JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Cotton rats are extremely excitable and have a strong flight-or-fight response. A handling method optimized to reduce the stress of the animals is described which will make cotton rats more accessible as a preclinical model.

Аннотация

Oncolytic viruses are a novel anticancer therapy with the ability to target tumor cells, while leaving healthy cells intact. For this strategy to be successful, recent studies have shown that involvement of the host immune system is essential. Therefore, oncolytic virotherapy should be evaluated within the context of an immunocompetent model. Furthermore, the study of antitumor therapies in tolerized animal models may better recapitulate results seen in clinical trials. Cotton rats, commonly used to study respiratory viruses, are an attractive model to study oncolytic virotherapy as syngeneic models of mammary carcinoma and osteosarcoma are well established. However, there is a lack of published information on the proper handling procedure for these highly excitable rodents. The handling and capture approach outlined minimizes animal stress to facilitate experimentation. This technique hinges upon the ability of the researcher to keep calm during handling and perform procedures in a timely fashion. Finally, we describe how to prepare cotton rat mammary tumor cells for consistent subcutaneous tumor formation, and how to perform intratumoral and intraperitoneal injections. These methods can be applied to a wide range of studies furthering the development of the cotton rat as a relevant pre-clinical model to study antitumor therapy.

Введение

Онколитического вируса (OV) избирательно реплицироваться в опухолевых клетках, используя биохимические различия между нормальными и опухолевыми клетками 1,2. Существуют два типа ОВС: те, которые не требуют мутацию, чтобы достичь селективного онколиза, называют природе вирусов дикого типа и те, которые должны быть разработаны, чтобы достичь селективного онколиза. Сбор мутаций в пределах данного типа опухоли определяет природу селективного преимущества роста над нормальными клетками для О.В. 2. Безопасность и выгода от использования ОВС была продемонстрирована в клинических испытаниях 3-7. Несмотря на достижения в области онколитической виротерапии существуют пробелы между доклинических и клинических результатов, предполагая, что лучшие модели необходимы для оценки противоопухолевой эффективности ОВС.

Крупного рогатого скота типа герпеса 1 (BHV-1) является членом семьи Herpesviridae и Alphaherpesviridae подсемейства. BHV-1 INITIТочные бычьей комплекс респираторных заболеваний у крупного рогатого скота, проявляется в самых разнообразных симптомов, напоминающих простуду 8,9. BHV-1 связывается крепления и ввода рецепторы, используемые HSV-1, такие как гепарансульфата и nectin-1 10. Тем не менее, он связывается CD155 в месте nectin-2 10. BHV-1 имеет очень узкий спектр хозяев, так что он не в состоянии эффективно ввести и инициировать репликацию в нормальных и трансформированных мышиных клеток 3,4,10. Это делает использование обычных моделей мышей проблематично. Онколитический емкость BHV-1 была продемонстрирована ин витро 11,12. BHV-1, как было показано, чтобы инициировать репликацию в и убивать опухолевые клетки человека из различных гистологических происхождения, включая клетки рака молочной железы и рака молочной железы инициирования клеток 11,12. Тем не менее, противоопухолевое емкость BHV-1 должны быть оценены в естественных условиях в контексте иммунитетом.

Аденовируса человека (Ad), для которыхЕсть 57 определены серотипов, наиболее часто вызывает респираторные заболевания у людей. Онколитических векторы объявления были оценены по их противоопухолевой эффективности с несколькими продвижения в клинических испытаниях 13-15. Несмотря на многообещающие доклинических данных, клинические результаты не оправдали ожиданий. Модели ксенотрансплантата человеческой опухоли, как правило, используется для изучения противоопухолевой эффективности векторов объявление, хотя они обладают ослабляется иммунный ответ на вирус 16,17. Кроме того, сингенные мышиные модели непермиссивные инфекции объявления, что делает оценку иммунного ответа с помощью этих моделей непрактичные 17,18.

