Выбор и No-Выбор анализы для тестирования сопротивления thaliana А. к Жевательная Насекомые

Резюме

Устойчивость растений к насекомым жевательной травоядных может быть проверена в нескольких направлениях. Здесь мы показали, как настройка выбора и нет выбора, экспериментировать с Arabidopsis thaliana модельное растение для определения сопротивления против вредителей Pieris rapae.

Аннотация

Личинки маленькие белые бабочки капусты вредителями сельскохозяйственных установок. Этот вид гусеница питается от растений семейства капустных, которые включают в себя многие культуры, такие как капуста, брокколи, брюссельская капуста и т.д. Разведение насекомых происходит на капусту растений в теплице. По крайней мере, две клетки, необходимые для выращивания Pieris rapae. Один для личинок и другие содержат взрослых бабочек. Для того чтобы исследовать роль растительных гормонов и токсичных химических веществ завода в сопротивление этой насекомых вредителей, мы демонстрируем два эксперимента. Во-первых, определение роли жасмоновой кислота (JA - растительный гормон, часто указанные в устойчивости к насекомым) по устойчивости к насекомым жевательной Pieris rapae. Caterpillar роста можно сравнить с дикого типа и мутантных растений нарушения в производстве JA. Этот эксперимент считается "Нет выбора", так как личинки вынуждены существовать на одном заводе которая синтезирует или испытывает дефицит в JA. Во-вторых, мы показываем, эксперимент, который исследует роль глюкозинолатов, которые используются в качестве откладки яиц (яйцекладки) сигналы. Здесь мы используем WT и мутантов Arabidopsis нарушениями в glucosinolate производства в "Выбор" эксперимент, в котором женщина бабочек имеют право выбирать, чтобы отложить яйца на растения либо генотипа. Это видео демонстрирует экспериментальную установку для обоих анализов, а также представитель результаты.

протокол

Нет выбора Эксперимент:

1. Аккуратно приложите Arabidopsis завод заинтересованность в пластиковый стаканчик. В этом случае: Col-0 (WT) и мутант нарушения в производстве JA. Убедитесь, что вы ограничиваете повреждения листьев. Для этого я использую в конце этой кисти.
   
2. Использование тонкой кистью взять только что вылупившихся личинок из колонии на капусту.
   
3. Аккуратно положите личинку на Arabidopsis растений.
   
4. Вес личинки на 4 сутки, 7, 10. СОВЕТ: Развивайте свой растений в условиях короткого дня (8 часов света) для повышения вегетативного роста (1 личинка может выполнять свои полного жизненного цикла на 1 растение).

Выбор Эксперимент:

1. Два завода будут выбраны, по одному каждого генотипа. Лучше всего выращивать растения в том же банке, ограничить другие факторы, такие как поднос эффекты и т.д.
   
2. Место растений в бабочку клетке.
   
3. Выберите плодородной женщины. Я обычно поймать женщин, активно откладывают яйца в воспитании колонии.
   
4. Выпуск женского пола в клетке с выбором из двух растений в течение 24 часов.
   

Совет 1: Для устранения влияют обучения, не повторное использование женщин для последующих тестов выбор.

СОВЕТ 2: Можно только сравнивать растения, которые имеют аналогичные фенотип роста. Кроме того, можно монтировать лист от каждого генотипа на вершине колбу и сравнить их привлекательность для женщин.

Пожалуйста, посетите ежегодные обзоры биологии растений для получения дополнительной информации об этом протокол и иммунитета растений к насекомым herbivory.