JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Здесь мы представляем метод для выражения и очистки S100A12 (calgranulin C). Мы описываем протокол для измерения его антимикробной активности против патогена человека H. pylori .

Аннотация

Calgranulin белки являются важными медиаторами врожденного иммунитета и являются членами класса S100 семейства EF-hand кальцийсвязывающих белков. Некоторые белки S100 обладают способностью связывать переходные металлы с высокой аффинностью и эффективно изолировать их от вторжения микробных патогенов в процесс, который называется «иммунитет к питанию». S100A12 (EN-RAGE) связывает как цинк, так и медь и очень распространен в врожденных иммунных клетках, таких как макрофаги и нейтрофилы. Мы сообщаем об усовершенствованном методе для экспрессии, обогащения и очистки S100A12 в его активной конфигурации связывания металла. Использование этого белка в анализе роста бактерий и жизнеспособности показывает, что S100A12 обладает антимикробной активностью в отношении бактериального патогена Helicobacter pylori . Антимикробная активность основана на цинксвязывающей активности S100A12, которая хелатирует питательный цинк, тем самым истощая H. pylori, которая требует роста цинка и proliferation.

Введение

Белки S100 представляют собой класс семейств кальцийсвязывающих белков семейства EF с разнообразным набором функций 1 . Они экспрессируются тканевым и клеточно определенным образом и регулируют широкий спектр клеточных функций 2 , 3 . Уникальные для кальцийсвязывающих белков белки S100 обладают как внутриклеточными, так и внеклеточными функциями 4 , 5 . Внутри клетки связывание Ca 2+ вызывает конформационное изменение, которое обнажает гидрофобную поверхность, которая специфически нацелена на белок-связывающие партнеры 6 . Этот внутриклеточный механизм регулирует важные процессы, такие как клеточная пролиферация, дифференцировка и энергетический обмен. Во внеклеточной среде белки S100 проявляют две функции 7 . В одном они действуют как связанные с повреждением молекулярные структуры (DAMP) белки и инициируют провоспалительныеИммунный ответ через взаимодействие с рецепторами распознавания образов 8 , 9 . Кроме того, некоторые члены S100 белкового класса секвестрируют переходные металлы, функцию, которая служит для голодания микробных патогенов в процессе, называемом питательным иммунитетом 10,11 .

S100A12 (также известный как кальгрунулин C и EN-RAGE) высоко экспрессируется в макрофагах и нейтрофилах и идентифицирован как потенциальный биомаркер воспалительных заболеваний 12 , 13 . В дополнение к связыванию кальция в его участках EF-Hand, S100A12 имеет два сайта связывания с высоким сродством переходного металла, расположенные на противоположных концах интерфейса 14 , 15 димера. Каждый сайт связывания состоит из трех остатков гистидина и одного остатка аспарагиновой кислоты и может содержать хелат цинка или меди 16 , 17 . Недавно мы сообщили, что S100A12-зависимое голодание от цинка играет важную роль в регуляции роста Helicobacter pylori и активности провоспалительных факторов вирулентности 18 .

H. pylori поражает желудок примерно у половины человечества; Что делает его одним из самых успешных бактериальных патогенов 19 . Инфекция H. pylori может привести к значительным исходам желудочно-кишечного тракта, включая гастрит, язвенную болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, лимфому, связанную с слизистой оболочкой (MALT), и инвазивную аденокарциному желудка (рак желудка). Рак желудка является ведущей причиной смертности от рака, связанного с некардиамой в мире, и единственным крупнейшим связанным фактором риска развития рака желудка является инфекция H. pylori .

H. pylori сохраняется в желудочной нише, несмотря на robuЙ иммунной реакции на патоген, что подчеркивает необходимость лучшего понимания иммунных механизмов борьбы с этой бактериальной инфекцией 20 , 21 , 22 , 23 . H. pylori- ассоциированное воспаление характеризуется глубокой инфильтрацией полиморфноядерных клеток или нейтрофилов, которые отлагают репертуар антимикробных белков, включая S100A12, в месте заражения 18 , 24 , 25 . Стремясь понять сложный диалог между хозяином и возбудителем, мы стремились усовершенствовать методику очистки S100A12 и использовать ее для изучения антимикробного воздействия, которое она оказывает на этого с медицинской точки зрения патогена. В приведенном ниже протоколе описан усовершенствованный метод очистки S100A12 в его биологически активном состоянии; Способный связывать питательные металлы с высоким аффиниТи и хелатируя их от вторгающихся микроорганизмов. Кроме того, приведенные ниже методы подчеркивают полезность этого белка как критического реагента для изучения механизма, посредством которого врожденные антимикробные молекулы ограничивают рост бактериальных патогенов.