Иммунная система хозяина была определена как наиболее влиятельного механизма, посредством которого OVS вызывать гибель клеток опухоли 19. Ответы Противоопухолевые между толеризованной и без толеризованной опухоли антигеном (ТАА) модели отличаются и может значительно повлиять на успех О.В. терапии. HSV-1 О.В. KM100 (ICP0 N212VP16 в 1814 году 20) 20,21 вызвало регрессию опухоли у 80% мышей с опухолями в мышиной полиома Средний Т-антигена модели 22 Рак молочной железы. Тем не менее, в ее-2 моделей / Neu, противоопухолевая эффективность из KM100 колебалась от 20% полной регрессии в сингенных мышей и опухолевых застой в трансгенных, HER2-толеризованной мышей. Вместе эти данные подчеркивают важность полного оценке OVS с помощью животных моделей, которые лучше всего повторять человеческую иммунную пейзаж, чтобы в полной мере понять, какие функции определения терапевтического успеха.

Хлопок крыса (Sigmodon hispidus), коренными жителями Северной и Южной Америки, наиболее часто используется в качестве модели респираторно-синцитиальный вирусной инфекции (как рассмотрено в 5). Хлопковые крысы также используется в-BHV-1 анти исследований вакцинации, поскольку они воспроизводят в патологии, связанной с бычьим респираторных заболеваний сложного 6,23. Кроме того, BHV-1 инфекции хлопковых крысявляется иммуногенным, вызывая устойчивый слизистых оболочек и системного иммунных ответов 6,23-25. Клеточные линии были получены в результате спонтанного фибросаркому и остеосарком молочной железы (LCRT) и кости (CCRT и VCRT), соответственно 26. Крысах были использованы для оценки эффективности в естественных условиях онколитических векторов объявление как они восприимчивы к инфекции объявление и имеет аналогичные патологию человека 27-29. Использование ослабленным иммунитетом моделей для предварительной клинической оценки OVS не только менее свидетельствует о клинических ответов на терапии, но они не принимают во внимание роль иммунной системы в онколитической виротерапии 30,31. Таким образом, сингенная и опухолевые толеризованной модели хлопок крыса молочной железы и остеосаркомы являются актуальными моделями, в которых для оценки доклинических эффективность OVS, таких как BHV-1 и объявления, которые не могут быть исследованы с помощью обычных моделей мышиных.

протокол

Примечание: протоколы, используемые были утверждены нашей институциональной животных Совета по этике исследований на Университете МакМастер в соответствии с Канадским советом по руководящих принципов по уходу за животными. Эксперименты проводились на Университет МакМастер Центральный животных фонда.

1. Культивирование LCRT Клетки

  1. Культура LCRT клетки в среде Игла в модификации Игла (DMEM) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 2 мМ L-глутамина, 100 ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина. Поддержание клеток в Т-150 колбу с тканевой культурой при 37 ° С и 5% СО 2. Прохождение клетки, когда они образуют 90% сливающийся монослой (каждые 2-3 дня, рисунок 1).
  2. Предварительно теплой 1x забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS), 1x трипсина и среднего C водяной бане 37 ° в течение 10 мин до разделения клеток.
  3. Аспирируйте среднего из колбы и промыть клетки с 5 мл 1x PBS.
  4. После промывки, аспирация PBS и инкубироватьклетки с 2 мл трипсина 1х, пока клетки диссоциируют из колбы (~ 2 мин).
  5. Ресуспендируют клеток в 8 мл среды (в общей сложности 10 мл клеточной суспензии) и аккуратно пипеткой вверх и вниз, чтобы разбить скопления клеток.
  6. Поддерживать клетки в T-150 колбу путем посева 1 мл клеточной суспензии в 24 мл среды (в общей сложности 25 мл на Т-150) и рок-колбы осторожно из стороны в сторону. Поддерживать клетки при 37 ° С и 5% СО 2 до следующего раскола.

