Одновременной записи корковых местных потенциалов поля, электрокардиограмма, электромиограммы и дыхательный ритм от свободно движущихся крыса

Резюме

Это исследование вводит метод для одновременной записи местных потенциалов поля в мозг, электрокардиограммы, электромиограммы и дыхание сигналы свободно движущихся крысы. Это техника, которая снижает затраты на экспериментальной и упрощает анализ данных, будет способствовать пониманию взаимодействия между мозгом и периферийных органов.

Аннотация

Мониторинга физиологических динамика головного мозга и периферических тканях необходима для решения ряда вопросов о как мозг контроль тела функции и ритмы, внутренний орган когда животные подвергаются эмоциональные проблемы и изменения в их условий жизни. В целом эксперименты, сигналы от различных органов, таких как мозг и сердце, записываются в системах независимые записи, которые требуется несколько устройств записи и различные процедуры для обработки файлов данных. Это исследование описывает новый метод, который может одновременно контролировать электрические биосигналов, включая десятки местных потенциалов поля в нескольких областях мозга, электрокардиограммы, которые представляют сердечного ритма, электромиограммы, которые представляют проснулся / связанных с сна мышц и дыхание сигналов, свободно движущихся крыс. Запись конфигурации этот метод основан на обычных микро дисковый массив для корковых местах потенциальных записей, в которых размещаются десятки электродов, и сигналы, полученные из этих электродов интегрированы в единый Шкафы электрические монтируется на голову животного. Здесь эта система записи была улучшена, так что сигналы от периферических органов также передаются электрические интерфейсная плата. В одной операции электроды сначала отдельно имплантируется в целевых областях мозга и соответствующие части. Открытые концы всех этих электродов затем припаиваются к отдельным каналам электрической платы выше головы животного так, что все сигналы могут быть интегрированы в одноплатный электрические. Подключение к устройству записи этот Совет позволяет осуществлять сбор всех сигналов в единое устройство, которое уменьшает экспериментальной расходы и упрощает обработку данных, поскольку все данные могут быть обработаны в один и тот же файл данных. Эта техника будет способствовать пониманию нейрофизиологических коррелятов ассоциаций между органами Центральной и периферической.

Введение

Центральной нервной системы контролирует орган государства в ответ на различные экологические изменения, и этот элемент управления обычно представлены как изменения в пульс, частоту дыхания и сокращения мышц. Однако несколько исследований проверили, как такие периферийные физиологические факторы связаны с корковой активности. Для решения этой проблемы, необходимо крупномасштабных записи метод для контроля электрических биосигналов из центральных и периферических тканей. В коре местах потенциал (LFP) сигналы записываются внеклеточно электродов, которые вставляются в кортикальной тканей^1,2,3. Одновременно записать несколько LFP сигналы из коркового регионов мелких млекопитающих, таких как крыс и мышей, ряд исследований были разработаны различные типы сборок на заказ электрода, которые называются микро диски. Обычные микро привод состоит из металлических винтов придает средней части электродов (которые обычно tetrodes), основного органа, который вмещает винты и электродов и электрические интерфейсная плата (ЕИБ) которая приспосабливает металла отверстия для Соедините открытые концы электродов (рис. 1, рис. 2и рис. 3). Эта Ассамблея электрода позволяет оператору контролировать глубину многих электродов, вставляется в мозге в течение дней до нескольких недель и позволяет проводить долгосрочный хронический записи активности нейронов, как животное оспаривается с различными поведенческих задач. В периферических органах сердцебиение сигналы регистрируются как электрокардиограммы (ЭКГ) с помощью пары электродов, которые имплантированы на или вокруг сердца район^4,5,6, и скелетных мышц сигналы записываются как электромиограммы (EMGs) с электродами, которые вставляются в мышечной ткани^7,8,9. Отношения между электрических сигналов обонятельные луковицы и ритм дыхания (BR) была изучена с единицей записи^10,11. В записи обычных систем, эти сигналы от различных тканей были захвачены независимых записывающих устройств, это означает, что дополнительные экспериментальные системы требуется точно синхронизировать эти несколько устройств для одновременного записи сигналов мозга и тела. Эта система была разработана для преодоления этой проблемы. В этой системе все электрические сигналы, записанных из периферийных органов, включая ЭКГ, EMGs и электрические сигналы от обонятельные луковицы, которые отражают ритм дыхания, интегрированы в единый массив микро привод^{1,2 ,3}, здесь называют массив интегративной микро привод. Эта система требует только одно устройство записи многоканальных и применима для любого обычного массива микро привод. Преимущества этой методики, что она не требует каких-либо специальных устройств или триггера сигналов соответствует время записи нескольких устройств, и это позволяет для более удобной обработки данных, так как все сигналы записываются как одинаковые типы данных. Эта техника будет способствовать пониманию нейрофизиологических коррелятов ассоциаций между органами Центральной и периферической. В этом документе описываются процедуры, связанные с техникой и представляет представитель наборы данных, полученные из крыса.

протокол

Все процедуры с участием животных темы были выполнены согласно NIH руководящие принципы для ухода и использования животных.

1. Подготовка интегративной массива, микро привода

1. Создайте массив микро привода для корковой LFP записей, как описано в других местах^1,2,3. Оставить по крайней мере 6 металлических отверстия открыть на электрод интерфейсная плата (ЕИБ) для использования как ЭКГ/ГРП/BR каналы, которые подключены к bioflex провода, как описано в 1.2.
2. Вырезать bioflex проволока на 6 частей с длиной от 5.0 см. пилинг покинуть политетрафторэтилена (ПТФЭ) покрытия обоих концах кусочков проволоку длиной ~5.0 мм. Подключите один конец каждого из проволоки штук одного из открытых металлических отверстий (ЭКГ/ГРП/BR каналов) на ЕИБ с золото pin.
3. Вырежьте эмаль провод на две части 5.0-см. Припой один конец каждого из этих провода на землю/ссылка (g/r) каналы на ЕИБ (рис. 3, см. также предыдущие документы^12,13).
4. Для подготовки электроды ЭКГ вырежьте bioflex проволока на две части 16-см. Отделите PTFE покрытие заканчивается эти куски проволоки в длину ~5.0 мм на одном конце (короткий конец) и ~ 15 мм на другом конце (длинный конец).
5. Форма кольца провод с диаметром 2,0 мм, сгибая длинный конец проволоки и крепление форму кольца с помощью пайки.
6. Для подготовки ГРП электродов вырежьте bioflex проволока на 2 куски длиной в 8 см. пил с PTFE покрытием с обеих сторон эти куски проволоки длиной ~5.0 мм.
7. Для подготовки BR электродов, вырезать bioflex проволока на 2 куски длиной от 6.0 см. кожуру от эмалевого покрытия обоих концах эти куски проволоки длиной ~5.0 мм. припой один конец каждого из этих частей проволоки в голову из нержавеющей стали винт (стволовых dia метр: 1.0 мм, длина стебля: 4,0 мм).
8. Для подготовки земли/ссылка (gr) электродов вырезать эмаль провод на 2 куски длиной от 6.0 см. пилинг от эмалевого покрытия обоих концах эти куски проволоки длиной ~5.0 мм. припой один конец каждого из этих частей проволоки в голову-нерж угорь винт (диаметр штока: 1.4 мм, длина стебля: 3,0 мм).
9. Газовой стерилизации всех электродов и винты из нержавеющей и держать их в чистое пространство.

2. Имплантация электродов ЭКГ/ГРП

Примечание: Выполните все хирургические с асептической техники, использованием стерилизованное Перчатки и автоклавного инструментов. Для всех шагов, предполагающие создание разреза стерилизовать кожи с 70% этанол до и охватывать разрез с хирургической драпировкой.

1. Исправить наркотизированных крыс (1,0-3,0% изофлюрановая газ) на задней панели плоские тепла. Дать бупренорфина как анальгетик. Место Ветеринарные мази на глаза крыс для предотвращения сухости. Используйте Бетадин для очистки поверхности кожи.
2. Надрезать ~2.0 см в области медиальной груди. Разоблачить межреберные мышцы, разделяя мышцы груди. Шовные кольца электроды ЭКГ на межреберные мышцы.
3. Исправьте в желудке животного на площадку тепла. Надрезать ~1.0 см в области спины шеи.
4. Вставьте электроды ЭКГ подкожно через груди разрез. Вставьте концы в области шеи, спины и вытащить их из разрез шеи. Шовные груди разрез.
5. Вставьте один конец каждого из ГРП электродов подкожно длиной ~2.0 см через разрез шеи. Исправьте ГРП электродов в мышцы шеи путем наложения швов.

