АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Секреция корневых экссудатов обычно является внешней стратегией детоксикации растений в стрессовых условиях. В этом протоколе описывается, как оценить влияние ксенобиотиков на люцерну с помощью нецелевого метаболомного анализа.

Аннотация

Корневые экссудаты являются основным средством передачи информации и передачи энергии между корнями растений и окружающей средой. Изменение секреции корневых экссудатов обычно является внешней стратегией детоксикации растений в условиях стресса. Этот протокол направлен на введение общих рекомендаций по сбору экссудатов корня люцерны для изучения влияния ди(2-этилгексил)фталата (DEHP) на производство метаболитов. Во-первых, саженцы люцерны выращивают под давлением DEHP в эксперименте по гидропонной культуре. Во-вторых, растения переносят в центрифужные пробирки, содержащие 50 мл стерилизованной сверхчистой воды, в течение 6 часов для сбора корневых экссудатов. Затем растворы лиофилизируют в вакуумной сублимационной сушилке. Замороженные образцы экстрагируют и дериватизируют реагентом бис(триметилсилил)) трифторацетамида (БСТФА). Затем дериватизированные экстракты измеряют с помощью системы газового хроматографа в сочетании с времяпролетным масс-спектрометром (ГХ-ТОФ-МС). Полученные данные о метаболитах затем анализируются на основе биоинформатических методов. Дифференциальные метаболиты и значительно измененные пути метаболизма должны быть глубоко изучены, чтобы выявить влияние DEHP на люцерну с учетом корневых экссудатов.

Введение

Ди(2-этилгексил)фталат (DEHP) представляет собой синтетическое химическое соединение, которое широко используется в различных пластмассах и полимерах в качестве пластификатора для повышения их пластичности и прочности. В последние несколько лет все большее число исследований показало, что DEHP является эндокринным разрушителем и оказывает неблагоприятное воздействие на дыхательную, нервную и репродуктивную системы человека и других животных 1,2,3. Учитывая риск для здоровья, Агентство по охране окружающей среды США, Европейский Союз и Центр мониторинга окружающей среды Китая включили DEHP в список приоритетных загрязнителей. Почва считается важным поглотителем DEHP в окружающую среду из-за применения пластикового мульчирования и органических удобрений, орошения сточными водами и применения на иловых фермах4. Как и ожидалось, в почвах сельскохозяйственных угодий повсеместно обнаружен DEHP, содержание которого в некоторыхрегионах Китая достигает даже 5,6 миллиграмма на килограмм высохшей почвы. DEHP может проникать в растения главным образом через корни и подвергаться биоусилению на различных трофических уровнях в почвенных экосистемах7. Поэтому в последние десятилетия была высказана серьезная озабоченность по поводу стресса, вызванного DEHP в растениях.

Растения обычно уязвимы к воздействию DEHP. Было замечено, что стресс DEHP оказывает неблагоприятное воздействие на прорастание семян и нормальный обмен веществ, тем самым подавляя рост и развитие растений 8,9. Например, DEHP может вызывать окислительное повреждение клеток мезофилла, уменьшать содержание хлорофилла и осмолитов и повышать активность антиоксидантных ферментов, что в конечном итоге приводит к снижению урожайности и качества съедобных растений10,11. Однако большинство предыдущих исследований реакции растений на стресс DEHP были сосредоточены на окислительном стрессе и физиологических и биохимических характеристиках. Соответствующие механизмы, связанные с метаболизмом растений, менее изучены. Корневые экссудаты — это общий термин, описывающий соединения, которые корни растений выделяют и выделяют в окружающую среду. Они рассматривались как среда взаимодействия между растениями и ризосферной почвой, играющая важную роль в поддержке роста и развития растений12. Хорошо известно, что корневые экссудаты составляют примерно 30-40% всего фотосинтезирующегоуглерода 13. В загрязненной среде корневые экссудаты участвуют в повышении устойчивости растений к стрессу загрязняющих веществ посредством метаболизма или внешнего исключения14. Как следствие, глубокое понимание реакции экссудатов корней растений на стресс загрязнения может помочь выявить основные механизмы, связанные с биохимией клеток и биологическими явлениями15.

