Разместите маркированные отстойники TSA и SAB рядом с рабочей зоной, но в зоне, которая не будет мешать тестированию. Задокументируйте время начала отбора проб. В асептическом порядке откройте обе пластины, положив крышки на чистую поверхность в шкафу биологической безопасности вдали от рабочей зоны на срок до четырех часов, чтобы предотвратить высыхание агара.
По окончании обработки закройте крышки пластин и задокументируйте время остановки отбора проб. Неплотно уложите тарелки в пакеты и инкубируйте культуры. Для отбора проб кончиками пальцев в перчатках приобретите две тарелки с маркировкой TSALT.
Асептически снимите крышку пластин и поместите ее на чистую рабочую поверхность вдали от зоны отбора проб. Аккуратно проведите подушечкой каждого пальца и большим пальцем по поверхности тарелки. Приложите достаточную силу, чтобы сделать небольшие углубления на агаре, не растрескивая поверхность агара.
Асептически положите крышку обратно на тарелку. После дезинфекции рук по завершении отбора проб неплотно упакуйте тарелки в пакеты и инкубируйте культуры. Для прямой инокуляции, следуя методу Фармакопеи США, поместите отстойники TSA и SAB в шкаф биобезопасности.
После подготовки шкафа и размещения материалов задокументируйте время начала отбора проб. Получите испытуемый артикул и связанные с ним бутылки с триптическим соевым бульоном и жидким тиогликолятом. Если у флаконов есть перегородка, снимите защитные колпачки с каждого флакона и протрите перегородку стерильной спиртовой салфеткой.
Встряхните испытуемое изделие, чтобы обеспечить однородную суспензию, и привите флаконы с утвержденным объемом испытуемого изделия с помощью стерильного шприца и иглы для подкожных инъекций. Протрите перегородку стерильной спиртовой салфеткой и вставьте стерильный вентиляционный блок, чтобы обеспечить воздухообмен во время инкубации. Повторите эти действия для каждой тестовой статьи этого сеанса.
Асептически закройте отстойники TSA и SAB и задокументируйте время окончания отбора проб перед отбором проб кончиками пальцев в перчатках. Протрите перчатки 70%-ным стерильным изопропиловым спиртом, неплотно упакуйте тарелки и инкубируйте культуры. Перенесите все исследуемые материалы из шкафа биологической безопасности.
Точно так же для прямой инокуляции, следуя альтернативному методу тестирования на стерильность NIH, поместите отстойники TSA и SAB в шкаф биобезопасности и задокументируйте время начала отбора проб. Получите тестовое изделие и связанную с ним маркировку IFA Plus, маркировку IFN Plus и табличку SAB. Снимите защитные колпачки с флаконов IFA Plus и IFN Plus и протрите перегородку стерильной спиртовой салфеткой.
После встряхивания испытуемого изделия привите флаконы утвержденным объемом исследуемого изделия с помощью стерильного шприца и иглы для подкожных инъекций и снова протрите перегородку. Инкубируйте бутылки на приборе BACT/ALERT Dual T. С помощью пипетки привите пластину SAB проверенным количеством испытуемого изделия и проведите полосу для изоляции с помощью стерильной петли.
Дайте постоять 10 минут, чтобы убедиться, что образец не попадет на крышку пластины при переворачивании для инкубации. Поместите каждую пластину SAB, инокулированную испытуемым изделием, в полиэтиленовый пакет. Свяжите их свободно. Асептически закройте отстойники TSA и SAB.
Задокументируйте время окончания отбора проб на пластинах и выполните отбор проб кончиками пальцев в перчатках. После отбора проб протрите перчатки 70%-ным спиртом. Неплотно упакуйте тарелки, предварительно протерев перчатки спиртом, и проведите инкубацию культур.
Здесь показана пластина для отстаивания воздуха TSA, иллюстрирующая одну колонию загрязняющего вещества, культивируемого во время пассивного мониторинга процесса воздуха в шкафу биологической безопасности. На этом рисунке показана поверхностная пробоотборная пластина TSALT с тремя колониеобразующими единицами двух различных морфологий колоний. Поверхностная культура TSALT с одной колонией на краю пластины указывает на плохую асептическую обработку в процессе отбора проб.
На этом изображении показан правильный метод получения образцов кончиков пальцев в перчатках с использованием наибольшей площади поверхности каждого пальца или большого пальца. Здесь показан неправильный процесс, при котором отбирается только кончик пальца. Здесь показан пример шаров плесени, видимых невооруженным глазом, которые не были автоматически обнаружены системой BACT/ALERT.
Основываясь на этих выводах, рекомендуется окончательный визуальный осмотр всех бутылок BACT / ALERT и добавление пластины SAB для культивирования грибов с использованием альтернативного метода тестирования стерильности NIH.
