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Biochemistry

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Isolamento Químico por Afinidade de Vesículas Extracelulares de Biofluidos para Análise Proteômica e Fosfoproteômica

Transcrição

Estamos trabalhando na descoberta de biomarcadores baseados em vesículas extracelulares. Um passo importante é isolá-los de forma eficiente e seletiva. O EVtrap, que é baseado na separação baseada em esferas magnéticas, pode realmente nos ajudar, fornecendo alto rendimento, fácil de usar, em particular, fácil para aplicações clínicas.

Temos usado este protocolo para a descoberta em proteínas e biomarcadores de fosfoproteínas para diferentes doenças, tais como cancro da mama, cancros renais, e doença de Parkinson. Este biomarcador é derivado do biofluido. Os EVs podem ser potencialmente usados para biópsias líquidas, o que pode melhorar ainda mais o diagnóstico clínico e o tratamento.

Atualmente, a abordagem mais utilizada para o isolamento de vesículas extracelulares são a ultracentrifugação e a precipitação, mas esses métodos são limitados ao co-isolamento de contaminantes e também à baixa eficiência. Assim, nosso método EVtrap fornecerá uma maneira mais eficaz de isolar EVs, o que permitirá um método mais reprodutível e sensível e também beneficiará a análise a jusante. Estamos trabalhando em duas coisas.

Primeiro, continuamos desenvolvendo os métodos e protocolos para isolamento de EV e uma análise downstream, em particular, uma análise baseada em backup em massa. A segunda é que estamos explorando diferentes aplicações no campo clínico por causa da vantagem do EVtrap.

O presente protocolo fornece descrições detalhadas para o isolamento eficiente de vesículas extracelulares urinárias utilizando esferas magnéticas funcionalizadas. Além disso, engloba análises subsequentes, incluindo western blotting, proteômica e fosfoproteômica.

Capítulos neste vídeo

0:00

Introduction

1:47

Extracellular Vesicle (EV) Isolation from Human Urine Samples Using the EVtrap Approach

3:39

Preparation of Dried Extracellular Vesicle (EV) Sample for Proteomics and Phosphoproteomics Analysis

6:31

Proteome/Phosphoproteome Analysis of the Extracellular Vesicle (EV) Samples Using LC‐MS/MS

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