2. Оценка репликации вирусов и цитотоксичности в LCRT клеток

  1. Вирус Репликация
    ПРИМЕЧАНИЕ: Вирусные конструкции, выражающие флуоресцентной метки, такие как зеленый флуоресцентный белок (GFP), под управлением эндогенных вирусных промоторов облегчения визуализации заражения вирусом и распространять с помощью флуоресцентной пластины читателей.
    1. Семенной LCRT клеток в культуре пластин, оставляя хорошо для подсчета. Семенной клетки таким образом, что они будут на 80-90% сплошности на день позже. Использование концентрации 10 5 челLs / мл (100 мкл на лунку) для получения желаемого слияния на день позже в 96-луночных плоскодонных планшетах.
    2. На следующий день, предварительно теплой 1X PBS, 1x трипсина, полной и свободной от сыворотки средой, в водяной бане при 37 ° в течение 10 мин до начала эксперимента.
    3. Отберите среду из подсчета хорошо и промыть клетки с 5 мл 1x PBS, тряся его по поверхности хорошо.
    4. После промывки, аспирация PBS и инкубировали клетки с 2 мл трипсина 1х до клетки диссоциируют из колбы (~ 2 мин).
    5. Ресуспендируют клеток в соответствующем объеме полной среде с получением плотности клеток в счетной диапазоне с помощью гемоцитометра. Для обеспечения точного подсчета клеток, тщательно перемешать клеточной суспензии до инокуляции гемоцитометра с помощью пипетки вверх и вниз.
    6. Определить объем вирусного штамма, необходимого для инфекции в желаемом множественности инфекции (MOI).
      Обязательно Paque единиц (БОЕ) = количество посеянных клеток * МВД(БОЕ / клетка)
      Объем вирусного штамма требуется = требуемая бое / вирус Stock титр (БОЕ / мл)
    7. Подготовка вируса инокулята в среде без сыворотки в пробирках. Тщательно перемешать на вортексе или пипетки перед добавлением инокулята в клетки.
    8. Инфицировать клетки в течение 1 часа при 37 ° С, после чего применить обслуживания накладку DMEM + 1% FBS.
    9. Сканирование пластины один и два дня после заражения (PI) для визуализации флуоресценции GFP.
  2. Вирус цитотоксичности
    ПРИМЕЧАНИЕ: Выполните ресазурин цитотоксичности в условиях низкой освещенности, как соединение светочувствительной. И содержащую среду должны быть включены только для коррекции фоновой флуоресценции.
    1. Подготовка 5% (объем / объем) раствор резазурин в 1x PBS. Смешайте решение с помощью пипетки.
    2. Отберите среду из клеток и применять 5% раствор резазурин. Включить и среду, содержащую только для коррекции фоновой флуоресценции.
    3. Инкубируйте клетки в течение 30 мин при 37 ° С, послекоторый гласил флуоресценции с помощью флуоресцентного планшет-ридер (возбуждение 530 нм, эмиссия 595 нм).
    4. Анализ данных относительно неинфицированных лиц контрольной группы коррекции фоновой флуоресценции.

3. Корпус и регулировать

  1. Корпус и диета
    1. Дом крысах индивидуально для уменьшения внутренней борьбы в поликарбонатных крыс клетки, содержащие грызунов Солома (1/8 "кукурузник постельных принадлежностей), раздел ПВХ трубы длиной не более 8 дюймов и nestlets как обогащение (рисунок 2).
    2. Используйте защищаемого стальная корзина сидеть возвышаться из клетки и содержат корм для грызунов и бутылку воды.
      Примечание: Эта установка клетки позволит безопасно и легко захвата животных, с размещением трубы обогащения по отношению к концу клетки существа первостепенное значение.
  2. Обработка
    1. Ручка хлопка крыс утром, до раундов за животными техников, чтобы избежать волнующие их, прежде чемПроцедура.
    2. Во время всех процедур, носить толстые кожаные перчатки для защиты.
    3. Как животные, прежде всего, остается в трубах обогащению, использовать их для передачи крыс в новую клетку во обычной очистки. Кроме того, открыть клетку немного, чтобы обработчик для достижения их руку в, животных, то, может быть ограничено по scruffing кожу чуть выше плеч и нажимая. Уход практика не применять чрезмерную силу, как животное может укусить свой язык.
    4. Будьте терпеливы и использовать твердую руку, так как животные имеют сильную реакцию полета или бой и постараемся, чтобы избежать захвата бег и прыжки из клетки. Главное, не справиться животных за хвост, как будет происходить degloving.
    5. Ловушка животных в их обогащения труб более прямой обработки. Это значительно уменьшает повреждения и сбежать.

