Культура Мышь нейронных стволовых клеток прекурсоров

Резюме

Это видео описывает метод, используемый для изоляции neuroprecursors из развивающихся коры эмбриональных мышей. Процедура снятия эмбрионов из матки, рассекая корковой ткани, и перевариванием изолированных кора головного мозга показано на рисунке.

Аннотация

Первичная нейронных культур стволовых клеток являются полезными для изучения механизмов, лежащих развития центральной нервной системы. Исследования стволовых клеток увеличится нашем понимании нервной системы и может позволить нам разработать методы лечения в настоящее время неизлечимых заболеваний головного мозга и травмы. Кроме того, стволовые клетки должны быть использованы для исследования стволовых клеток, направленных на детальное изучение механизмов нейронных дифференциации и трансдифференцировки и генетических и экологических сигналы, которые прямой специализации клеток в определенные типы клеток. Это видео демонстрирует метод, используемый для разбивки клетки эмбрионального день 12,5 передний мозг спинной мыши. Рассечение процедура включает в себя уборка E12.5 эмбрионов мыши из матки, удаление "кожу" с мелкими рассекает щипцы и, наконец, выделения кусков коры головного мозга. После вскрытия, ткань переваривается и механически диссоциирован. Ресуспендировали диссоциированных Затем клетки культивировали в "стволовая клетка" СМИ, что способствует росту нервных стволовых клеток.

протокол

1. Мышь нейронных прекурсоров (НПС) были выделены из эмбриона E12.5 коры головного мозга.
2. Кожа и мезенхимальные слои были сняты с расчлененным telencephalic пузырьков.
3. Пузырьки инкубировали в 0,05% трипсина с 0,02% ЭДТА и 0,2% BSA в HBSS в течение 20 минут при температуре 37 ° C.
4. Трипсинизации был остановлен равным объемом 1 мг / мл соевого ингибитора трипсина (Sigma # T6522) в HBSS.
5. Ткань дайджесты были диссоциированных с помощью нескольких раундов растирания с огневой полировкой пипетки Пастера.
6. Клетки промывали один раз с 0,2% BSA в HBSS и помещали на 50 000 клеток / мл на ламинин покрытием покровных в средах с 20 нг / мл ЭФР, 10 нг / мл FGF2 (R & D Systems или Peprotech), и 2 мкг / мл гепарина ( Sigma).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

Большие успехи в нашем понимании развития ЦНС и биологии стволовых клеток стало возможным благодаря нашей способности урожая, изолировать и культуру эмбриональных нервных стволовых клеток. В этом видеоролике показано рассечение E12.5 мыши коры головного мозга и последующее разукрупнения и культ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Straight Iris Scissors	Tool	Fine Science Tools	14060-11
Medium Scissors	Tool	Fine Science Tools	15024-10
Micro Scissors	Tool	Fine Science Tools	15002-08
Bent Forceps	Tool	Fine Science Tools	11251-35