Начните с использования техники разбрасывания хирургическими ножницами, чтобы осторожно обнажить дыхательные пути заготовленного легкого свиньи. Во-первых, найдите самые большие дыхательные пути, которые обычно имеют диаметр от двух до четырех сантиметров. Затем используйте пару щипцов, чтобы пальпировать по всей длине дыхательных путей на глубину одного дюйма.
Наконец, держите хирургические ножницы параллельно дыхательным путям и вставьте закрытые кончики в ткань, окружающую невидимые дыхательные пути. Осторожно откройте хирургические ножницы, чтобы раздвинуть окружающую мембрану. Выньте ножницы и воздержитесь от разрезания ткани.
Повторяйте этот процесс с перерывами, чтобы продолжать обнажать дыхательные пути. С помощью хирургических ножниц разрежьте дыхательные пути в точках разветвления и рассеките вдоль каждой ветви независимо друг от друга. Разорвите области дыхательных путей, убедившись, что неповрежденные концы останутся идентифицируемыми и легко обнаруживаемыми.
Поместите разорванные области дыхательных путей в соответствующую трубку, при этом размер отделенных областей варьируется от одного до пяти сантиметров в длину, а ширина варьируется в зависимости от относительного расположения вдоль дерева дыхательных путей. Осторожно надавите на сосудистую сеть, чтобы обнажить ее, и медленно оттяните ее от дыхательных путей. Дайте сосудистой сети немного растянуться и используйте хирургические ножницы, чтобы еще больше отделить ее от дыхательных путей.
Избегайте слишком сильного давления, так как это может разорвать сосудистую сеть. После того, как точка ветвления в сосудистом дереве будет открыта, вставьте закрытые кончики хирургических ножниц чуть ниже точки ветвления и между двумя соответствующими областями сосудистой сети. Затем медленно раскройте ножницы, чтобы раздвинуть подлежащие ткани.
Периодически используйте пинцет, чтобы удалить раздвинутую ткань и любую другую ткань, непосредственно окружающую сосудистую сеть. Перережьте сосудистую сеть в точке разветвления, когда она покрывает области дыхательных путей или становится громоздкой для любого этапа рассечения. Затем рассекайте по любой ветви независимо друг от друга.
Убедитесь, что два конца сосудистой сети остаются идентифицируемыми и легко обнаруживаются для дальнейшего рассечения. Затем разорвите области сосудистой сети. Чтобы иссечь альвеолярную ткань, найдите область ткани, которая не находится в непосредственной близости от дыхательных путей или сосудистой сети.
Ущипните небольшую область ткани, которая, по-видимому, лишена сосудистой сети или дыхательных путей, и вырвите защемленную ткань из легкого. Альвеолярная ткань широко присутствует в легких и должна быть удалена на протяжении всего рассечения. Понаблюдайте за областью удаленной ткани и подтвердите, является ли она альвеолярной тканью.
Эта процедура была применена к модели легких человека. Масс-спектрометрический анализ иссеченных тканей показал, что состав ECM варьируется между отдельными областями децеллюляризированных легких, включая ECM всего легкого, ECM с альвеолярным обогащением, ECM дыхательных путей и ECM сосудистой сети. В децеллюляризированных легких, полученных от пациентов без заболеваний легких в анамнезе, белки, связанные с базальной мембраной, увеличивались в альвеолярном обогащенном ECM.
В то же время ECM дыхательных путей был обогащен хрящевым белком ECM, таким как аггрекан. ECM сосудистой сети был усилен фибронектином и другими растворимыми белками ECM, связанными с кровеносными сосудами.