4. Захват и Анестезия

  1. Захват
    1. Носите толстые кожаные перчатки для защитыионов в всех процедур.
    2. Используйте большую прозрачную пластиковую емкость с отверстиями для воздуха и крышкой, обезболивающий индукции камеры достаточно большой, чтобы соответствовать контейнер и носовой обтекатель, установленное на выходе газового шланга (рис 3).
    3. Работа в парах, чтобы сделать процедуру более эффективной и сократить время экспозиции животных в ИФ, ингаляции анестетика. Убедитесь, что один исследователь отвечает за открытие и замены стальное покрытие на клетке и крышке индукции камеры (обработчик 1 #) и их помощник отвечает за захват животного в трубке и транспорта на индукции камеры (обработчик # 2).
    4. Поместите клетку на плоской поверхности, и удалить внешнюю крышку. Приподнимите лоток подачи стали и медленно маневрировать трубку обогащению, так что параллельно сторонам каркаса и против задней части. Если необходимо, используйте объект маневрировать трубку обогащению, не открывая клетку, чтобы избежать перемешивания животное (ручкаR # 1).
    5. Если животное становится взволнованным и оставляет трубку, время, достаточное для животных, чтобы расслабиться и вновь поселиться в трубку (обработчика # 1).
    6. Медленно и намеренно поднять край крышки стали дальше всего от трубки обогащения, сохраняя другой конец в контакте с сепаратором. Сделать пространство, достаточное для пластиковой тары (обработчик # 2).
    7. Одним плавным, быстрым движением, нажмите на пластиковый контейнер возвышаться трубки по обогащению урана. Поддержание контакт контейнера с стороне клетки, захвата животное в трубе. Выполните шаги 4.1.6 и 4.1.7 как можно быстрее (обработчика # 2).
    8. Снимите лоток подачи стальной и дать пластиковую крышку контейнера с укротителем # 2 (обработчик 1 #). Вставьте пластиковую крышку между боковыми клетки и контейнером, вспоминая придатков захваченных животного в процессе. Не закрывать контейнер, так как это сделает следующий шаг сложнее (обработчик # 2).
  2. AnesthesАйова
    1. Убедитесь, что контейнер остается закрытым и транспортировки животного в индукции камеры. Быстро разместить животное в камере и снимите крышку контейнера одним движением жидкости (обработчик # 2). Откройте и сразу же заменить крышку индукции камеры (обработчик # 1).
    2. Включите потока изофлюрана к индукции камеры (5 л / мин) и контролировать животное на наличие признаков летаргии, после чего быстро скользят животное из трубки и контейнер, удаляя как с индукционной камеры для облегчения циркуляции газа.
    3. Когда крыса полностью под наркозом, переместите его рабочей поверхности и поместите на нос и рот в нос конуса (рис 3). Крыса полностью под наркозом, когда он не отвечает на силового ног крайнем случае.
    4. Поместите ветеринар вазелин глазной мази на глазах животного, чтобы предотвратить сухость и ссадины. Это важный шаг, как хлопок крыс имеют большие глаза, которые могут быть подвержены инфекции в случае травмы.
    5. Тщательно контролировать и поддерживать постоянную частоту дыхания и убедитесь, что нос животного остается в носовом конусе фитинга на протяжении всей процедуры. Регулировка скорости потока изофлуран соответствующим образом. Количество изофлуран анестезии необходимо каждое животное будет меняться.
    6. После процедуры можно вернуться животное в клетку и убедиться, что он восстанавливает полную мобильность и грудины лежачее положение.

5. Подготовка LCRT клеток для подкожного опухолевого образования

ПРИМЕЧАНИЕ: Один T-150 колбу LCRT (90% слияния) дает около 2 х 10 7 клеток. Стройте количество Т-150 колб, необходимых от общего числа клеток, необходимых. Семенной дополнительные колбы, чтобы обеспечить общее количество клеток, необходимых получают и для размещения клеток, утраченных в процессе подготовки и те, которые необходимы для дополнительных инъекций. Хранить клетки на льду, когда это возможно, чтобы продлить жизнеспособность клеток.

  1. Для уборки клетки, аспирация среды из колбы апD промывки клеток с 5 мл 1x PBS.
  2. Аспирируйте PBS, и инкубировали клетки с 2 мл трипсина 1х, пока клетки диссоциируют из колбы (~ 2 мин).
  3. Ресуспендируют клеток в 8 мл среды (в общей сложности 10 мл клеточной суспензии) и аккуратно пипеткой вверх и вниз, чтобы разбить скопления клеток. Продолжайте собирать клетки от дополнительных колбах.
  4. Бассейн все клеточные суспензии в одну коническую трубку, примерно в 4 Т-150 в 50 мл коническую трубку.
  5. Центрифуга трубки на 160 х г в течение 10 мин при 4 ° С.
  6. Аспирируйте средних и ресуспендируют осадок клеток в соответствующий объем PBS (10 мл PBS на Т-150) с получением плотности клеток в счетной диапазоне с помощью гемоцитометра. Для обеспечения точного подсчета клеток, тщательно перемешать клеточной суспензии перед загрузкой гемоцитометр с помощью пипетки вверх и вниз.
  7. Рассчитать общее количество клеток:
    Общее количество собранных клеток = подсчета клеток (клеток / мл) х ресуспендирование объем (мл)
  8. ОпределятьОбъем клеточной суспензии требуется для всех инъекций. Сделайте 2-3 дополнительных доз в эксперименте. В общей сложности 5 × 10 5 клеток LCRT вводили подкожно образуют пальпируемых опухолей в течение 3-4 дней.
    Общее количество клеток, необходимых = 5 х 10 5 клеток х общего количества доз,
    Объем клеточной суспензии требуется (мл) = (общая клетки, необходимые * сумма объемов закачки) / (общее число клеток, полученных)
  9. Пипеткой необходимый объем клеточной суспензии в коническую пробирку, содержащую PBS и тщательно перемешать. Кратные отдельные инъекции (100 мкл) в пробирки Эппендорфа. Поддержание труб на льду во время процедуры инъекции.

6. Инъекции

ПРИМЕЧАНИЕ: Выполните процедуры с двух исследователей, один для выполнения инъекций, а остальные мониторы частота дыхания животного и общее состояние под наркозом. Используйте инсулиновые шприцы (29 г х 1/2 ", 0,3 мл) для всех инъекций и новой иглой длякаждое животное.

  1. Подкожные инъекции
    1. Захват и обезболить животное (раздел 4).
    2. Бритье место инъекции, используя ножницы. Хлопок крыса мех густой и требует резкого триммер, чтобы получить гладкую поверхность для инъекций. Очистите место инъекции 70% -ного этанола с помощью ватного тампона и дайте ему полностью испариться, прежде чем продолжить.
    3. Загрузка шприцы (29 г х 1/2 ", 0,3 мл) с клетками путем составления медленно и неуклонно. Если пузырьки видны фильм шприц с какой-либо силой. После того, как пузырьки в верхней толкать поршень до жидкости в верхней части иглы.
    4. Подтяжка кожи в месте инъекции (называется палаток кожи) и вставить иглу конической стороной вверх. Убедитесь, что игла движется свободно под кожу, чтобы избежать инъекций внутримышечно.
    5. Выгнать содержимое шприца равномерно и медленно. Извлеките иглу конической стороной вниз.
  2. Внутриопухолевых инъекции
    1. Захватбы обезболить животное (раздел 4).
    2. Очистите место инъекции 70% -ного этанола с помощью ватного тампона и дайте ему полностью испариться, прежде чем продолжить.
    3. Загрузка шприцы (29 г х 1/2 ", 0,3 мл) с вирусом посевного путем составления медленно и неуклонно, удерживая иглу в вертикальном положении. Если пузырьки видны фильм шприц с какой-либо силой. После того, как пузырьки в верхней нажатием затем плунжера, пока жидкость не находится в верхней части иглы.
    4. Вставить иглу конической стороной вверх в опухоль и удалить содержимое шприца равномерно и медленно при перемещении иглы в веерообразной модели, частично извлечение иглы перед каждым движением, чтобы предотвратить рваные раны опухоли. Извлеките иглу конической стороной вниз.
      ПРИМЕЧАНИЕ: подкожные опухоли LCRT быстро растет, достигая примерно 100 мм 3 в течение 5-7 дней. Кроме того, некротические и геморрагические центров часто образуют на поверхности опухоли в течение нескольких дней и требуют CAreful мониторинг (Рисунок 4).
  3. Внутрибрюшинные инъекции
    1. Захват и обезболить животное (раздел 4).
    2. Очистите место инъекции 70% -ного этанола с помощью ватных тампонов и дайте ему полностью испариться, прежде чем продолжить.
    3. Загрузка шприцы (29 г х 1/2 ", 0,3 мл) с препаратом путем составления медленно и неуклонно. Если пузырьки видны фильм шприц с какой-либо силой. После того, как пузырьки в верхней нажатием затем плунжера, пока жидкость не находится в верхней части иглы.
    4. Вставьте иглу в правом нижнем квадранте живота. Оттяните на поршень, чтобы гарантировать, что кровь или фекалии не отсасывали, это указывает на неправильное расположение иглы. Если это происходит, вывести иглы и подготовить новый шприц. Когда игла установлена ​​правильно, изгнать содержимое шприца равномерно и медленно.

7. удаления опухоли и Necropsy

  1. Сбор и очистить альл инструменты с 70% этанола до эвтаназии животного.
  2. Эвтаназии животное желаемым способом, CO 2 ингаляции (2 л / мин в течение 5-10 мин) рекомендуется. Осмотрите животное для каких-либо патологий в состоянии тела.
  3. Место животное в спинной лежачее положение на вскрытии борту и очистить животное с 70% этанола.
  4. Используйте пинцет, чтобы поднять кожу в нижней части живота. Вырезать через кожу и мышцы с помощью ножниц и сделать медиальной разрез, идущую по длине животного (анус до подбородка).
  5. Разрежьте грудной клетки, делая два надреза, один с боков до стороне грудной клетки и один по грудине, чтобы разоблачить сердце и легкие. Проверьте долях легких для любых метастазов 27,29.
  6. Осмотрите все органы для нарушений и записывать любые изменения по цвету, размеру и консистенции. Если необходимо, разрежьте органы с помощью скальпеля, чтобы изучить внутренние ткани. В частности, исследовать печень, почки, селезенка и желудочно-кишечный тракт,
  7. Проверьте лимфатические узлы метастазов и увеличение 27,29.
  8. Для сбора опухоль, чтобы боковые разрезы выше и ниже опухоли, так что кожа может быть отстранилась от тела с помощью пинцета. В то время как крепко держит кожу с помощью пинцета, использовать скальпель, чтобы тщательно удалить опухоль, сокращая между опухолью и дермы (рисунок 5).
  9. Сразу же место опухоли в маркированный контейнер 10% нейтральный буферный формалин.
  10. В зависимости от размера опухоли, позвольте 1-2 дней (≤ 2 мм, малый) или 5-6 дней (> 2 мм, большой) для фиксации перед приготовлением разделы для гистологического анализа (рисунок 6).

Результаты

Из-за чрезвычайно возбудимой природе хлопковых крыс, будучи знакомы с использованием процедур и оптимизированные для снижения нагрузки животных облегчит их использование в качестве доклинической модели животных. Использование надлежащих методов обработки также позволит свести к м?...

Обсуждение

Cotton rats are highly excitable and have a strong flight response. Therefore, special care should be taken to minimize any undue stress on the animal. The cage setup described will allow for safe and easy capture of the animals, with the placement of the enrichment tube being of the utmost importance. When setting up cages, ensure that the enrichment tubes meet the size and shape requirements, and are placed in proper orientation in the cage. It is also important to ensure that any technicians who might be aiding in ani...

Раскрытие информации

The authors acknowledge there are no financial conflicts of interest related to this research.

Благодарности

Breanne Cuddington holds a fellowship from the Canadian Breast Cancer Foundation. This work was sponsored by operating grants from the Cancer Research Society and the Canadian Cancer Society Research Institute (formerly the Canadian Breast Cancer Research Alliance). We thank Ann Tollefson (Saint Louis University School of Medicine) for LCRT cells and Dr. Kathleen Delaney and Marion Corrick for technical assistance with cotton rat housing and sedation.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Dulbecco’s modified Eagle’s medium Gibco11965-092May use any brand 
1X Phosphate Buffered Saline Can prepare in lab, filter to sterilize
200 mM L-glutamineGibco25030164May use any brand
100x Antibiotic-Antimycotic Gibco15240-062May use any brand
Fetal bovine serumQuality Biological Inc.110-001-101HIMay use any brand
T-150cm2 tissue culture flaskFisher Scientific14-826-80May use any brand
1X TypLE ExpressLife Technologies12604-013
12-well cell culture plate, flat bottomFisher Scientific08-772-29May use any brand, must be tissue culture treated
alamarBlueLife TechnologiesDAL1025May use an alternative reagent for determination of cell viability
8640 Teklad 22/5 Rodent dietHarlan 8640
1/8” corncob rodent beddingHarlan7092
NestletsAncare-Made of pulped virgin cotton fiber, dust-free and autoclavable
50 mL Conical tubesFisher Scientific14-432-22May use any brand, must be sterile
Isoflurane USP, 99.9 %, inhalation anestheticPharmaceutical Partners of Canada Inc.M60302
70% EthanolCan prepare in lab
10 % Neutral Buffered FormalinSigma-AldrichHT501128May use any brand
NAPCO NapFlow 1200 Class II A/B3 Biosafety Microbiological Safety Cabinet (cell culture hood)NAPCOModel used not currently availableMay use any brand
Thermo Fisher Scientific Precision Heated Water BathFisher ScientificModel used not currently available May use any brand
[header]
Reichert Bright-line HemacytometerSigma-AldrichZ359629May use any brand
Typhoon Trio BioAnalyzer GE Healthcare Life SciencesModel used not currently available May use any fluorescence plate reader
Tecan Safire2 Multi-detection Microplate ReaderTecanModel used not currently available May use any fluorescence plate reader
Allegra 6R benchtop centrifugeBeckman Coulter366816May use any brand
Table Top Anaesthesia machineVetEquipModel used not currently available May use any brand, must be portable
Wahl Peanut Mini ClippersWahlMay use any brand of small clippers
Insulin syringes 29 G x 1/2', 0.3 mLBD329464May use any brand. Insulin syringes are recommended as they make injections easier through the rat’s tough skin. 
Cotton swabsMedPro018-425May use any brand
Sharp-Pointed Dissecting ScissorsFisher Scientific8940May use any brand
Dissecting Tissue ForcepsFisher Scientific13-812-41May use any brand