Технология метаболомики обеспечивает эффективную стратегию одновременного измерения большого количества низкомолекулярных метаболитов в клетках 16,17, тканях18 и даже экссудатах организмов 19, включая сахара, органические кислоты, аминокислоты и липиды. По сравнению с традиционными или классическими методами химического анализа, метаболомный подход значительно увеличивает количество метаболитов, которые могут быть обнаружены20, что может помочь идентифицировать метаболиты с большей пропускной способностью и определить ключевые метаболические пути. Метаболомика широко используется в области исследований биологической реакции в стрессовых средах, таких как тяжелые металлы21, новые загрязнители22 и наночастицы19. Большинство из этих исследований на растениях были сосредоточены на метаболических изменениях во внутренних тканях растений, в то время как лишь немногие из них были зарегистрированы о реакции корневых экссудатов на стресс окружающей среды. Таким образом, целью данного исследования является введение общих рекомендаций по сбору экссудатов корня люцерны для изучения влияния DEHP на продукцию метаболитов. Результаты послужат методическим руководством для последующего изучения метаболомики растений с помощью DEHP.

протокол

Цель этого протокола состоит в том, чтобы обеспечить общий конвейер, от эксперимента по гидропонной культуре до метаболомного анализа, количественно оценивающего влияние DEHP на экссудаты корня люцерны.

1. Эксперимент с гидропонной культурой

ПРИМЕЧАНИЕ: В этом протоколе представлен пример эксперимента по гидропонной культуре люцерны, предназначенного для получения проростков люцерны (Medicago sativa) в условиях стресса различных концентраций DEHP. Были назначены три обработки: контроль без каких-либо добавок и питательный раствор с добавлением 1 мг кг-1 и 10 мг кг-1 ди(DEHP. Концентрации DEHP были установлены в соответствии с реальным содержанием DEHP в почве23. Каждая процедура имела шесть повторений.

  1. Стерилизуют семена люцерны 0,1% гипохлоритом натрия в течение 10 мин и 75% этиловым спиртом в течение 30 мин.
    1. Стерилизованные семена несколько раз промыть дистиллированной водой, а затем прорастить на влажной фильтровальной бумаге в стерильной чашке Петри при 30 °C в темноте.
  2. Перенесите 20 однородных, проросших, больших пухлых семян в корзину для приживления в бутылке для культуры, наполненной питательным раствором, состоящим из (в мкМ): Ca(NO 3)2, 3,500; NH4H2PO4, 1 000; КНО3, 6 000; MgSO4, 2 000; Na2Fe-этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА), 75; Н 3БО3, 46; МнСО4, 9.1; ZnSO4, 0,8; CuSO4, 0,3; и (NH4) 6Mo7O24, 0,02. Отрегулируйте рН раствора до 7,0 с помощью 0,1 М КОН. Обновляйте все решения еженедельно.
  3. Поместите все бутылки с культурой в контролируемую камеру роста с интенсивностью света 150-180 мкмоль м-2 с-1 с фотопериодом 16 ч каждый день при 27 ° C и 20 ° C, представляющих день (16 ч) и ночь (8 ч) соответственно.
  4. Перенесите 15 однородных проростков люцерны в новую стеклянную бутылку для экспериментов с культурой при стрессе 1 мг кг-1 и 10 мг кг-1 DEHP через 2 недели. Оберните стеклянные бутылки алюминиевой фольгой и парапленкой, чтобы предотвратить фотолиз и улетучивание DEHP. Чтобы применить те же условия, также оберните контрольные бутылки алюминиевой фольгой и парапленкой. Ежедневно дополняйте питательный раствор, чтобы поддерживать уровень жидкости.
  5. Случайным образом размещайте и вращайте бутылки каждые 2 дня, чтобы обеспечить стабильные условия роста саженцев люцерны.
  6. Через 7 дней выращивания достаньте саженцы люцерны из бутылок и несколько раз промойте сверхчистой водой, готовясь к сбору корневых экссудатов.

2. Сбор, экстракция и метаболомный анализ корневых экссудатов

ПРИМЕЧАНИЕ: Этот протокол разделен на три части: эксперимент по сбору, эксперимент по экстракции и метаболомный анализ корневых экссудатов. Целью коллекционного эксперимента является перенос метаболитов, выделяемых в образцах растений, в систему растворов для последующей экстракции.

