Mitochondrial Depletion by Rhodamine 6G for Transmitochondrial Cybrid Generation

Чтобы выполнить митохондриальное истощение линии митохондриальных клеток-реципиентов, засейте 1 миллион клеток в шестилуночную пластину, используя полную питательную среду, содержащую 10% FBS и пенициллин-стрептомицин. Ежедневно обрабатывайте клетки оптимальной концентрацией родамина 6G в течение трех-семи дней, в зависимости от типа клеточной линии. Чтобы сохранить клетки живыми, дополните питательную среду 50 микрограммами на миллилитр уридина и 100 микрограммами на миллилитр пирувата.

После лечения и до слияния с митохондриями, выделенными из донорской клеточной линии, удалите среду клеток, обработанных родамином 6G, и добавьте полную среду для культивирования клеток без родамина 6G. Инкубируйте клетки при температуре 37 градусов Цельсия с 5% углекислого газа в течение трех-четырех часов. Наконец, чтобы подготовить предварительно обработанные клетки родамина 6G к слиянию, соберите их в 15-миллилитровую пробирку и центрифугируйте пробирку при комнатной температуре и 520G в течение пяти минут.

Обратите внимание, что гранулы приобретают неоново-розовый цвет из-за обработки Rhodamine 6G.