Este protocolo mede a atividade fotossintética das algas anexadas, enquanto elas ainda estão ligadas ao plâncton, assim como na natureza. A principal vantagem dessa técnica é que a medição da fotofisiologia pode ser feita em tempo real sem distração amostral. Para examinar os efeitos dos indivíduos zooplânctons na fluorescência da linha de base, prepare a mucronata de scapholeberis adultos da cultura sem organismos ligados.
Agora esfuje os indivíduos na FLW a 20 graus Celsius por pelo menos 90 minutos para evitar a fluorescência do conteúdo intestinal. Despeje 1,5 mililitros de FWL em uma cuvette. Pegue o número desejado de s.
indivíduos de mucronata usando uma pipeta sob um microscópio óptico a 100 vezes a ampliação e transferi-los para a cuvette. Adicione FLW para trazer o volume amostral até 2 mililitros e permitir que ele se aclimata sob luz baixa a 20 graus Celsius é por 15 minutos antes da medição rápida da taxa de repetição do fluorômetro. Em seguida, clique em agir para executar"para iniciar a medição e repetir as medidas mais de três vezes por amostra.
Leia o valor de F0 da trama resultante. Pegue espécies de colacium com uma carapaça derretida usando uma pipeta sob um microscópio óptico a 100 vezes a ampliação e lave-as com FLW. Asepticamente inoculado espécies de colacium no meio AF-6 em um tubo de vidro de 10 mililitros em um banco limpo.
Mantenha a cultura a uma temperatura NC2 em uma câmara de crescimento, sacudindo o tubo de vidro suavemente à mão pelo menos uma vez por dia para evitar a liquidação celular. Para examinar os efeitos dos indivíduos zooplânctons na clorofila uma fluorescência de espécies colacium, use s. mucronata adulta sem qualquer organismo anexado.
Para evitar fluorescência do conteúdo intestinal, esflaça os indivíduos na FLW por pelo menos 90 minutos. Configure um fluorômetro de taxa de repetição rápida do tipo cuvette. Agora despeje uma amostra de 1,5 mililitros de subfícida de espécies de colacium pré-cultivadas em uma cuvette.
Em seguida, transfira o número desejado de indivíduos de s. mucronata para essas cuvetas e leve o volume amostral até 2 mililitros com o meio filtrado. Aclimes os indivíduos sob luz baixa a 20 graus Celsius por 15 minutos antes de tomar a medição rápida da taxa de repetição do fluorômetro.
Clique em agir para executar"para iniciar a medição, repetindo as medidas mais de três vezes por amostra. Leia os valores F0 e FM do enredo resultante. Para corrigir a fluorescência da linha de base, filtre o meio de cultura usando um filtro do tamanho de um derramamento de 0,2 micrômetro e meça a fluorescência.
Subtraia F0 da amostra de linha de base de F0 e FM de espécies de colacium ou modifica o valor de correção em branco nas configurações na guia de opções. Isola indivíduos de mucronata com espécies de colacium usando uma pipeta sob um microscópio óptico.
Em seguida, lave a mucronata usando FLW. Transferência s.
mucronata em 100 mililitros de FLW e mantê-los sob condições escuras à temperatura NC2 por 90 minutos para a fome. Despeje 1,5 mililitros de FLW em uma cuvette. Transfira em torno de dez s.
mucronata indivíduos com espécies de colacium em uma cuvette e adicionar FLW para trazer a amostra até 2 mililitros. Aclimam os indivíduos sob baixa luz à temperatura de N2C por 15 minutos e medem a fluorescência da clorofila, como mencionado no manuscrito do texto. Para enumerar o número de células anexadas, fixe a amostra com 2% de glutaraldeído após tomar a medição do fluorômetro da taxa de repetição rápida.
Em seguida, tire fotos em várias profundidades focais e posições de s. mucronata sob um microscópio leve. Não houve efeito significativo na fluorescência da linha de base ou clorofila uma fluorescência por s.
mucronata até 5 indivíduos por mililitro. No entanto, a eficiência fotoquímica máxima e a sacieciação não fotoquímica foram significativamente afetadas quando a densidade de mucronata foi de 7,5 indivíduos por mililitro.
A variação sazonal na fitofisiologia das espécies de colacium durante a fase de apego e a etapa planctônica para a fase estacionária no meio AF-6 mostrou eficiência fotoquímica média semelhante e saciedade não fotoquímica. Para o estágio anexado das espécies de colacium em condições escuras, não houve diferença significativa nos parâmetros fotofísicos, exceto a extinção não fotoquímica sendo maior para manganês do que o cálcio após três horas, e em baixa intensidade de luz às 21 horas. Para a fase planctônica, a seção transversal de absorção do PS2 foi significativamente menor no manganês do que no tratamento de cálcio em três horas.
A eficiência fotoquímica eficaz foi significativamente maior, mas a saciedação não fotoquímica foi menor no tratamento de manganês do que o controle em 21 horas. Sob luz crescente, o manganês tende a diminuir a absorção do PS2 em três horas, em saciedos não fotoquímicos em 21 horas, enquanto aumentava a eficiência fotoquímica eficaz em três horas. O cálcio melhorou ligeiramente a extinção não fotoquímica sob luz crescente.
No entanto, diminuiu a eficiência fotoquímica efetiva em três horas. O mais importante é o efeito de organismos substratos. Se as algas forem ligadas a diferentes espécies ou materiais, o efeito pode ser diferente.
Além deste protocolo, a medição das taxas de fixação de carbono ou de produção de oxigênio são úteis para esclarecer a resposta da produtividade do cálcio às manipulações experimentais. Este protocolo nos permite esclarecer como a atividade fotossintética das algas anexadas responde às mudanças ambientais.
