Flow Cytometric Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

Начните с регулировки концентрации размороженной суспензии стволовых клеток, полученной из мышиной жировой ткани, с использованием PBS с 5% эмбриональной бычьей сывороткой. Аликвотируйте 100 микролитров суспензии, содержащей 100 000 клеток, в центрифужную пробирку объемом 1,5 миллилитра. Добавьте соответствующее количество анти-CD105 AF594 и анти-CD31 AF680 в соответствии с инструкциями производителя.

Инкубировать 20 минут в темноте при четырех градусах Цельсия. Удалите излишки пятна, промыв PBS/FBS и центрифугой при 250 x g в течение пяти минут. Ресуспендируют клетки в 300 микролитрах 1%-ного формалина.

Создайте точечный график, щелкнув символ многоугольника, чтобы выбрать интересующую субпопуляцию и исключить области мусора с помощью стробирования FSC-A и SSC-A. Затем нажмите на символ полигона, чтобы создать новую точечную диаграмму и исключить дуплексы и множественные ячейки, используя SSC-H против SSC-A, за которыми следуют FSC-H и FSC-A. Используйте Y610-mCHERRY для детекторов AF594 и R660 APC-A для флуорофоров AF680 соответственно.

Нажмите на символ квадранта и установите порог каждого детектора для автофлуоресцентных клеток. Выберите образцы, помеченные CD105, и положительную популяцию, которые будут показаны на Q1LR. Затем выберите образцы, помеченные CD31, и положительную популяцию, которые будут показаны на Q1LR.

Иммунофенотипирование показало, что 98,7% клеточной популяции были положительными на CD105, в то время как только 5,88% экспрессировали маркер CD31.