  1. Коллекционный эксперимент
    1. Переложите 10 однородных саженцев люцерны в центрифужные пробирки, заполненные 50 мл стерилизованной деионизированной воды. Погрузите корни в воду для сбора корневых экссудатов на 6 ч; Держите трубки в вертикальном положении. Выполните не менее шести повторений для каждой процедуры.
    2. Оберните пробирки центрифуги алюминиевой фольгой, чтобы защитить корни от света.
    3. Удалите растения и высушите собранную жидкость для профилирования метаболитов.
  2. Экстракционный эксперимент
    1. Добавьте 1,8 мл экстракционного раствора (метанол: H2O = 3: 1, V / V) в пробирки и встряхните в течение 30 с.
    2. Приложите ультразвуковые волны к трубкам на 10 минут на водяной бане.
    3. Центрифугируют образцы при 4 °C и 11 000 × г в течение 15 мин.
    4. Осторожно перелейте 200 мкл надосадочной жидкости в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл. Возьмите 45 мкл надосадочной жидкости из каждого образца и смешайте его с образцами контроля качества (QC) в конечном объеме 270 мкл, который используется для калибровки данных метаболома образцов.
    5. Сублимационная сушка экстрактов в вакуумном концентраторе. Продолжайте сушку с 5 мкл внутреннего стандарта (рибонуклеола).
    6. После выпаривания в вакуумном концентраторе добавляют в пробирки 30 мкл метоксиаминирования гидрохлорида (растворенного в пиридине в концентрации 20 мг мл-1) и инкубируют пробирки при 80 °С в течение 30 мин. Затем добавьте 40 мкл реагента бис(триметилсилил)трифторацетамида (BSTFA) (с 1% триметилхлорсиланом [TMC], V/V) к образцам и поместите пробирки при 70 ° C на 1,5 ч для дериватизации.
    7. Охладите образцы до комнатной температуры и добавьте 5 мкл метиловых эфиров жирных кислот (FAME) (в хлороформе) к образцам QC.
  3. Метаболомный анализ
    1. Вводят 1,0 мкл дериватизированных экстрактов в систему газового хроматографа, соединенную с времяпролетным масс-спектрометром (GC-TOF-MS) для анализа метаболомного профилирования с использованием безраздельного режима.
      1. Используйте капиллярную колонку (30 м x 250 мкм x 0,25 мкм) для разделения корневых экссудатов с гелием в качестве газа-носителя со скоростью потока 1,0 мл мин-1. Установите температуру впрыска на 280 °C и поддерживайте температуру линии переноса и температуру источника ионов на уровне 280 °C и 250 °C соответственно.
      2. Для сепарации используйте следующую программу печи: 1 мин изотермического нагрева при 50 °C, 10 °C / мин-1 разгон печи до 310 °C и окончательный изотермический нагрев при 310 °C в течение 8 мин.
      3. Выполните режим столкновения электронов с энергией -70 эВ. Получение масс-спектров в режиме контроля полного сканирования с диапазоном масс-сканирования 50-500 м/з со скоростью 12,5 спектр/с.
    2. Отфильтруйте отдельные пики, чтобы удалить шум. Значение отклонения фильтруется на основе межквартильного диапазона.
    3. Заполните отсутствующие значения половиной минимальных значений, стандартизируйте и нормализуйте данные.
    4. Импортируйте окончательные данные в формате .csv в программное обеспечение для статистического анализа для многомерного анализа.
    5. Найдите метаболиты в базе данных Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG) (ресурс базы данных для понимания высокоуровневых функций и полезностей биологической системы) и классифицируйте метаболиты по различным категориям, таким как углеводы, кислоты, липиды, спирты и амины. Используйте программное обеспечение для статистического анализа для построения круговой диаграммы, чтобы указать процентное содержание каждой категории во всех корневых экссудатах.
    6. Применение контролируемых ортогональных проекций к анализу латентных структур (OPLS-DA), чтобы продемонстрировать различия между группами.
    7. Скрининг достоверно изменил метаболиты как дифференциальные метаболиты на основе переменной важности в проекции (VIP) > 1 и p < 0,05 (t-критерий Стьюдента).
    8. Используйте данные метаболома для построения тепловых карт с помощью программного обеспечения для статистического анализа и используйте изменения складок при различных методах обработки для построения гистограмм.
    9. Найдите дифференциальные метаболиты в базе данных KEGG и Pubchem и скомпилируйте метаболические пути, содержащие дифференциальные метаболиты. Выполните анализ обогащения путей или анализ топологии.

