A pesquisa em nosso laboratório atualmente é financiada pelo Conselho australiano de pesquisa (arco, DP170100008 e DP180100144), nos força aérea escritório de investigação científica (AFOSR, FA9550-15-1-0188) e Stiftelsen Olle Engkvist Byggmästare (2016/348). Agradecemos por membros do laboratório que contribuíram para o desenvolvimento de ações hoverfly, Cederholms Lantbruk e M C & T L verde & filho para acesso a esterco de vaca e hoverflies em suas fazendas, e permite que a Adelaide e Uppsala Botanic Gardens para coleta e suporte contínuo.

1. a criação em cativeiro E. tenax colônia
<ol><li>Estabelecer a colônia através da coleção de larvas maduras (etapa 1.2) ou, alternativamente, através da coleção de hoverflies de voo livre (etapa 1.3).</li>
	<li>
Coleção de larvas maduras
	<ol>
<li>Coletar o segundo e terceiro estádio as larvas dos poços de estrume em fazendas de gado. Nota: As larvas maduras são mais fáceis de encontrar durante o início da sua fase migratória, como eles procuram activamente um ambiente escuro e seco para empupar. Isto tende a ser perto das fronteiras de estrume poços onde o estrume úmido é perto de áreas mais secas, que contém grandes quantidades de palha. Foram coletados sob permissão de uma fazenda de gado, perto de Uppsala, Suécia.</li>
		<li>Conforme descrito no passo 3.2 da retaguarda larvas maduras em estrume de vaca.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Coleção de Hoverflies selvagens
	<ol>
<li>Recolher hoverflies selvagem pela rede no campo, geralmente de jardins botânicos e parques onde há uma abundância de plantas. Nota: Nós coletamos sob permissão de vários locais, incluindo qualquer um dos jardins botânicos Adelaide três, uma fazenda de gado leiteiro, em Myponga, sul da Austrália e em diversos jardins botânicos e parques ao longo de Uppsala, Suécia.</li>
		<li>Campo casa recolhidos hoverflies conforme descrito na etapa 2.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. habitação e a longo prazo de manutenção de Hoverflies
<ol><li>Hoverflies em sacos plásticos de 30 cm x 45 cm para grupos de 20 ou menos, ou em um inseto gaiola de criação da casa (25 x 25 cm x 25 cm) para grupos maiores.</li>
	<li>Providenciar comida e água ad libitum, sob a forma de grãos de 10-20 de abelha pólen e 2-3 mL mel colocada em cima de várias bolas de algodão úmido. Nota: Para a habitação em sacos de plástico, é importante que as bolas de algodão são húmidas mas não excessivamente saturadas, como qualquer acúmulo de água dentro do saco pode ser prejudicial para as taxas de sobrevivência. Por outro lado, para habitação em gaiolas de criação de insetos, os lados de malha permitem evaporação significativa ocorrer. Bolas de algodão, portanto, devem ser colocadas em um recipiente raso e ser totalmente saturadas.<ol>
<li>Deixe hoverflies para alimentar por 6 horas à temperatura ambiente.</li>
		<li>Coloque hoverflies com comida e água na sua habitação, no frigorífico a 8-10 ° C e mantenha-se na mais completa escuridão. Nota: Armazenar hoverflies 8-10 ° c na escuridão faz com que o hoverflies entrar em um estado de hibernação, com uma redução da atividade e a taxa metabólica.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cada 3-4 dias retire hoverflies da geladeira, assim quebrando a hibernação artificial e permitindo tanto alimentação e aliciamento para ocorrer.<ol>
<li>Transferência de hoverflies para um novo saco de plástico ou uma gaiola limpa inseto com alimentos frescos e água. Esta transferência também pode ser feita manualmente, para pequenas quantidades de moscas, ou utilizando phototaxis, para números maiores.</li>
		<li>Para utilizar phototaxis, junte-se a uma gaiola limpa inseto para a antiga, garantir que haja uma abertura para o hoverflies para mover-se livremente entre os dois sem escapar. Cobrir a gaiola de inseto idade com um tecido opaco. O hoverflies se moverá em direção à luz e na gaiola limpa insecto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Permitir que hoverflies alimentar e noivo à temperatura ambiente durante 6 h.</li>
	<li>Retorne hoverflies, com a comida e a água na sua habitação, em geladeira a 8-10 ° C na mais completa escuridão. Isso reinicie a hibernação artificial do hoverflies.</li>
	<li>Continue a quebrar cíclico de hibernação, a cada 3-4 dias, para garantir a saúde e a longevidade de hoverflies para a duração do seu cativeiro.</li>
</ol>3. laboratório crescimento de E. tenax
<ol><li>Traseiras larvas maduras coletadas de fazendas de gado (passo 3.2) ou alternativamente traseira ovos postos por fêmeas capturadas selvagens gravid (passo 3.3).</li>
	<li>
Laboratório de criação de larvas maduras das fazendas de gado
	<ol>
<li>Coloque as larvas coletadas em estrume de vaca de fazendas de gado em baldes de 30 L.</li>
		<li>Coloque o balde, contendo larvas maduras, dentro de uma caixa maior ou saco (volume mínimo de 50-60 L) e coloque as aparas de madeira de 20-30 L até a altura da borda da caçamba. Nota: Isto permite 3rd ínstar larvas para invadir as aparas de madeira e empupar.</li>
		<li>Pendure um mosquiteiro em camadas dobro do teto permitindo que ele fique pendurado as caixas e/ou sacos, garantindo assim que as larvas nem qualquer hoverflies emergentes pode escapar. Nota: Como medida de precaução, fita adesiva dupla face pode ser usada para cercar a configuração, como qualquer escape larvas vão ficar preso e pupate nesta fita. Se isso acontecer, remova as pupas antes da eclosão.</li>
		<li>Tanto as larvas e pupas em temperatura ambiente (21,5 ± 2,5 ° C), da casa e expor ou luz solar indireta, bem como as luzes da sala durante o expediente ou manter-se em um ciclo de luz: escuro de 12 h luz: 12h escuro. Nota: A exposição à luz 24 h pode ser prejudicial para as taxas de sobrevivência. Para larvas coletadas em vez de pupa de fazendas de gado variarão de 1 - 20 dias após a colheita, dependendo de sua maturidade no momento da coleta.</li>
		<li>Fornecer comida e água dentro o enforcamento mosquito net recinto (como preparado no passo 2.2) antes da data esperada eclosão e substituir a cada 2-3 dias. Eclosão ocorrerá de 7 a 10 dias após a pupação.</li>
		<li>Permitir que emergentes hoverflies para alimentar por 6 horas à temperatura ambiente antes de colocá-los na carcaça conforme descrito na etapa 2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Laboratório de criação de ovos postos por Gravid fêmeas selvagens capturados
	<ol>
<li>Verifique hoverfly habitação para ovos, tanto antes de mudar de habitação (etapa 2) e antes de retorná-los para o frigorífico. Oviposição por selvagens capturados gravid fêmeas ocorre em ambos os 8-10 ° C e à temperatura ambiente.<ol>
<li>Coloque os ovos em uma 100 x 20 mm placa de Petri contendo 70 mL de água da torneira e manter à temperatura ambiente até que ocorra a eclosão, geralmente 2-3 dias após a oviposição.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Lugar dos ovos as larvas em um balde de 2,3 L contendo 1L de fezes frescas de coelho e 1 L de água da torneira.<ol>
<li>Verifique o chorume cada 2-3 dias e adicionar água da torneira adicional conforme necessário, para garantir que o chorume não secar antes das 3rd ínstar larvas emergem.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Coloque o balde, contendo as larvas no chorume de fezes de coelho, dentro de uma caixa maior (volume mínimo 30 L) contendo 20 L de aparas de madeira. Certifique-se das que aparas de madeira são até a altura da borda da caçamba. Nota: Isto permite 3rd ínstar larvas para invadir as aparas de madeira e empupar.<ol>
<li>Coloque um mosquiteiro duplo em camadas sobre a caixa para garantir que as larvas nem qualquer hoverflies emergentes pode escapar.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Tanto as larvas e pupas em temperatura ambiente (21,5 ± 2,5 ° C), da casa e expor ou luz solar indireta, bem como as luzes da sala durante o expediente ou manter-se em um ciclo de luz: escuro de 12 h luz: 12h escuro. Nota: A exposição à luz 24 h pode ser prejudicial para as taxas de sobrevivência.</li>
		<li>Espera que a pupa de ocorrer após 15-20 dias. Coletar as pupas e coloque em uma gaiola de inseto, permitindo hoverflies para eclose lá.</li>
		<li>Fornecer água e comida (como preparado no passo 2.2), antes da data esperada eclosão - eclosão irá ocorrer de 6 a 10 dias após a pupação - e substituir a cada 2-3 dias.</li>
		<li>Permitir que emergentes hoverflies para alimentar por 6 horas à temperatura ambiente antes de colocá-los em habitação, conforme descrito na etapa 2. Nota: Tanto a pupa de larvas e a eclosão de pupas podem ser adiadas por armazenamento na escuridão a 8-10 ° C. Para essa finalidade, armazene as larvas no chorume de fezes de coelho e pupas em aparas de madeira.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Goulard, R., Julien-Laferriere, A., Fleuriet, J., Vercher, J. L., Viollet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+evidence+for+a+visual+and+proprioceptive+control+of+head+roll+in+hoverflies+(Episyrphus+balteatus).">Behavioural evidence for a visual and proprioceptive control of head roll in hoverflies (Episyrphus balteatus).</a> Journal of Experimental Biology. 218 (Pt 23), 3777-3787 (2015).</li><li>Dyakova, O., Lee, Y. J., Longden, K. D., Kiselev, V. 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Series B, Biological Sciences. 268, 1071-1080 (2001).</li><li>Holland, B., Rice, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+removal+of+sexual+selection+reverses+intersexual+antagonists+coevolution+and+removes+a+reproductive+load.">Experimental removal of sexual selection reverses intersexual antagonists coevolution and removes a reproductive load.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 96, 5083-5088 (1999).</li><li>Thyselius, M., Nordstr&#246;m, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hoverfly+locomotor+activity+is+resilient+to+external+influence+and+intrinsic+factors.">Hoverfly locomotor activity is resilient to external influence and intrinsic factors.</a> Journal of Comparative Physiology A. 202 (1), 45-54 (2016).</li><li>Heal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colour+patterns+of+Syrphidae:+1.+Genetic+Variation+in+the+dronefly+Eristalis+tenax.">Colour patterns of Syrphidae: 1. Genetic Variation in the dronefly Eristalis tenax.</a> Heredity. 42 (2), 223-236 (1979).</li><li>Ireland, S., Turner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+larval+crowding+and+food+type+on+the+size+and+development+of+the+blowfly,+Calliphora+vomitoria.">The effects of larval crowding and food type on the size and development of the blowfly, Calliphora vomitoria.</a> Forensic Science International. 159, 175-181 (2006).</li><li>Dolley, W. L., Golden, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+sex+and+age+on+the+temperature+at+which+reversal+in+reaction+to+light+in+Eristalis+tenax+occurs.">The effect of sex and age on the temperature at which reversal in reaction to light in Eristalis tenax occurs.</a> Biology Bulletin. 92 (3), 178-186 (1947).</li></ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Usando nossas técnicas (Figura 1) hoverflies foram mantidos no laboratório por um período de mais de 1 ano e utilizados com sucesso em experimentos comportamentais após 7 meses em cativeiro39. Com efeito, mesmo que pareça contra-intuitivo, mantendo o hoverflies em um ambiente mais natural, sob a luz de h 12:12 h condições de escuras, à temperatura ambiente, substancialmente diminui sua expectativa de vida de 2-3 meses. Manutenção E. tenax em nosso ciclo de hibernação artificial para mais de um ano é significativamente maior do que o anterior tentativas usando protocolos diferentes (77 dias33, 4 meses9, 18 semanas30). O principal fator que influencia este aumento da longevidade é provável que o uso de hibernação artificial a 8-10 ° C. Ciclicamente quebrando a hibernação, a cada 3-4 dias (etapa 2, Figura 1), permitimos que hoverflies para alimentar e lavamo-nos, mantendo assim o estado nutricional e o bem-estar do hoverflies, como evidenciado por um aumento observado em peso ( Figura 4) e nenhuma alteração na atividade locomotora, mesmo após longos períodos em cativeiro (Figura 3e ver39). Na verdade, relatos na literatura de tentativas malsucedidas de hibernação artificial não quebrar o ciclo de hibernação, levando assim ao aumento da mortalidade e a presença de molde9.
Além disso, existe alguma controvérsia em toda a literatura sobre a prestação de pólen como fonte de alimento. Vários trabalhos afirmam que o pólen de abelha não é suficiente, especificamente para oviposição, e apenas a disposição de pólen seco ou com efeito fresco é adequado9,29. Nossos resultados indicam que complementando o pólen de abelha com mel e água, vemos tanto a longevidade e a oviposição, mesmo após longos períodos de cativeiro, com um aumento de peso, visto em ambos os sexos (Figura 4) e oviposição ainda ocorrem em fêmeas depois de mais de 5 meses em cativeiro39. Este aumento da longevidade nos permite estudar os comportamentos de hoverflies em todas as fases da vida.
No campo, hoverflies femininos são fertilizados antes da hibernação sazonal e permanecem em diapausa reprodutiva, onde o esperma é armazenada e oócitos permanecem subdesenvolvidos, até a primavera de28. Dado que uma fêmea típica é capaz de 3000 ovos em 60 dias29, a criação desses ovos, portanto, é uma maneira rápida e eficiente para aumentar a nossa população em cativeiro. No entanto, nossa compreensão atual dos fatores que levam ao desenvolvimento do oócito após um período de hibernação são limitadas. Temperatura, umidade, intensidade de luz e estado nutricional têm sido sugeridos como jogar um papel no controle reprodutivo diapausa28,40. Manipulação experimental de tais fatores pode levar a uma maior governança da tempestividade de oviposição e taxas.
Da mesma forma, nós com sucesso atrasaram o desenvolvimento das larvas, bem como a eclosão de pupas, pelo armazenamento na escuridão a 8-10 ° C por 2 semanas, apesar de viabilidade pode ser muito mais tempo. Com efeito, Heal30 relataram um aumento de duração pupal de até 37 dias quando a temperatura pupal caiu de 25 ° C a 10 ° C. Empregando estas estratégias e atrasando a produção de ovos e/ou o desenvolvimento de pupas permitiria uma maior manipulação da demografia da população em cativeiro.
Enquanto consistência temporal de abastecimento é da maior importância para os nossos requisitos de grande rendimento, isso pode ser mais importante para outros usos, tais como a polinização em estufas. Achamos que quando usando a nossa técnica com fezes de coelho, temos 163 ± 34 eclosed hoverflies de cada ninhada de ovos (N = 3). Dado que um típica fêmea põe até 200 ovos40, talvez possamos aumentar esse rendimento por qualquer competição decrescente de superlotação e comida, ou ajustando a temperatura, como estas têm sido implicadas como afectando significativamente o crescimento larval9 ,31,40,41. No entanto, não há nenhuma indicação de que a base da mídia influencia grandemente rendimento32. Além disso, ao contrário de fezes de outros animais vertebrados29,30,31,42, fezes de coelho é relativamente odor livre, permitindo que a colônia ser mantido em condições laboratoriais normais sem a necessidade de ventilação adicional. Diminuindo a densidade de larvas nos meios de comunicação, ou adicionando nutricional suplementos tais como fermento, bem como manter uma temperatura constante entre 20-25 ° C, é provavelmente suficiente para plenamente optimizar o rendimento31,32, 40.
Os aspectos práticos de coleta de um número suficiente de livremente voando hoverflies, ou sustentar uma população cativa geneticamente diversificada, são ambos impraticável e tempo restritivos para projectos de investigação em pequena escala. Portanto, a prole de fêmeas acasaladas selvagens de criação e complementando suprimentos com colheita de larvas maduras7, permitir que as opções mais práticas para uso durante todo o ano de E. tenax em um ambiente de pesquisa. Esses métodos são limitados pelas épocas em que coleção pode ocorrer, há uma necessidade de ambos garantindo a longevidade dos adultos hoverflies e criação de ovos postos por capturou as mulheres gravid.

Hoverflies estão emergindo como modelos úteis para investigar uma série de questões científicas, incluindo comportamento de voo1, mecanismos neurais subjacentes movimento visão2, polinização eficiência3,4, 5 , 6 e imunidade microbial7. No entanto, ao contrário de alguns outros modelos frequentes, tais como drosófila8, há não há protocolos padronizados para a criação de laboratório de hoverflies para uso em pesquisa científica. Com efeito, mesmo que a atual literatura descreve métodos para reprodução o hoverfly Eristalis tenax, muitos destes são desenvolvidos para o cultivo em massa de hoverflies para a polinização de culturas, bio-degradação de resíduos orgânicos, ou estudos anatômicos 9 , 10 , 11. assim, eles não aborda a necessidade de um protocolo de fácil que fornece uma fonte consistente de saudável hoverflies robusto, embora mantendo a aptidão genética da população.
Seguindo abelhas e zangões, hoverflies são um dos mais importantes selvagem, generalista polinizador grupos12,13. Há cerca de 6000 hoverfly espécies em todo o mundo14,15, com mais de 300 espécies 75 gêneros na Suécia16 e mais de 300 espécies, 69 gêneros na Índia17,18,19. Por exemplo, a marmelada agricultural importante hoverfly Episyrphus balteatus e a mosca de drone, tenax Eristalis, que enfocamos aqui, são encontrados em toda a Europa, América e Ásia6,16, 17,18,19,20,21,22,23,24,25. Hoverflies não são igualmente ativos durante todo o ano, nem durante todo o dia. Com efeito, não só a temporada e a hora do dia, mas também as flutuações na intensidade da luz, temperatura, umidade e velocidade do vento, afetam os padrões de atividade de hoverflies26,27. No campo, Eristalis pode ser encontrada em qualquer época do ano em climas mediterrânicos11, mas os números de hoverflies ativo são muito mais baixos no inverno. Inversamente, em climas frios e temperadas, Eristalis hibernar durante o inverno e não se encontram comportando-se ativamente no campo de em torno de outubro a março28.
Voar livremente hoverflies pode ser coletado pela rede no campo. Com efeito, em climas temperados eles são encontrados em maior abundância no meados ao final da manhã, acalma em dias de sol, no final do verão e durante todo o outono26,,27. Alternativamente, amadurecem E. tenax larvas, segundo ou terceiro ínstar, pode ser identificada e colhida a partir da decomposição de matéria orgânica, como estrume montões ou córregos poluídos organicamente10,11. De fato, técnicas publicadas para a criação de laboratório de E. tenax são todas baseadas em criar larvas em água poluída organicamente, ou através de alguma forma de matéria fecal ou vegetativo9,10,29, 30 , 31 , 32 , 33. no entanto, coleção de larvas é limitada por temporada e é apenas uma ferramenta viável de coleção do final da primavera ao início do outono,11. Além disso, a abundância de larvas é afetada por padrões climáticos locais, como alterações na temperatura ambiente podem afetar tanto a ocorrência de oviposição e desenvolvimento larval taxas9,28.
Portanto, estratégias para manter estoques saudáveis de hoverflies por larvas e ovos dentro do laboratório de criação são necessários para garantir que as experiências podem ser conduzidas durante todo o ano, independentemente da época ou eventos climáticos locais. Importante, a técnica descrita aqui gera a hoverflies de somente as fêmeas selvagens-acoplado. Isto é importante como um estudo realizado por Francuski, et al 10 descobriu que a diversidade genética de um laboratório de população de hoverflies de raça, originalmente estabelecido de 120 larva madura, foi rapidamente perdida. Por conseguinte, sugeriram que para manter a diversidade genética nas colônias para ser utilizado para fins de polinização de culturas comerciais, estes precisam ser reabastecidos, ou até mesmo completamente restabelecida, com indivíduos de campo coletado cada primavera10.
Quando se trabalha na visão, ou outros sentidos usados no corte e acasalamento, recomendamos, portanto, manter a diversidade genética, por re-estabelecer a colônia ou reabastecer a colônia com indivíduos de campo coletado, regularmente. Isto é importante porque a seleção sexual afeta a deriva genética da população. Com efeito, no selvagem, masculino hoverflies precisa identificar e interceptar companheiros adequados, bem como competir com outros machos para o acasalamento dos direitos, defendendo seus territórios34. Esse processo garante que os machos com a melhor visão e atenção espacial são susceptíveis de ser a mais bem sucedida no acasalamento, e, portanto, essas características são repassadas para a próxima geração. O efeito resultante destes processos em curso é, em parte, demonstrado pela presença de dimorfismos sexuais na via visual de hoverflies35,36. Em cativeiro, os machos não têm os mesmos obstáculos ao sucesso de acasalamento como no campo: em primeiro lugar, as fêmeas estão prontamente disponíveis, e em segundo lugar o recinto pequeno, confinado elimina o efeito de comportamentos territoriais, que atuam para impedir o acesso de acasalamento dos outros machos do competidor. A remoção experimental de seleção sexual em Drosophila melanogaster, foi mostrado para ter um efeito significativo sobre as populações em cativeiro com uma diminuição no tamanho total do corpo, tamanho de testículos e esperma produção37e taxas reduzidas de macho comportamentos de namoro38. Assim, um reprodução programa, sem qualquer consideração de seleção sexual, em cativeiro pode ter um efeito profundo em ambos os estudos visuais e comportamentais realizados posteriormente.
Aqui descrevemos uma solução simples e econômica que fornece uma fonte consistente de hoverflies saudável. O protocolo é flexível e fácil de re-iniciar e/ou upscale, dependendo das exigências de investigação.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:903px;" width="902">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bee Pollen</td>
			<td style="width:211px;">Forest Super Foods</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:357px;">any brand of bee pollen is suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Honey</td>
			<td style="width:211px;">Bramwells</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any brand of liquid honey is suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Rabbit Faeces</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>can be substituted with cow or pig manure made into a slurry</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">BugDome</td>
			<td style="width:211px;">Australia Entomological Supplies</td>
			<td style="width:119px;">EM42222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Plastic Bags</td>
			<td style="width:211px;">Woolworths Homebrand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mosquito netting</td>
			<td style="width:211px;">Clas Ohlson</td>
			<td>34-1113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cotton Balls</td>
			<td style="width:211px;">Woolworths Select</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fridge</td>
			<td>Hisense</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>fridge needs to maintain a stable 8-10&#176;C&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Buckets (2-3L)</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Large plastic tubs (30L)</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Wood shavings</td>
			<td style="width:211px;">Pollards Sawdust Supplies</td>
			<td>MaxiFlake (75)&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bag clips</td>
			<td style="width:211px;">IKEA</td>
			<td style="width:119px;">Bevara 303.391.70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Petri Dish (100mm x 20mm)</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">430167</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rearing and long-term maintenance of eristalis tenax hoverflies for research studies

Com cerca de 6000 de espécies em todo o mundo, hoverflies são ecologicamente importantes como polinizadores alternativos para as abelhas domesticadas. No entanto, eles também são um modelo científico útil para estudar a dinâmica de visão e voo de movimento em um ambiente controlado do laboratório. Como as larvas se desenvolvem em água poluída organicamente, eles são modelos úteis para investigar o investimento na imunidade microbial. Enquanto em grande escala comercial fértil para a agricultura já ocorre, há não há protocolos padronizados para a manutenção de populações cativas para estudos científicos. Isto é importante, como programas de reprodução em cativeiro comercial com foco em massa de saída durante a polinização de pico períodos podem não apresentar uma população consistente, estável e robusto ao longo do ano, como é muitas vezes necessário para outros fins de investigação. Portanto, um método para estabelecer, manter e atualizar uma população em cativeiro de investigação é necessário. Aqui, descrevemos a utilização de um ciclo de hibernação artificial, além das exigências nutricionais e habitação, para a manutenção de longo prazo de Eristalis tenax. Usando estes métodos, têm aumentado significativamente a saúde e a longevidade de populações cativas de tenax E. em comparação com os relatórios anteriores. Além disso, vamos discutir métodos de criação de pequena escala e opções para otimizar o rendimento e manipular dados demográficos da população.

Temos desenvolvido uma estratégia de três vias que mantém uma população saudável de estudos visuais e comportamentais (resumidas na Figura 1). Nosso método começa com a coleção de hoverflies do selvagem (etapa 1, Figura 1). Em nosso laboratório, hoverflies estão alojados em gaiolas de insetos ou sacos de plástico, sob um ciclo de hibernação artificial (etapa 2, Figura 1), substancialmente prolongar sua vida útil. Para números aumentados, prole pode ser criados das fêmeas selvagens-acoplado (etapa 3, Figura 1).
Encontramos que pegar um grande número de selvagens hoverflies é um esforço intensivo de tempo, mesmo quando ambientais as condições são favoráveis. Em contraste, a criação bem sucedida de larvas maduras colhidas das fossas de estrume de gado fazendas é uma maneira muito mais eficiente para um grande número de fonte de hoverflies selvagem (etapa 1, Figura 1), com nos coletando até 700 larvas em 0,03 m3 de estrume. Além disso, nossas técnicas de traseiras ovos postos por fêmeas gravid capturadas provaram para ser bem sucedidos (etapa 3, Figura 1). As fêmeas capturaram em um clima mediterrânico (Adelaide) durante o outono e meses de inverno colocou vários lotes de ovos, com 24 clusters observados 19 fêmeas em um período de 20 semanas. Esses lotes de ovo, 10 foram colocados em água, os quais eram férteis e resultou na eclosão das larvas. 3 grupos de larvas foram então tomados além deste ponto e colocados no chorume de fezes de coelho, resultando em 163 ± 34 (média ± DP, N = 3) surgiram hoverflies, com nenhum viés de gênero observadas (Figura 2).
A saúde destes hoverflies de laboratório criado foi determinada por uma comparação do peso e atividade locomotora de hoverflies feminino, em comparação com indivíduos de campo capturado. Atividade motora geral foi avaliada usando um sistema de monitoramento da atividade locomotora (LAMS), conforme descrito anteriormente,39. Não há diferenças significativas no peso(Figura 3)ou atividade (Figura 3B) foram observadas entre o laboratório criados e selvagens capturados hoverflies após 4 meses em cativeiro sob nossa hibernação artificial ciclo. Quando E. tenax foram mantidos no laboratório sem o uso de um ciclo de hibernação artificial, vimos uma diminuição significativa na longevidade, com uma vida útil de 2,5-3 meses (73 ± 7 dias para 5 fêmeas) e 79 ± 4 dias para 11 machos. Quando os hoverflies foram mantidos em estado de hibernação artificial eles podiam viver mais de 12 meses.
Além disso, o efeito de longo prazo manutenção, usando nossos métodos descritos, mais foi avaliado por uma comparação dos pesos ao longo do tempo para ambos os sexos de laboratório criado hoverflies. Observamos um aumento significativo no peso ao longo de um período de 4 meses para ambos os sexos, com fêmeas consistentemente pesando mais do que suas contrapartes masculinas (p < 0,0001, ANOVA de duas vias, N = 12, Figura 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57711/57711fig1.jpg"> Figura 1: Diagrama de fluxo descrevendo os métodos para a manutenção da população em cativeiro saudável de Tenax E.. (1) o procedimento descrito aqui começa com a coleção de qualquer larva madura de esterco de vaca (etapa 1.2) ou voando livremente hoverflies (etapa 1.3). (2) os hoverflies estão alojados em gaiolas de insetos ou sacos de plástico, dependentes de números. Eles são mantidos em um ciclo de hibernação artificial a 8-10 ° C, que é quebrado a cada 3-4 dias. (3) coletadas larvas são mantidas em seu esterco de vaca (passo 3.2). Os ovos postos no laboratório são colocados em uma pasta de fezes de coelho (passo 3.3). Quando atingir a maturidade, 3rd ínstar larvas rastejam a pó de serra circundante onde eles empupar. Eclosão ocorre depois de 6 a 10 dias, e os hoverflies de eclosed são colocados na carcaça (etapa 2). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57711/57711fig1large.jpg">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57711/57711fig2v3.jpg"> Figura 2:   Número e proporção sexual da tenax E. criados com sucesso de lotes individuais ovo. O dados mostram os números da tenax E. aquela eclosed de pupas desenvolvidos a partir de 3 lotes de ovos estabelecidas em nosso laboratório. Os ovos foram postos por fêmeas selvagens capturados. Os dados são cor codificada para o sexo das moscas. Não há nenhuma diferença significativa na proporção.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57711/57711fig3v3.jpg"> Figura 3:   Criados de avaliação da saúde da população em laboratório e campo coletados hoverflies feminino após o cativeiro de longo prazo. (A) comparação de peso entre o campo e laboratório criados capturado hoverflies feminino após 4 meses em cativeiro sob hibernação artificial (N = 12). Campo e (B) os níveis de atividade de laboratório-criados capturaram hoverflies feminino após 4 meses em cativeiro sob hibernação artificial. Atividade locomotora do hoverflies foi medida em um sistema de atividade locomotora por eles quebrando um feixe infravermelho durante o movimento. Como anteriormente, nós média a atividade de 6,7 horas no meio do dia, no segundo dia completo o sistema de Monitor de atividade locomotora39 (Ncampo pegou= 9, Nlaboratório criados= 12). A marca central de cada boxplot mostra a mediana, as bordas da caixa 25th para 75th percentis dos dados e os bigodes estendem-se desde o mínimo até o máximo dos dados.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57711/57711fig4v3.jpg"> Figura 4:   Comparação do efeito de manutenção de longo prazo no peso do laboratório criados hoverflies de ambos os sexos. Os dados mostram o peso hoverfly em função do tempo, mantido em cativeiro sob hibernação artificial. Como todos os hoverflies foram criados de ovos colocados em nosso laboratório (N = 12 em cada ponto de dados) e t = 0 é igual a da eclosão pupal, o tempo em cativeiro é o mesmo que a idade dos animais. A marca central de cada boxplot mostra a mediana, as bordas da caixa 25th para 75thpercentis dos dados e os bigodes estendem-se desde o mínimo até o máximo dos dados.

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Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

Criação e manutenção de longo prazo de Eristalis tenax Hoverflies para estudos de investigação

O objetivo geral desses procedimentos é para estabelecer, manter e atualizar uma população em cativeiro de Eristalis tenax em um ambiente de pesquisa.

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are ...

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Research

JoVE Journal

Environment

Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

13.3K visualizações.  Flinders University. O objetivo geral desses procedimentos é para estabelecer, manter e atualizar uma população em cativeiro de Eristalis tenax em um ambiente de pesquisa.

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Waste Water Derived Electroactive Microbial Biofilms: Growth, Maintenance, and Basic Characterization

The growth of anodic electroactive microbial biofilms from waste water inocula in a fed-batch reactor is demonstrated using a three-electrode setup controlled by a potentiostat. Thereby the use of potentiostats allows an exact adjustment of the electrode potential and ensures reproducible microbial culturing conditions. During growth the current production is monitored using chronoamperometry (CA). Based on these data the maximum current density (jmax) and the coulombic efficiency (CE) are discussed as measures for characterization of the bioelectrocatalytic performance. Cyclic voltammetry (CV), a nondestructive, i.e. noninvasive, method, is used to study the extracellular electron transfer (EET) of electroactive bacteria. CV measurements are performed on anodic biofilm electrodes in the presence of the microbial substrate, i.e. turnover conditions, and in the absence of the substrate, i.e. nonturnover conditions, using different scan rates. Subsequently, data analysis is exemplified and fundamental thermodynamic parameters of the microbial EET are derived and explained: peak potential (Ep), peak current density (jp), formal potential (Ef) and peak separation (&#916;Ep). Additionally the limits of the method and the state-of the art data analysis are addressed. Thereby this video-article shall provide a guide for the basic experimental steps and the fundamental data analysis.

Chronoamperometric growth of anodic electroactive microbial biofilms in a fed-batch reactor using a three-electrode setup, controlled by a potentiostat, is demonstrated. The extracellular electron transfer is characterized using cyclic voltammetry in the presence of the electron donor and in the absence of the electron donor. Fundamental data analysis is demonstrated.

The growth of anodic electroactive microbial biofilms from waste water inocula in a fed-batch reactor is demonstrated using a three-electrode setup ...

Ambiente

Design and Construction of an Urban Runoff Research Facility

As the urban population increases, so does the area of irrigated urban landscape. Summer water use in urban areas can be 2-3x winter base line water use due to increased demand for landscape irrigation. Improper irrigation practices and large rainfall events can result in runoff from urban landscapes which has potential to carry nutrients and sediments into local streams and lakes where they may contribute to eutrophication. A 1,000 m2 facility was constructed which consists of 24 individual 33.6 m2 field plots, each equipped for measuring total runoff volumes with time and collection of runoff subsamples at selected intervals for quantification of chemical constituents in the runoff water from simulated urban landscapes. Runoff volumes from the first and second trials had coefficient of variability (CV) values of 38.2 and 28.7%, respectively. CV values for runoff pH, EC, and Na concentration for both trials were all under 10%. Concentrations of DOC, TDN, DON, PO4-P, K+, Mg2+, and Ca2+ had CV values less than 50% in both trials. Overall, the results of testing performed after sod installation at the facility indicated good uniformity between plots for runoff volumes and chemical constituents. The large plot size is sufficient to include much of the natural variability and therefore provides better simulation of urban landscape ecosystems.

This paper describes the design, construction, and function of a 1,000 m2 facility containing 24 individual 33.6 m2 field plots equipped for measuring total runoff volumes with time and collection of runoff subsamples at selected intervals for quantification of chemical constituents in the runoff water from simulated home lawns.

Projeto e Construção de um Mecanismo de Pesquisa escoamento urbano

As the urban population increases, so does the area of irrigated urban landscape. Summer water use in urban areas can be 2-3x winter base line water use ...

Physical, Chemical and Biological Characterization of Six Biochars Produced for the Remediation of Contaminated Sites

The physical and chemical properties of biochar vary based on feedstock sources and production conditions, making it possible to engineer biochars with specific functions (e.g. carbon sequestration, soil quality improvements, or contaminant sorption). In 2013, the International Biochar Initiative (IBI) made publically available their Standardized Product Definition and Product Testing Guidelines (Version 1.1) which set standards for physical and chemical characteristics for biochar. Six biochars made from three different feedstocks and at two temperatures were analyzed for characteristics related to their use as a soil amendment. The protocol describes analyses of the feedstocks and biochars and includes: cation exchange capacity (CEC), specific surface area (SSA), organic carbon (OC) and moisture percentage, pH, particle size distribution, and proximate and ultimate analysis. Also described in the protocol are the analyses of the feedstocks and biochars for contaminants including polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCBs), metals and mercury as well as nutrients (phosphorous, nitrite and nitrate and ammonium as nitrogen). The protocol also includes the biological testing procedures, earthworm avoidance and germination assays. Based on the quality assurance / quality control (QA/QC) results of blanks, duplicates, standards and reference materials, all methods were determined adequate for use with biochar and feedstock materials. All biochars and feedstocks were well within the criterion set by the IBI and there were little differences among biochars, except in the case of the biochar produced from construction waste materials. This biochar (referred to as Old biochar) was determined to have elevated levels of arsenic, chromium, copper, and lead, and failed the earthworm avoidance and germination assays. Based on these results, Old biochar would not be appropriate for use as a soil amendment for carbon sequestration, substrate quality improvements or remediation.

Biochar is a carbon-rich material used as a soil amendment with the ability to sustainably sequester carbon, improve substrate quality and sorb contaminants. This protocol describes the 17 analytical methods used for the characterization of biochar, which is required prior to large scale implementation of these amendments in the environment.

Física, química e biológica dos Seis biochars produzido para a remediação de áreas contaminadas

The physical and chemical properties of biochar vary based on feedstock sources and production conditions, making it possible to engineer biochars with ...

Administering and Detecting Protein Marks on Arthropods for Dispersal Research

Monitoring arthropod movement is often required to better understand associated population dynamics, dispersal patterns, host plant preferences, and other ecological interactions. Arthropods are usually tracked in nature by tagging them with a unique mark and then re-collecting them over time and space to determine their dispersal capabilities. In addition to actual physical tags, such as colored dust or paint, various types of proteins have proven very effective for marking arthropods for ecological research. Proteins can be administered internally and/or externally. The proteins can then be detected on recaptured arthropods with a protein-specific enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Here we describe protocols for externally and internally tagging arthropods with protein. Two simple experimental examples are demonstrated: (1) an internal protein mark introduced to an insect by providing a protein-enriched diet and (2) an external protein mark topically applied to an insect using a medical nebulizer. We then relate a step-by-step guide of the sandwich and indirect ELISA methods used to detect protein marks on the insects. In this demonstration, various aspects of the acquisition and detection of protein markers on arthropods for mark-release-recapture, mark-capture, and self-mark-capture types of research are discussed, along with the various ways that the immunomarking procedure has been adapted to suit a wide variety of research objectives.

Proteins are often used to mark arthropods for dispersal research. Methods for administering internal and external protein marks on arthropods are demonstrated. Protein mark detection techniques, either through indirect or sandwich enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs), are also illustrated.

Administrando e Detecção de Marcas de proteína em artrópodes para a dispersão de Pesquisa

Monitoring arthropod movement is often required to better understand associated population dynamics, dispersal patterns, host plant preferences, and other ...

Clean Sampling and Analysis of River and Estuarine Waters for Trace Metal Studies

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination control. Developments of some techniques aiming to reduce trace metal contamination in the last couple of decades have resulted in concentrations reported now being orders of magnitude lower than those in the past. These low concentrations often necessitate preconcentration of water samples prior to instrumental analysis of samples. Since contamination can appear in all phases of trace metal analyses, including sample collection (and during preparation of sampling containers), storage and handling, pretreatments, and instrumental analysis, specific care needs to be taken in order to reduce contamination levels at all steps. The effort to develop and utilize "clean techniques" in trace metal studies allows scientists to investigate trace metal distributions and chemical and biological behavior in greater details. This advancement also provides the required accuracy and precision of trace metal data allowing for environmental conditions to be related to trace metal concentrations in aquatic environments.
This protocol that is presented here details needed materials for sample preparation, sample collection, sample pretreatment including preconcentration, and instrumental analysis. By reducing contamination throughout all phases mentioned above for trace metal analysis, much lower detection limits and thus accuracy can be achieved. The effectiveness of "clean techniques" is further demonstrated using low field blanks and good recoveries for standard reference material. The data quality that can be obtained thus enables the assessment of trace metal distributions and their relationships to environmental parameters.

Special care using "clean techniques" is required to properly collect and process water samples for trace metal studies in aquatic environments. A protocol for sampling, processing, and analytical procedures with the aim of obtaining reliable environmental monitoring data and results with high sensitivity for detailed trace metal studies is presented.

Limpo Amostragem e Análise do Rio e Estuarina Waters de Estudos de metal de rastreamento

Most of the trace metal concentrations in ambient waters obtained a few decades ago have been considered unreliable owing to the lack of contamination ...

Use of a Filter Cartridge for Filtration of Water Samples and Extraction of Environmental DNA

Recent studies demonstrated the use of environmental DNA (eDNA) from fishes to be appropriate as a non-invasive monitoring tool. Most of these studies employed disk fiber filters to collect eDNA from water samples, although a number of microbial studies in aquatic environments have employed filter cartridges, because the cartridge has the advantage of accommodating large water volumes and of overall ease of use. Here we provide a protocol for filtration of water samples using the filter cartridge and extraction of eDNA from the filter without having to cut open the housing. The main portions of this protocol consists of 1) filtration of water samples (water volumes &#8804;4 L or &gt;4 L); (2) extraction of DNA on the filter using a roller shaker placed in a preheated incubator; and (3) purification of DNA using a commercial kit. With the use of this and previously-used protocols, we perform metabarcoding analysis of eDNA taken from a huge aquarium tank (7,500 m3) with known species composition, and show the number of detected species per library from the two protocols as the representative results. This protocol has been developed for metabarcoding eDNA from fishes, but is also applicable to eDNA from other organisms.

We describe a protocol for filtration of water samples with a filter cartridge and extraction of environmental DNA (eDNA) without having to cut open the housing to remove the filter. This protocol is developed for metabarcoding eDNA from fishes, but is also applicable to eDNA from other organisms.

O uso de um cartucho de filtro para Amostras de filtração de água e extração de DNA Ambiental

Recent studies demonstrated the use of environmental DNA (eDNA) from fishes to be appropriate as a non-invasive monitoring tool. Most of these studies ...

RGB and Spectral Root Imaging for Plant Phenotyping and Physiological Research: Experimental Setup and Imaging Protocols

Better understanding of plant root dynamics is essential to improve resource use efficiency of agricultural systems and increase the resistance of crop cultivars against environmental stresses. An experimental protocol is presented for RGB and hyperspectral imaging of root systems. The approach uses rhizoboxes where plants grow in natural soil over a longer time to observe fully developed root systems. Experimental settings are exemplified for assessing rhizobox plants under water stress and studying the role of roots. An RGB imaging setup is described for cheap and quick quantification of root development over time. Hyperspectral imaging improves root segmentation from the soil background compared to RGB color based thresholding. The particular strength of hyperspectral imaging is the acquisition of chemometric information on the root-soil system for functional understanding. This is demonstrated with high resolution water content mapping. Spectral imaging however is more complex in image acquisition, processing and analysis compared to the RGB approach. A combination of both methods can optimize a comprehensive assessment of the root system. Application examples integrating root and aboveground traits are given for the context of plant phenotyping and plant physiological research. Further improvement of root imaging can be obtained by optimizing RGB image quality with better illumination using different light sources and by extension of image analysis methods to infer on root zone properties from spectral data.

An experimental protocol is presented for assessment of soil grown plant root systems with RGB and hyperspectral imaging. Combination of RGB image time series with chemometric information from hyperspectral scans optimizes insights into plant root dynamics.

RGB e raiz Spectral Imaging para fenotipagem de planta e pesquisa fisiológica: instalação Experimental imagem e protocolos

Better understanding of plant root dynamics is essential to improve resource use efficiency of agricultural systems and increase the resistance of crop ...

In Vitro Rearing of Solitary Bees: A Tool for Assessing Larval Risk Factors

Although solitary bees provide crucial pollination services for wild and managed crops, this species-rich group has been largely overlooked in pesticide regulation studies. The risk of exposure to fungicide residues is likely to be especially high if the spray occurs on, or near host plants while the bees are collecting pollen to provision their nests. For species of Osmia that consume pollen from a select group of plants (oligolecty), the inability to use pollen from non-host plants can increase their risk factor for fungicide-related toxicity. This manuscript describes protocols used to successfully rear oligolectic mason bees, Osmia ribifloris sensu lato, from egg to prepupal stage within cell culture plates under standardized laboratory conditions. The in vitro-reared bees are subsequently used to investigate the effects of fungicide exposure and pollen source on bee fitness. Based on a 2 &#215; 2 fully crossed factorial design, the experiment examines the main and interactive effects of fungicide exposure and pollen source on larval fitness, quantified by prepupal biomass, larval developmental time, and survivorship. A major advantage of this technique is that using in vitro-reared bees reduces natural background variability and allows the simultaneous manipulation of multiple experimental parameters. The described protocol presents a versatile tool for hypotheses testing involving the suite of factors affecting bee health. For conservation efforts to be met with significant, lasting success, such insights into the complex interplay of physiological and environmental factors driving bee declines will prove to be critical.

In Vitro Rearing of Solitary Bees: A Tool for Assessing Larval Risk Factors

Fungicide sprays on flowering plants may expose solitary bees to high concentrations of pollen-borne fungicide residues. Using laboratory-based experiments involving in vitro-reared bee larvae, this study investigates the interactive effects of consuming fungicide-treated pollen derived from host and non-host plants.

In Vitro Criação de abelhas solitárias: uma ferramenta para avaliar os fatores de risco Larval

Although solitary bees provide crucial pollination services for wild and managed crops, this species-rich group has been largely overlooked in pesticide ...

Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant Caffeine

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and toxicological studies. Using automated digital tracking platforms, recent efforts in neuropharmacology are leveraging larval fish locomotor behaviors to identify potential therapeutic targets for novel small molecules. Similar to these efforts, research in the environmental sciences and comparative pharmacology and toxicology is examining various behaviors of fish models as diagnostic tools in tiered evaluation of contaminants and real-time monitoring of surface waters for contaminant threats. Whereas the zebrafish is a popular larval fish model in the biomedical sciences, the fathead minnow is a common larval fish model in ecotoxicology. Unfortunately, fathead minnow larvae have received considerably less attention in behavioral studies. Here, we develop and demonstrate a behavioral profile protocol using caffeine as a model neurostimulant. Though photomotor responses of fathead minnows were occasionally affected by caffeine, zebrafish&#160;were markedly more sensitive for photomotor and locomotor endpoints, which responded at environmentally relevant levels. Future studies are needed to understand comparative behavioral sensitivity differences among fish with age and time of day, and to determine whether similar behavioral effects would occur in nature and be indicative of adverse outcomes at the individual or population levels of biological organization.

Here, we present a protocol to examine larval zebrafish and fathead minnow locomotor activities and photomotor responses (PMR) using an automated tracking software. When incorporated in common toxicology bioassays, analyses of these behaviors provide a diagnostic tool to examine chemical bioactivity. This protocol is described using caffeine, a model neurostimulant.

Protocolo experimental pela análise de perfis de resposta comportamental em peixes Larval: aplicação para a Neuro-estimulantes cafeína

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and ...

Long-term Video Tracking of Cohoused Aquatic Animals: A Case Study of the Daily Locomotor Activity of the Norway Lobster (Nephrops norvegicus)

We present a protocol related to a video-tracking technique based on the background subtraction and image thresholding that makes it possible to individually track cohoused animals. We tested the tracking routine with four cohoused Norway lobsters (Nephrops norvegicus) under light-darkness conditions for 5 days. The lobsters had been individually tagged. The experimental setup and the tracking techniques used are entirely based on the open source software. The comparison of the tracking output with a manual detection indicates that the lobsters were correctly detected 69% of the times. Among the correctly detected lobsters, their individual tags were correctly identified 89.5% of the times. Considering the frame rate used in the protocol and the movement rate of lobsters, the performance of the video tracking has a good quality, and the representative results support the validity of the protocol in producing valuable data for research needs (individual space occupancy or locomotor activity patterns). The protocol presented here can be easily customized and is, hence, transferable to other species where the individual tracking of specimens in a group can be valuable for answering research questions.

Long-term Video Tracking of Cohoused Aquatic Animals: A Case Study of the Daily Locomotor Activity of the Norway Lobster Nephrops norvegicus

Here we present a protocol to individually track animals over a long period of time. It uses computer vision methods to identify a set of manually constructed tags by using a group of lobsters as case study, simultaneously providing information on how to house, manipulate, and mark the lobsters.

Acompanhamento a longo prazo de vídeo de animais aquáticos, Cohoused: um estudo de caso da atividade locomotora diária do lagostim (Nephrops norvegicus)