3. Имплантация электродов BR и интегративной микро дисковый массив

1. Fix крысу на стереотаксического устройства. Сделайте надрез см ~3.0 на голову вдоль средней точки между глазами в области шеи. Разоблачить черепа.
2. Сделать два craniotomies круговой с диаметром 0,7-1,0 мм выше обонятельные луковицы 11.0 мм передней и 1 мм двусторонних bregma с помощью высокоскоростных дрели. Имплантата двух электродов BR в череп, до тех пор, пока кончики стеблей винт прикреплены к поверхности мозга.
3. Сделать два craniotomies круговой с диаметром 0,7-1,0 мм выше лобной коры 2,7 мм передней и 2,7 мм двустороннего bregma. Имплантата 2 g/r электроды в череп, до тех пор, пока кончик стержня винта крепится к поверхности мозга.
4. В окрестностях больших краниотомии сделайте шесть-восемь отверстий диаметром 1,0 мм. Имплантат якорь винты (диаметр штока: 1.4 мм, длина стебля: 3,0 мм) в черепе.
5. Сделать большой краниотомии круговой с диаметром ~2.0 мм над гиппокампа 3,8 мм задняя и 2,5 мм двустороннего bregma. Место интегративной микро дисковый массив, таким образом, чтобы кончик канюли в массив диск расположен над большой краниотомии
6. Заполните пространство разрыв между кончиком канюли и поверхности мозга с ~ 100 мкл двух решений, т.е., 0,5% (по массе) альгината натрия и хлорида кальция 10% (по массе).
   Примечание: Этот процесс образует прозрачный гель в ~ 5 мин, после того, как два решения смешиваются на черепе.
7. Обложка канюля, BR электродов, электроды g/r, и якорь винты с стоматологического цемента толщиной 0,5 см. быть осторожным не закрыть открытые концы BR и g/r электродов с цементом на этот шаг.
8. Припой открытыми концами электродов ЭКГ, ГРП, BR и g/r советы отдельных проводов, которые ранее были связаны с ЕИБ (см. шаги 1.2 и 1.3).
9. Покрытие нижней части интегративной массив микро привод и все провода электрод, с стоматологического цемента. Обеспечить все провода электрода полностью покрыты так, что крысы не поцарапать их после имплантации.
10. После восстановления достаточно сознания для поддержания грудной recumbency, вернуть его прозрачный Plexiglas дома cag животное и держать его на свой собственный бесплатный доступ к воде и продовольствию. После операции лечить животных антибиотиками (гентамицин).
11. После операции контролировать животных с ежедневные наблюдения. Проверьте, что они ходить правильно, и что они не скрипят, когда экспериментатор касается микро дисковый массив.

4. в естественных условиях записи

Примечание: Все сигналы усиливаются, отведать в 2 кГц и полосовые отфильтрованных (0.1 - 500 Гц) за исключением деятельности единицы (пробы на 30 кГц и полосовые отфильтрованных (500-6 кГц)).

1. Подключите ЕИБ интегративной массива микро привод к headstage устройство записи.
2. Заранее tetrodes, поворачивая винты на несколько недель после операции. После tetrodes рядом целевых областей мозга, решить tetrodes в области в течение нескольких дней для стабильной записей.
3. Контролировать электрические сигналы, в то время как животное свободно перемещается в камере записи.

Результаты

Этот метод может одновременно захватить биоэлектрические сигналы от нескольких органов, которые представляют активность нейронов мозга, частота сердечных сокращений, дыхания, ритм и сокращения скелетных мышц (рис. 1). Рисунок 4

Обсуждение

Для понимания того, как мозг модулирует уровни периферической активности и наоборот, крупномасштабные запись методы одновременно захватить электрические биосигналов из нескольких областей тела являются необходимыми. Это исследование описал хирургическая процедура и записи системы...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
FEP Hookup Wire Stranded Stainless Steel	Cooner Wire Company, Chatsworth, CA	AS 633	Bioflex wire
EIB-36-PTB	Neuralynx, Inc., Bozeman, MT	EIB-36-PTB	EIB
Cereplex  M	Blackrock  Microsystems, Salt Lake City, UT		Digital headstage
Cereplex Direct	Blackrock  Microsystems, Salt Lake City, UT		Data acquisition system
UEW polyurethane magnet wire	Oyaide.com, Tokyo, Japan	UEW 0.14mm 20m	Enamel wire
SD-102	Narishige, Tokyo, Japan	SD-102	High-speed drill
Minimo ONE SERIES ver.2	Minitor Co.,Ltd, Tokyo, Japan	C2012	High-peed drill Power Supply
Provinice 250 mL	Shofu Inc., Kyoto, Japan	213620136	Dental cement
Small Animal Anesthetizer	Biomachinery, Chiba, Japan	TK-7	Anesthetizer
Buprenorphine hydrochloride	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	B7536-1ML	Analgesic
Isoflurane	DS Pharma Animal Health, Osaka, Japan	Isoflu 250mL
Vaseline, White	Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka, Japan	224-00165	Vet ointment
Sodium alginate	Nacalai tesque, Kyoto, Japan	31131-85
Calcium Chloride Dihydrate	Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Osaka, Japan	031-00435
Stainless steel screw M1.0×4.0	MonotaRO, Hyogo, Japan	42617504	Stainless steel screw for BR electrodes
Stainless steel screw M1.4×3.0	MonotaRO, Hyogo, Japan	42617687	Stainless steel screw for g/r electrodes and anchors