Белок семейства S100A получил признание как важная группа врожденных молекул иммунной системы, которые участвуют в иммунной передаче сигналов, а также в защите хозяина 27 . Наиболее хорошо изученными из них являются кальпротектин (MRP-8/14, calgranulin A / B, S100A8 / A9) 28 , 29 , 30 . Кальпротектин представляет собой связанный с нейтрофилом белок, который образует гетеродимер субъединиц S100A8 и S100A9, который связывает переходные металлы на границе димера 31 . Было показано, что кальпротектин обладает двумя местами связывания металлов: участок 1 может связывать Zn 2+ , Mn 2+ или Fe 2+ , а сайт 2 может Связывают Zn 2+ 31 , 32 . Многочисленные сообщения показали, что кальпротектин обладает противомикробной активностью в отношении различных патогенных микроорганизмов, включая Staphylococcus aureus , Candida albicans , Acinetobacter baumannii , Klebsiella pneumoniae , Escherichia coli и H.pylori , и что ингибирующее действие обусловлено хелатной активностью металлов 25 , 28 , 29 .

Предыдущая работа продемонстрировала, что капротектин проявляет многочисленные активности в отношении H. pylori, включая изменение структуры липида А во внешней мембране, подавление системы секреции cag-типа IV (которая является основным провоспалительным фактором вирулентности в H. pylori ), индуцируя образование биопленки и подавление Рост и жизнеспособность H. pylori в зависимости от дозыClass = "xref"> 25 , 33 . Кроме того, генетические и биохимические анализы показали, что антибактериальная активность кальпротектина против H. pylori в значительной степени обусловлена ​​его способностью связывать питательный цинк 25 . H. pylori нуждается в цинке, как это было определено предыдущими исследованиями, в которых использовалась химически определенная среда, чтобы определить потребности в микроэлементах, чтобы этот патоген мог расти и размножаться 34 . Кроме того, кальпротектин был очень распространен в тканях, зараженных H.pylori , и связан с нейтрофильными инфильтратами, что указывает на то, что хозяин может использовать кальпротектин в качестве антимикробной стратегии при инфицировании и последующем воспалении 25 , 35 .

Недавние данные, полученные в результате несвязанных методов скрининга протеомики, свидетельствуют о том, что в условиях, когда активные формы кислорода многочисленны, calprotecОлово подвергается посттрансляционным модификациям, которые изменяют сайт связывания гексагистидина, тем самым ингибируя металлосвязывающую активность белка 36 . Таким образом, мы предположили, что другие белки семейства S100A в широком репертуаре этих молекул могут потенциально выступать в качестве вспомогательных металл-хелаторов. Мы выбрали S100A12 для дальнейшего исследования, потому что он не был идентифицирован на вышеупомянутом экране для посттрансляционной модификации, он обладает способностью связывать цинк, и он очень распространен в тканях человека, полученных от инфицированных H. pylori индивидуумов.

Наша работа показывает, что S100A12 может ингибировать рост и жизнеспособность H.pylori дозозависимым образом в G27 штамме H.pylori и что антимикробная активность этого белка может быть обращена путем добавления избытка питательного цинка. Эта работа дополняет нашу предыдущую работу, показывающую, что S100A12 проявляет противомикробную активность против PMSS1 и 7.13 штаммов H.pylori , демонстрируя его широкую антибактериальную активность против многочисленных клинических изолятов и лабораторно адаптированных штаммов H.pylori 18 . Вместе эти результаты подтверждают важность S100A12 в качестве механизма для контроля роста и пролиферации бактерий с помощью питательного иммунитета. Будущие исследования этого важного взаимодействия между хозяином и бактерией могут включать в себя использование активности S100A12 для снижения бактериальной нагрузки в тканях организма-хозяина или определения вклада этого белка в иммунную передачу сигналов в контексте инфекции H.pylori .

протокол

1. Выражение S100A12

  1. Трансформируйте компетентные клетки BL21 DE3 плазмидой pGEMEX-S100a12, используя стандартный протокол теплового шока 18 . Добавьте от 1 до 5 мкл плазмиды к 50 мкл бактерий в микроцентрифужную пробирку на льду. Инкубируйте в течение 20 мин.
  2. Тепловой удар клетки при 42 ° С в течение 30 с.
  3. Инкубируйте клетки на льду в течение 2 мин.
  4. Добавьте 500 мкл среды SOC к клеткам. Инкубируйте при 37 ° C со встряхиванием при 250 об / мин на орбитальном шейкере в течение 1 часа.
  5. Планшет 150 мкл реакции превращения на среде LB-агара (с добавлением 100 мкг / мл ампициллина). Инкубируйте в течение 12-16 ч при 37 ° C.
  6. Выберите одну колонию. Прививают 2 мл LB (с добавлением 100 мкг / мл ампициллина).
  7. Инкубируйте в течение 4-6 ч при 37 ° C на орбитальном шейкере (300 об / мин). OD 600 должен считывать между 1-3 единицами оптической плотности.
  8. Добавить 500 мкл стартовой культуры в 50 мл ZYM-5052 autoinduCtion media 26 с добавлением 100 мкг / мл ампициллина. Для наилучшей аэрации и максимальной экспрессии используйте колбу Эрленмейера вместимостью 250 мл. Встряхивают (300 об / мин) в течение 24 ч при 37 ° С.
  9. Перенесите бактериальную суспензию в центрифужную пробирку. Гранулировали клетки центрифугированием (4000 xg, 10 мин) при 4 ° C.
  10. Декантируйте среду, запишите образец и сохраните клеточную пасту при -80 ° C. Образец стабилен в течение многих лет.

2. Очистка S100A12 с использованием хроматографии низкого давления

  1. Ресуспендируют клетки в 30 мл 20 мМ Трис, рН 8,0.
  2. Утоните суспензию на льду для лизиса клеток. Используйте ~ 20 Вт выход, 5 с вкл и 5 с цикл выключения в течение 5 мин.
  3. Перенесите раствор в высокоскоростные центрифужные пробирки. Просветьте клеточный лизат центрифугированием, 20 000 мкг в течение 30 мин при 4 ° С.
  4. Декантируют супернатант и переносят в чистый стакан из полипропилена объемом 100 мл. Охладите раствор, поставив стакан на лед. Добавить перемешиваниеГ и медленно добавляют 11,20 г сульфата аммония. Дать раствору перемешать на льду еще 1 час. Это создаст 60% -ный раствор сульфата аммония и осадит большинство эндогенных белков E.coli . S100A12 останется растворимым.
  5. Центрифугируйте раствор при 4 ° С, 20 000 мкг в течение 20 мин для осаждения осажденного белка.
  6. Декантируют надосадочную жидкость и переносят в диализную трубку (MWCO 3500 кДа). Диализу против 1 л 20 мМ Трис, рН 8,0 при 4 ° С. Дважды меняйте буфер диализа. Разрешить между изменениями 4 часа.
  7. Анионообменная хроматография
    1. Выполните хроматографию на системе низкого давления. Типичный расход составляет 1 мл / мин.
    2. Растворяют в 5 мл колонке с сефарозой 10 мл 20 мМ Трис, pH 8,0.
    3. Загрузите ~ 40 мл раствора S100A12, используя пробоотборный насос (соберите поток).
    4. Промывают колонку 10 мл 20 мМ Трис, pH 8.
    5. Разработайте столбец с градиентом 0-30% (BuFfer B - 20 мМ Трис, pH 8,0, 1 М NaCl) в 19 объемах колонки (CV, 95 мл). Соберите фракции по 5 мл.
    6. Возьмите 10 мкл аликвоты каждой фракции и проанализируйте, используя MES SDS PAGE с окрашиванием Кумасси. Выполнить гель с использованием постоянного напряжения (20 В / см) в течение 30 мин.
    7. Фракции пула, содержащие S100A12. S100A12 работает на протеине ~ 10 кДа на денатурирующем геле.
    8. Концентрируют фракции до 5 мл, используя ультрафильтрационное устройство (MWCO 10 кДа). Центрифуга при 3000 мкг в течение ~ 8 мин. Возьмите верхнюю фракцию.
  8. Хроматография с исключением по размеру
    1. Равновесили колонку S75 с 1 CV (120 мл) 20 мМ Tris pH 8, 100 мМ NaCl.
    2. Вводят <5 мл концентрированных фракций S100A12 (из ионообменной хроматографии).
    3. Развести колонку при расходе 1 мл / м на 120 мл. Соберите фракции по 5 мл.
    4. Возьмите 10 мкл аликвоты каждой фракции и проанализируйте, используя SDS PAGE с окрашиванием Кумасси. Подтвердить идентичность белка с помощьюВестерн-блот или масс-спектрометрию (рассчитанная молекулярная масса мономерной субъединицы 10 575,0 Да, измеренная 10575,4 Да).
  9. Фракции пулов
    1. Измерить поглощение белка A 280 с помощью спектрофотометра. Используйте SEC-буфер как пустой. Рассчитанный коэффициент экстинкции для гомодимера S100A12 составляет 5960 М -1 см -1 .
      ПРИМЕЧАНИЕ. Типичный выход составляет 35-45 мг S100A12 на 50 мл культуры.
    2. Aliquot S100A12 в 1,5 мл пробирки для микроцентрифугирования (1 мг / пробирка), замораживают в жидком азоте и хранят при -80 ° C.

3. Анализы антимикробной активности

  1. Streak H. pylori штамм G27 на трипсиновые чашки соевого агара с добавлением 5% овечьей крови (пластины агара для крови). Выращивайте 2-3 дня при 37 ° C в комнатном воздухе с добавлением 5% двуокиси углерода.
  2. Прививают H. pylori в бульон Brucella, дополненный 1x холестерином. Культура за(250 об. / Мин) при 37 ° C в воздухе в помещении с добавлением 5% двуокиси углерода.
  3. Разбавляют H.pylori 1:10 в 50% бульон Бруцеллы, 50% буфера кальпротектина плюс 1х холестерин и культуру в среде отдельно или дополняют 100 мкМ хлоридом цинка плюс 0, 100 или 1000 мкг / мл очищенного S100A12. Культуральное ночное встряхивание (250 об / мин) при 37 ° С в воздухе в помещении с добавлением 5% диоксида углерода.
  4. На следующий день проводят серийные разведения и планшеты на планшеты с кровяным агаром. Позвольте бактериальным колониям расти в течение 2-3 дней при температуре 37 ° C в комнатном воздухе, дополненном 5% двуокисью углерода. Перечислите единицы формирования колоний для расчета роста бактерий в присутствии или в отсутствие S100A12 и / или экзогенного цинка.

Результаты

S100A12 экспрессия и очистка

Трехступенчатая очистка дает ~ 40 мг рекомбинантного S100A12 из 50 мл бактериальной культуры. Первой стадией было осаждение сульфатом аммония эндогенных белков E.coli . За этой стадией следовала анионообменная хр?...

Обсуждение

Представлен эффективный протокол для экспрессии и очистки человеческого S100A12. Система экспрессии E. coli является наиболее распространенным инструментом, используемым для производства рекомбинантных белков, особенно когда количество мг требуется для биохимических и биофизически...

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

Это исследование было поддержано Департаментом по развитию карьеры при Департамента по делам ветеранов 1IK2BX001701, премией CTSA UL1TR000445 от Национального центра продвижения трансляционных наук, премий Национального научного фонда № 1547757 и 1400969 и гранта NIH GM05551. Его содержание полностью принадлежит авторам и не обязательно отражает официальные взгляды Национального центра продвижения трансляционных наук или Национальных институтов здравоохранения.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
S100A12 Expression
Expression cells
BL 21 (DE3) competent cellsNew England BiolabsC25271
Autoinduction medium components
Yeast ExtractResearch Products InternationalY20020-250.0
NaClResearch Products InternationalS23020-500.0
TryptoneResearch Products InternationalT60060-250.0
FeCl3Sigma-AldrichF2877
MgSO4Research Products InternationalM65240-100.0
Na2HPO4Research Products InternationalS23100-500.0
KH2PO4Research Products InternationalP41200-500.0
NH4ClResearch Products InternationalA20424-500.0
Na2SO4Research Products InternationalS25150-500.0
GlycerolResearch Products InternationalG22020-1.0
D-glucoseResearch Products InternationalG32040-500.0
lactoseSigma-AldrichL2643
Selection agent
ampicillinResearch Products InternationalA40040-5.0
S100A12 Purification
AKTA Start Chromatography SystemGE29-220-94
HiTrap Q Sepharaose Fast FlowGE17-5156-01
HiPrep 16/60 S-200 HRGE17-1166-01
Nanodrop lite spectrophotometerThermo Fisher ScientificND-LITE
Tris BaseResearch Products InternationalT60040-1000.0
H. pylori Culture
Blood agar platesLab Supply CompanyBBL221261
Brucella brothSigma-AldrichB3051
Cholesterol (250x)Thermo Fisher Scientific12531018
NaClSigma-Aldrich793566
CaCl2Sigma-AldrichC4901
β-mercaptoethanolSigma-AldrichM6250
Tris BaseSigma-AldrichT1503
Zinc ChlorideSigma-Aldrich229997

Ссылки

  1. Schiopu, A., Cotoi, O. S. S100A8 and S100A9: DAMPs at the crossroads between innate immunity, traditional risk factors, and cardiovascular disease. Mediators Inflamm. 2013, 828354 (2013).
  2. Chen, B., et al. S100A9 induced inflammatory responses are mediated by distinct damage associated molecular patterns (DAMP) receptors in vitro and in vivo. PLoS One. 10 (2), e0115828 (2015).
  3. Chernov, A. V., et al. The calcium-binding proteins S100A8 and S100A9 initiate the early inflammatory program in injured peripheral nerves. J Biol Chem. 290 (18), 11771-11784 (2015).
  4. Fanjul, M., et al. Presence of MRP8 and MRP14 in pancreatic cell lines: differential expression and localization in CFPAC-1 cells. Am J Physiol. 268 (5 Pt 1), C1241-C1251 (1995).
  5. Vogl, T., Gharibyan, A. L., Morozova-Roche, L. A. Pro-inflammatory S100A8 and S100A9 proteins: self-assembly into multifunctional native and amyloid complexes. Int J Mol Sci. 13 (3), 2893-2917 (2012).
  6. Smith, S. P., Shaw, G. S. A change-in-hand mechanism for S100 signalling. Biochem Cell Biol. 76 (2-3), 324-333 (1998).
  7. Bresnick, A. R., Weber, D. J., Zimmer, D. B. S100 proteins in cancer. Nat Rev Cancer. 15 (2), 96-109 (2015).
  8. Leclerc, E., Heizmann, C. W. The importance of Ca2+/Zn2+ signaling S100 proteins and RAGE in translational medicine. Front Biosci (Schol Ed). 3, 1232-1262 (2011).
  9. Goyette, J., Geczy, C. L. Inflammation-associated S100 proteins: new mechanisms that regulate function. Amino Acids. 41 (4), 821-842 (2011).
  10. Kehl-Fie, T. E., Skaar, E. P. Nutritional immunity beyond iron: a role for manganese and zinc. Curr Opin Chem Biol. 14 (2), 218-224 (2010).
  11. Zackular, J. P., Chazin, W. J., Skaar, E. P. Nutritional Immunity: S100 Proteins at the Host-Pathogen Interface. J Biol Chem. 290 (31), 18991-18998 (2015).
  12. Realegeno, S., et al. S100A12 Is Part of the Antimicrobial Network against Mycobacterium leprae in Human Macrophages. PLoS Pathog. 12 (6), e1005705 (2016).
  13. Perera, C., McNeil, H. P., Geczy, C. L. S100 Calgranulins in inflammatory arthritis. Immunol Cell Biol. 88 (1), 41-49 (2010).
  14. Moroz, O. V., et al. Structure of the human S100A12-copper complex: implications for host-parasite defence. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 59 (Pt 5), 859-867 (2003).
  15. Moroz, O. V., Blagova, E. V., Wilkinson, A. J., Wilson, K. S., Bronstein, I. B. The crystal structures of human S100A12 in apo form and in complex with zinc: new insights into S100A12 oligomerisation. J Mol Biol. 391 (3), 536-551 (2009).
  16. Moroz, O. V., Dodson, G. G., Wilson, K. S., Lukanidin, E., Bronstein, I. B. Multiple structural states of S100A12: A key to its functional diversity. Microsc Res Tech. 60 (6), 581-592 (2003).
  17. Cunden, L. S., Gaillard, A., Nolan, E. M. Calcium Ions Tune the Zinc-Sequestering Properties and Antimicrobial Activity of Human S100A12. Chem Sci. 7 (2), 1338-1348 (2016).
  18. Haley, K. P., et al. The Human Antimicrobial Protein Calgranulin C Participates in Control of Helicobacter pylori Growth and Regulation of Virulence. Infect Immun. 83 (7), 2944-2956 (2015).
  19. Cover, T. L., Blaser, M. J. Helicobacter pylori in health and disease. Gastroenterology. 136 (6), 1863-1873 (2009).
  20. Tham, K. T., et al. Helicobacter pylori genotypes, host factors, and gastric mucosal histopathology in peptic ulcer disease. Hum Pathol. 32 (3), 264-273 (2001).
  21. Wotherspoon, A. C., Ortiz-Hidalgo, C., Falzon, M. R., Isaacson, P. G. Helicobacter pylori-associated gastritis and primary B-cell gastric lymphoma. Lancet. 338 (8776), 1175-1176 (1991).
  22. Correa, P., Piazuelo, M. B. The gastric precancerous cascade. J Dig Dis. 13 (1), 2-9 (2012).
  23. de Martel, C., Forman, D., Plummer, M. Gastric cancer: epidemiology and risk factors. Gastroenterol Clin North Am. 42 (2), 219-240 (2013).
  24. Algood, H. M., Gallo-Romero, J., Wilson, K. T., Peek, R. M., Cover, T. L. Host response to Helicobacter pylori infection before initiation of the adaptive immune response. FEMS Immunol Med Microbiol. 51 (3), 577-586 (2007).
  25. Gaddy, J. A., et al. The host protein calprotectin modulates the Helicobacter pylori cag type IV secretion system via zinc sequestration. PLoS Pathog. 10 (10), e1004450 (2014).
  26. Studier, F. W. Stable expression clones and auto-induction for protein production in E. coli. Methods Mol Biol. 1091, 17-32 (2014).
  27. Gilston, B. A., Skaar, E. P., Chazin, W. J. Binding of transition metals to S100 proteins. Sci China Life Sci. 59 (8), 792-801 (2016).
  28. Corbin, B. D., et al. Metal chelation and inhibition of bacterial growth in tissue abscesses. Science. 319 (5865), 962-965 (2008).
  29. Kehl-Fie, T. E., et al. Nutrient metal sequestration by calprotectin inhibits bacterial superoxide defense, enhancing neutrophil killing of Staphylococcus aureus. Cell Host Microbe. 10 (2), 158-164 (2011).
  30. Liu, J. Z., et al. Zinc sequestration by the neutrophil protein calprotectin enhances Salmonella growth in the inflamed gut. Cell Host Microbe. 11 (3), 227-239 (2012).
  31. Damo, S. M., et al. Molecular basis for manganese sequestration by calprotectin and roles in the innate immune response to invading bacterial pathogens. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (10), 3841-3846 (2013).
  32. Nakashige, T. G., Zhang, B., Krebs, C., Nolan, E. M. Human calprotectin is an iron-sequestering host-defense protein. Nat Chem Biol. 11 (10), 765-771 (2015).
  33. Gaddy, J. A., et al. Helicobacter pylori Resists the Antimicrobial Activity of Calprotectin via Lipid A Modification and Associated Biofilm Formation. MBio. 6 (6), e01349-e01315 (2015).
  34. Testerman, T. L., Conn, P. B., Mobley, H. L., McGee, D. J. Nutritional requirements and antibiotic resistance patterns of Helicobacter species in chemically defined media. J Clin Microbiol. 44 (5), 1650-1658 (2006).
  35. Leach, S. T., Mitchell, H. M., Geczy, C. L., Sherman, P. M., Day, A. S. S100 calgranulin proteins S100A8, S100A9 and S100A12 are expressed in the inflamed gastric mucosa of Helicobacter pylori-infected children. Can J Gastroenterol. 22 (5), 461-464 (2008).
  36. Wilkie-Grantham, R. P., et al. Myeloperoxidase-dependent lipid peroxidation promotes the oxidative modification of cytosolic proteins in phagocytic neutrophils. J Biol Chem. 290 (15), 9896-9905 (2015).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

BiochemistryHelicobacter pyloriS100A12

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены