Usando este protocolo de modelo de silicose em ratos, é possível mimetizar de perto o processo patológico da silicose humana. Esta técnica é de fácil execução, econômica, com boa repetibilidade e não há trauma no animal. O modelo de rato estabelecido neste estudo contribui para a identificação precoce, diagnóstico preciso e tratamento da silicose.
Para começar, coloque as partículas de sílica em uma argamassa ágata e triture por 1,5 horas antes de cada exposição animal. Em seguida, pese 30 gramas da sílica moída em uma balança eletrônica e coloque-a em um recipiente de vidro. Asse a 180 graus Celsius por seis horas em um secador de aquecimento elétrico e soprador de ar para eliminar patógenos da superfície das partículas de sílica.
Configure o controlador de exposição à sílica conectando os sistemas de injeção e gerador. Em seguida, coloque a sílica pesada no gerador e confirme se a conexão da tubulação está adequada. O cabo de alimentação está conectado e a fonte de alimentação está normal.
Depois de garantir que as válvulas da câmara de inalação estão fechadas, ligue o dispositivo de descarga de gases de escape e a fonte de ar para confirmar se o interior do gabinete de proteção está em estado de pressão negativa. Verifique a concentração de sílica no gabinete com um amostrador atmosférico calibrado seguindo as instruções do fabricante. Para a determinação gravimétrica, use uma balança analítica digital, de panela única, e pese a sílica.
Coloque o rato na gaiola, depois coloque 10 ratos na câmara de inalação e feche o compartimento de inalação e as portas do armário blindadas. Em seguida, prossiga com o experimento de inalação de sílica conforme planejado. Após a conclusão do experimento, feche a válvula de controle de fluxo de gás misto e abra a válvula de fluxo de gás puro para injetar o gás na câmara de inalação.
Após 20 minutos, feche a válvula de fluxo de ar puro. Abra a porta e retire a gaiola da câmara de inalação. Em seguida, tire os ratos da gaiola e leve-os de volta para a sala livre de patógenos.
Em seguida, remova o rack do rato e os componentes do tubo de ramificação em sequência e coloque-os na pia para limpeza. Após o enxágue, feche a válvula de limpeza automática e abra a escotilha. Em seguida, limpe a parede interna com um pano limpo para secar o tanque.
Por fim, desinfete o tanque com etanol 75% e feche a comporta de exaustão. Em seguida, abra rapidamente a porta da cabine de inalação para evaporar a umidade para que o interior da cabine de inalação permaneça seco. Os ratos expostos à sílica por duas e 24 semanas revelaram espessamento da parede alveolar após duas semanas de inalação de sílica, enquanto a estrutura alveolar desapareceu e grandes áreas de fibrose se formaram após 24 semanas.
Além disso, as partículas de sílica foram vistas aprisionadas nos macrófagos dos lobos pulmonares observados através de um microscópio de luz polarizada. A coloração imuno-histoquímica do CD 68 no pulmão revelou a evolução dinâmica dos nódulos silicóticos de duas a 24 semanas. À medida que o tempo de exposição aumentava, a área dos nódulos também aumentava gradualmente, e os nódulos silicóticos adjacentes fundiam-se em nódulos maiores.
Múltiplas lesões fibróticas de tamanhos variados foram formadas nos pulmões de ratos expostos à sílica em comparação com os ratos controle. No entanto, não foram encontradas diferenças significativas no rim, fígado e baço entre os ratos com silicose e o controle. Mas, curiosamente, a perda óssea foi observada em ratos com silicose.
O mais importante neste protocolo é garantir que a sílica esteja bem moída e que a concentração seja constante antes de iniciar o procedimento.