Результаты

В этом эксперименте экссудаты корня люцерны были собраны, экстрагированы и проанализированы в соответствии с вышеуказанными методами (рис. 1). Были созданы три группы лечения: контрольная, с низкой концентрацией DEHP (1 мг л-1) и с высокой концентрацией DEHP (10 мг л-1...

Обсуждение

Этот протокол содержит общие рекомендации по сбору и измерению корневых экссудатов люцерны при стрессе DEHP, а также по анализу данных метаболома. Пристальное внимание необходимо уделить некоторым критическим шагам в этом протоколе. В экспериментах по гидропонным культурам саженцы люц...

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет известных конкурирующих финансовых интересов или личных отношений, которые могли бы повлиять на работу, представленную в этой статье.

Благодарности

Эта работа была поддержана совместно Национальным фондом естественных наук Китая (41877139), Крупными проектами Национального фонда естественных наук Китая (41991335), Национальной программой ключевых исследований и разработок Китая (2016YFD0800204), Фондом естественных наук провинции Цзянсу (No BK20161616), Планом «135» и Программой границ Китайской академии наук (ISSASIP1615).

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
AdonitolSIGMA≥99%
Alfalfa seedsJiangsu Academy of Agricultural Sciences (Nanjing, China)
Analytical balanceSartoriusBSA124S-CW
BSTFAREGIS Technologieswith 1% TMCS, v/v
CentrifugeThermo Fisher ScientificHeraeus Fresco17
Chromatographic columnAgilentDB-5MS (30 m × 250 μm × 0.25 μm)
Di(2-ethylhexyl) phthalateDr. Ehrenstorfer
FAMEsDr. Ehrenstorfer
Gas chromatography(GC)Agilent7890A
Grinding instrumentShanghai Jingxin Technology Co., LtdJXFSTPRP-24
Mass spectrometer(MS)LECOPEGASUS HT
MethanolCNW TechnologiesHPLC
Methoxyaminatio hydrochlorideTCIAR
Microcentrifuge tubeEppendorfEppendorf Quality1.5 mL
OvenShanghai Yiheng Scientific Instrument Co., LtdDHG-9023A
PyridineAdamasHPLC
R softwarestatistical analysis software (pathway enrichment, topology)
SIMCA16.0.2 statistical analysis software (OPLS-DA etc)
Ultra low temperature freezerThermo Fisher ScientificForma 900 series
UltrasoundShenzhen Fangao Microelectronics Co., LtdYM-080S
Vacuum dryerTaicang Huamei biochemical instrument factoryLNG-T98

Ссылки

  1. Yin, X. H., Zeb, R., Wei, H., Cai, L. Acute exposure of di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) induces immune signal regulation and ferroptosis in oryzias melastigma. Chemosphere. 265, 129053 (2021).
  2. Seyoum, A., Pradhan, A. Effect of phthalates on development, reproduction, fat metabolism and lifespan in Daphnia magna. The Science of the Total Environment. 654, 969-977 (2019).
  3. van T Erve, T. J., et al. Phthalates and phthalate alternatives have diverse associations with oxidative stress and inflammation in pregnant women. Environmental Science & Technology. 53 (6), 3258-3267 (2019).
  4. He, L., et al. Contamination and remediation of phthalic acid esters in agricultural soils in China: a review. Agronomy for Sustainable Development. 35 (2), 519-534 (2015).
  5. Liu, S. S., et al. Di-(2-ethylhexyl) phthalate as a chemical indicator for phthalic acid esters: an investigation into phthalic acid esters in cultivated fields and e-waste dismantling sites. Environmental Toxicology and Chemistry. 38 (5), 1132-1141 (2019).
  6. Li, K. K., Ma, D., Wu, J., Chai, C., Shi, Y. X. Distribution of phthalate esters in agricultural soil with plastic film mulching in Shandong Peninsula, East China. Chemosphere. 164, 314-321 (2016).
  7. Sun, J., Wu, X., Gan, J. Uptake and metabolism of phthalate esters by edible plants. Environmental Science & Technology. 49 (14), 8471-8478 (2015).
  8. Kim, D., Cui, R., Moon, J., Kwak, J. I., An, Y. J. Soil ecotoxicity study of DEHP with respect to multiple soil species. Chemosphere. 216, 387-395 (2019).
  9. Gao, M. L., Qi, Y., Song, W. H., Xu, H. R. Effects of di-n-butyl phthalate and di (2-ethylhexyl) phthalate on the growth, photosynthesis, and chlorophyll fluorescence of wheat seedlings. Chemosphere. 151, 76-83 (2016).
  10. Zhang, Y., et al. Effects of diethylphthalate and di-(2-ethyl)hexylphthalate on the physiology and ultrastructure of cucumber seedlings. Environmental Science and Pollution Research. 21 (2), 1020-1028 (2014).
  11. Gao, M. L., Liu, Y., Dong, Y. M., Song, Z. G. Physiological responses of wheat planted in fluvo-aquic soils to di (2-ethylhexyl) and di-n-butyl phthalates. Environmental Pollution. 244, 774-782 (2019).
  12. Lundberg, D. S., Teixeira, P. J. P. L. Root-exuded coumarin shapes the root microbiome. Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (22), 5629-5631 (2018).
  13. Canarini, A., Kaiser, C., Merchant, A., Richter, A., Wanek, W. Root exudation of primary metabolites: mechanisms and their roles in plant responses to environmental stimuli. Frontiers in Plant Science. 10, 157 (2019).
  14. Chai, Y. N., Schachtman, D. P. Root exudates impact plant performance under abiotic stress. Trends in Plant Science. 27 (1), 80-91 (2022).
  15. Olanrewaju, O. S., Ayangbenro, A. S., Glick, B. R., Babalola, O. O. Plant health: feedback effect of root exudates-rhizobiome interactions. Applied Microbiology and Biotechnology. 103 (3), 1155-1166 (2019).
  16. Chamberlain, C. A., Hatch, M., Garrett, T. J. Metabolomic and lipidomic characterization of Oxalobacter formigenes strains HC1 and OxWR by UHPLC-HRMS. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 411 (19), 4807-4818 (2019).
  17. vander Hooft, J. J. J., Goldstone, R. J., Harris, S., Burgess, K. E. V., Smith, D. G. E. Substantial extracellular metabolic differences found between phylogenetically closely related probiotic and pathogenic strains of Escherichia coli. Frontiers in Microbiology. 10, 252 (2019).
  18. Liu, N., Zhu, L. Metabolomic and transcriptomic investigation of metabolic perturbations in Oryza sativa L. triggered by three pesticides. Environmental Science & Technology. 54 (10), 6115-6124 (2020).
  19. Zhao, L., et al. H-1 NMR and GC-MS based metabolomics reveal defense and detoxification mechanism of cucumber plant under nano-Cu stress. Environmental Science & Technology. 50 (4), 2000-2010 (2016).
  20. Llanes, A., Arbona, V., Gómez-Cadenas, A., Luna, V. Metabolomic profiling of the halophyte Prosopis strombulifera shows sodium salt- specific response. Plant Physiology and Biochemistry. 108, 145-157 (2016).
  21. Zhang, Y., et al. Zinc stress affects ionome and metabolome in tea plants. Plant Physiology and Biochemistry. 111, 318-328 (2017).
  22. Wright, R. J., Bosch, R., Gibson, M. I., Christie-Oleza, J. A. Plasticizer degradation by marine bacterial isolates: a proteogenomic and metabolomic characterization. Environmental Science & Technology. 54 (4), 2244-2256 (2020).
  23. He, L., et al. Contamination and remediation of phthalic acid esters in agricultural soils in China: a review. Agronomy for Sustainable Development. 35 (2), 519-534 (2015).
  24. Koch, K. E. Carbohydrate-modulated gene expression in plants. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology. 47, 509-540 (1996).
  25. Wang, Y. T., et al. Nontargeted metabolomic analysis to unravel the impact of di (2-ethylhexyl) phthalate stress on root exudates of alfalfa (Medicago sativa). The Science of the Total Environment. 646, 212-219 (2019).
  26. Yu, Q., et al. Photolysis of bis(2-ethylhexyl) phthalate in aqueous solutions at the presence of natural water photoreactive constituents under simulated sunlight irradiation. Environmental Science and Pollution Research International. 26 (26), 26797-26806 (2019).
  27. Zhang, S. H., Guo, A. J., Fan, T. T., Zhang, R., Niu, Y. J. Phthalates in residential and agricultural soils from an electronic waste-polluted region in South China: distribution, compositional profile and sources. Environmental Science and Pollution Research. 26 (12), 12227-12236 (2019).
  28. Liu, S. S., et al. Di-(2-ethylhexyl) phthalate as a chemical indicator for phthalic acid esters: An investigation into phthalic acid esters in cultivated fields and e-waste dismantling sites. Environmental Toxicology and Chemistry. 38 (5), 1132-1141 (2019).
  29. Fan, T. W., Lane, A. N., Pedler, J., Crowley, D., Higashi, R. M. Comprehensive analysis of organic ligands in whole root exudates using nuclear magnetic resonance and gas chromatography-mass spectrometry. Analytical Biochemistry. 251 (1), 57-68 (1997).
  30. Bobille, H., et al. Evolution of the amino acid fingerprint in the unsterilized rhizosphere of a legume in relation to plant maturity. Soil Biology and Biochemistry. 101, 226-236 (2016).
  31. Zhang, Z., et al. Effects of two root-secreted phenolic compounds from a subalpine coniferous species on soil enzyme activity and microbial biomass. Chemistry and Ecology. 31 (7), 636-649 (2015).
  32. Yuan, J., et al. Organic acids from root exudates of banana help root colonization of PGPR strain Bacillus amyloliquefaciens NJN-6. Scientific Reports. 5, 13438 (2015).
  33. van Dam, N. M., Bouwmeester, H. J. Metabolomics in the rhizosphere: tapping into belowground chemical communication. Trends in Plant Science. 21 (3), 256-265 (2016).
  34. Shen, X., Yang, F., Xiao, C., Zhou, Y. Increased contribution of root exudates to soil carbon input during grassland degradation. Soil Biology & Biochemistry. 146, 107817 (2020).
  35. Oburger, E., Jones, D. L. Sampling root exudates-mission impossible. Rhizosphere. 6, 116-133 (2018).
  36. Zhang, L. Effects of root exudates of wheat stressed by Cd on the germination of crop seeds. International Symposium on Water Resources and the Urban Environment. , 319-321 (2003).
  37. Shinano, T., et al. Metabolomic analysis of night-released soybean root exudates under high- and low-K conditions. Plant and Soil. 456, 259-276 (2020).
  38. Adeleke, R., Nwangburuka, C., Oboirien, B. Origins, roles and fate of organic acids in soils: A review. South African Journal of Botany. 108, 393-406 (2017).
  39. Rico, C. M., et al. Cerium oxide nanoparticles modify the antioxidative stress enzyme activities and macromolecule composition in rice seedlings. Environmental Science & Technology. 47 (24), 14110-14118 (2013).
  40. Mortimer, M., Kasemets, K., Vodovnik, M., Marinsek-Logar, R., Kahru, A. Exposure to CuO nanoparticles changes the fatty acid composition of protozoa Tetrahymena thermophila. Environmental Science & Technology. 45 (15), 6617-6624 (2011).
  41. Liao, Q. H., et al. Root exudates enhance the PAH degradation and degrading gene abundance in soils. Science of the Total Environment. 764, 144436 (2021).
  42. Ding, Y., et al. Adaptive defence and sensing responses of host plant roots to fungal pathogen attack revealed by transcriptome and metabolome analyses. Plant, Cell & Environment. 44 (12), 3526-3544 (2021).
  43. Rugova, A., Puschenreiter, M., Koellensperger, G., Hann, S. Elucidating rhizosphere processes by mass spectrometry-A review. Analytica Chimica Acta. 956, 1-13 (2017).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

196

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены