interactions with Gold Nanoparticles and Biological Systems for Non-invasive Hyperthermia Cancer Therapy

Cancer therapies which are less toxic and invasive than their existing counterparts are highly desirable. The use of RF electric-fields that penetrate deep into the body, causing minimal toxicity, are currently being studied as a viable means of non-invasive cancer therapy. It is envisioned that the interactions of RF energy with internalized nanoparticles (NPs) can liberate heat which can then cause overheating (hyperthermia) of the cell, ultimately ending in cell necrosis.
In the case of non-biological systems, we present detailed protocols relating to quantifying the heat liberated by highly-concentrated NP colloids. For biological systems, in the case of in vitro experiments, we describe the techniques and conditions which must be adhered to in order to effectively expose cancer cells to RF energy without bulk media heating artifacts significantly obscuring the data. Finally, we give a detailed methodology for in vivo mouse models with ectopic hepatic cancer tumors.

We describe the protocols used to investigate the interactions of 13.56 MHz radiofrequency (RF) electric-fields with gold nanoparticle colloids in both non-biological and biological systems (in vitro/vivo). These interactions are being investigated for applications in cancer therapy.

Protocolos para Avaliação de radiofreqüência Interações com Nanopartículas de Ouro e Sistemas biológicos para terapia não-invasiva Câncer Hipertermia

Cancer therapies  which are less toxic and invasive than their existing counterparts are highly  desirable. The use of RF electric-fields that penetrate ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

Um Modelo murino de próstata humana Metástase Ortotópico

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to return to normal in a large majority of patients2, which is mainly due to current lack of clinical treatment for acute stroke. This necessitates understanding the physiological effects of cerebral ischemia on brain tissue over time and is a major area of active research. Towards this end, experimental progress has been made using rats as a preclinical model for stroke, particularly, using non-invasive methods such as 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) coupled with Positron Emission Tomography (PET) imaging3,10,17. Here we present a strategy for inducing cerebral ischemia in rats by middle cerebral artery occlusion (MCAO) that mimics focal cerebral ischemia in humans, and imaging its effects over 24 hr using FDG-PET coupled with X-ray computed tomography (CT) with an Albira PET-CT instrument. A VOI template atlas was subsequently fused to the cerebral rat data to enable a unbiased analysis of the brain and its sub-regions4. In addition, a method for 3D visualization of the FDG-PET-CT time course is presented. In summary, we present a detailed protocol for initiating, quantifying, and visualizing an induced ischemic stroke event in a living Sprague-Dawley rat in three dimensions using FDG-PET.

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Brain damage resulting from cerebral ischemia may be non-invasively imaged and studied in rats using pre-clinical positron emission tomography coupled with the injectable radioactive probe, 18F-fluorodeoxyglucose. Further, the use of modern software tools that include volume of interest (VOI) brain templates dramatically increase the quantitative information gleaned from these studies.

Imagem não invasivo e Análise de Isquemia Cerebral em Ratos de Vida Usando Positron Emission Tomography com<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a valuable tool for understanding ovarian cancer, their use has many limitations. These include the lack of heterogeneity and the plethora of genetic alterations associated with extended in vitro passaging.&#160;Here we describe a method that allows for rapid establishment of primary ovarian cancer cells form solid clinical specimens collected at the time of surgery. The method consists of subjecting clinical specimens to enzymatic digestion for 30 min. The isolated cell suspension is allowed to grow and can be used for downstream application including drug screening. The advantage of primary ovarian cancer cell lines over established ovarian cancer cell lines is that they are representative of the original specific clinical specimens they are derived from and can be derived from different sites whether primary or metastatic ovarian cancer.

This study describes a detailed method for isolation and characterization of primary ovarian cancer cells from solid clinical specimens. Ovarian cancer clinical specimens are subjected to enzymatic digestion to obtain viable, fibroblast-free epithelial ovarian cancer (EOC) cells highly suitable for downstream applications.

Método para obtenção de células do cancro do ovário primárias de amostras sólidas

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

A Methodological Approach to Non-invasive Assessments of Vascular Function and Morphology

The endothelium is the innermost lining of the vasculature and is involved in the maintenance of vascular homeostasis. Damage to the endothelium may predispose the vessel to atherosclerosis and increase the risk for cardiovascular disease. Assessments of peripheral endothelial function are good indicators of early abnormalities in the vascular wall and correlate well with assessments of coronary endothelial function. The present manuscript details the important methodological steps necessary for the assessment of microvascular endothelial function using laser Doppler imaging with iontophoresis, large vessel endothelial function using flow-mediated dilatation, and carotid atherosclerosis using carotid artery ultrasound. A discussion on the methodological considerations for each of the techniques is also presented, and recommendations are made for future research.

The present article describes the methodological considerations for several non-invasive assessments of vascular function and morphology that are commonly used in medical research to assess different stages of atherosclerosis.

Uma abordagem metodológica para avaliações não-invasivas de função vascular e Morfologia

The endothelium is the innermost lining of the vasculature and is involved in the maintenance of vascular homeostasis.  Damage to the endothelium may ...