Ссылки

  1. Cervantes-Garcia, D., Ortiz-Lopez, R., Mayek-Perez, N., Rojas-Martinez, A. Oncolytic virotherapy. Ann Hepatol. 7 (1), 34-45 (2008).
  2. Vaha-Koskela, M. J., Heikkila, J. E., Hinkkanen, A. E. Oncolytic viruses in cancer therapy. Cancer Lett. 254 (2), 178-216 (2007).
  3. Abril, C., et al. Both viral and host factors contribute to neurovirulence of bovine herpesviruses 1 and 5 in interferon receptor-deficient mice. J Virol. 78 (7), 3644-3653 (2004).
  4. Nakamichi, K., Matsumoto, Y., Otsuka, H. Defective infection of bovine herpesvirus 1 in non-permissive murine cells. J Vet Med Sci. 63 (10), 1139-1142 (2001).
  5. Boukhvalova, M. S., Blanco, J. C. The cotton rat sigmodon hispidus model of respiratory syncytial virus infection. Curr Top Microbiol Immunol. 372, 347-358 (2013).
  6. Papp, Z., Babiuk, L. A., Baca-Estrada, M. E. Induction of immunity in the respiratory tract and protection from bovine herpesvirus type 1 infection by different routes of immunization with recombinant adenovirus. Viral Immunol. 11 (2), 79-91 (1998).
  7. Hughes, T. C. R., Lilley, C. E., Ponce, R., Kaufman, H. L. Critical analysis of an oncolytic herpesvirus encoding granulocyte-macrophage colony stimulating factor for the treatment of malignant melanoma. Journal of Oncolytic Virotherapy. 3, 11-20 (2014).
  8. Jones, C., Chowdhury, S. A review of the biology of bovine herpesvirus type 1 (BHV-1), its role as a cofactor in the bovine respiratory disease complex and development of improved vaccines. Anim Health Res Rev. 8 (2), 187-205 (2007).
  9. Jones, C., Chowdhury, S. Bovine herpesvirus type 1 (BHV-1) is an important cofactor in the bovine respiratory disease complex. Vet Clin North Am Food Anim Pract. 26 (2), 303-321 (2010).
  10. Hushur, O., Takashima, Y., Matsumoto, Y., Otsuka, H. Restriction of bovine herpesvirus 1 (BHV-1) growth in non-permissive cells beyond the expression of immediate early genes. J Vet Med Sci. 66 (4), 453-455 (2004).
  11. Cuddington, B. P., Dyer, A. L., Workenhe, S. T., Mossman, K. L. Oncolytic bovine herpesvirus type 1 infects and kills breast tumor cells and breast cancer-initiating cells irrespective of tumor subtype. Cancer Gene Ther. 20 (5), 282-289 (2013).
  12. Cuddington, B. P., Mossman, K. L. Permissiveness of Human Cancer Cells to Oncolytic Bovine Herpesvirus 1 Is Mediated in Part by KRAS Activity. J Virol. 88 (12), 6885-6895 (2014).
  13. Small, E. J., et al. A phase I trial of intravenous CG7870, a replication-selective, prostate-specific antigen-targeted oncolytic adenovirus, for the treatment of hormone-refractory, metastatic prostate cancer. Mol Ther. 14 (1), 107-117 (2006).
  14. Freytag, S. O., et al. Phase I study of replication-competent adenovirus-mediated double suicide gene therapy for the treatment of locally recurrent prostate cancer. Cancer Res. 62 (17), 4968-4976 (2002).
  15. Benjamin, R., Helman, L., Meyers, P., Reaman, G. A phase I/II dose escalation and activity study of intravenous injections of OCaP1 for subjects with refractory osteosarcoma metastatic to lung. Hum Gene Ther. 12 (12), 1591-1593 (2001).
  16. Prince, G. A. The Cotton Rat in Biomedical Research. Animal Welfare Information Center Newsletter. 5 (2), 3-5 (1994).
  17. Tsai, J. C., Garlinghouse, G., McDonnell, P. J., Trousdale, M. D. An experimental animal model of adenovirus-induced ocular disease. The cotton rat. Arch Ophthalmol. 110 (8), 1167-1170 (1992).
  18. Ginsberg, H. S., et al. A mouse model for investigating the molecular pathogenesis of adenovirus pneumonia. Proc Natl Acad Sci U S A. 88 (5), 1651-1655 (1991).
  19. Russell, S. J., Peng, K. W., Bell, J. C. Oncolytic virotherapy. Nat Biotechnol. 30 (7), 658-670 (2012).
  20. Mossman, K. L., Saffran, H. A., Smiley, J. R. Herpes simplex virus ICP0 mutants are hypersensitive to interferon. J Virol. 74 (4), 2052-2056 (2000).
  21. Mossman, K. L., Smiley, J. R. Herpes simplex virus ICP0 and ICP34.5 counteract distinct interferon-induced barriers to virus replication. J Virol. 76 (4), 1995-1998 (2002).
  22. Hummel, J. L., Safroneeva, E., Mossman, K. L. The role of ICP0-Null HSV-1 and interferon signaling defects in the effective treatment of breast adenocarcinoma. Mol Ther. 12 (6), 1101-1110 (2005).
  23. Papp, Z., Middleton, D. M., Mittal, S. K., Babiuk, L. A., Baca-Estrada, M. E. Mucosal immunization with recombinant adenoviruses: induction of immunity and protection of cotton rats against respiratory bovine herpesvirus type 1 infection. J Gen Virol. 78 (11), 2933-2943 (1997).
  24. Papp, Z., Babiuk, L. A., Baca-Estrada, M. E. The effect of pre-existing adenovirus-specific immunity on immune responses induced by recombinant adenovirus expressing glycoprotein D of bovine herpesvirus type 1. Vaccine. 17 (7-8), 933-943 (1999).
  25. Mittal, S. K., et al. Induction of systemic and mucosal immune responses in cotton rats immunized with human adenovirus type 5 recombinants expressing the full and truncated forms of bovine herpesvirus type 1 glycoprotein gD. Virology. 222 (2), 299-309 (1996).
  26. Steel, J. C., et al. Syngeneic Cotton Rat Cancer Model for Replicating Adenoviral Vectors. Molecular Therapy. 13 (1), 123 (2006).
  27. Toth, K., et al. Cotton rat tumor model for the evaluation of oncolytic adenoviruses. Hum Gene Ther. 16 (1), 139-146 (2005).
  28. Toth, K., Spencer, J. F., Wold, W. S. Immunocompetent, semi-permissive cotton rat tumor model for the evaluation of oncolytic adenoviruses. Methods Mol Med. 130, 157-168 (2007).
  29. Steel, J. C., et al. Immunocompetent syngeneic cotton rat tumor models for the assessment of replication-competent oncolytic adenovirus. Virology. 369 (1), 131-142 (2007).
  30. Workenhe, S. T., et al. Immunogenic HSV-mediated oncolysis shapes the antitumor immune response and contributes to therapeutic efficacy. Mol Ther. 22 (1), 123-131 (2014).
  31. Sobol, P. T., et al. Adaptive antiviral immunity is a determinant of the therapeutic success of oncolytic virotherapy. Mol Ther. 19 (2), 335-344 (2011).
  32. Prince, G. A. The Cotton Rat in Biomedical Research. Animal Welfare Information Center Newsletter. 5 (2), (1994).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

931

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены