Immunofluorescent Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

Начните с промывки стволовых клеток, полученных из мышиной жировой ткани, в шестилуночном планшете с двумя миллилитрами буфера для промывки. Добавьте один миллилитр блокирующего реагента после инкубации и трижды промывайте клетки. Инкубируйте клетки при медленном перемешивании в течение 20 минут.

Добавьте 200 микролитров первичных антител в каждую лунку и инкубируйте в течение ночи при четырех градусах Цельсия. После трижды промыть пластины, как показано ранее, инкубировать с 200 микролитрами вторичных антител. Покрасьте ядра клеток 100 микролитрами DRAQ7 в течение 20 минут после трижды промыть тарелки.

Повторите промывку и установите направляющие. Визуализируйте установленные предметные стекла под эпифлуоресцентной конфокальной микроскопией. Стволовые клетки, полученные из жировой ткани, были на 100% положительными на поверхностные маркеры CD9 во всех протестированных подпроходах.

Все клетки экспрессировали маркеры CD63 в подпроходах один, три и девять, в то время как 49,3% клеток экспрессировали его в седьмом проходе. Маркеры CD34 отсутствовали в первом, седьмом и девятом проходах, но были видны в третьем проходе.