Outgrowth of Dermal Fibroblasts from a Skin Punch Biopsy

Для начала возьмите трубку для биопсии кожи со средой фибробластов. Удалите средство и трижды промойте биопсию кожи пятью миллилитрами стерильного, предварительно подогретого PBS. С помощью стерильных щипцов перенесите биопсию пунша кожи на 10-сантиметровую пластину для культивирования клеток, а стерильным скальпелем разрежьте ее по ширине на три-четыре части, оставив эпидермис и дерму.

Переложите каждый кусочек в стерильную 35-миллиметровую пластиковую чашку для культивирования клеток и аккуратно вдавите его в культуральную чашку. Дайте ему высохнуть в течение пяти-10 минут, пока жидкость не испарится и биопсия не будет прикреплена к пластику клеточной культуры. Используя пипетку объемом 1 000 микролитров, добавьте один миллилитр среды фибробластов по каплям вокруг биопсии до конечного объема в три миллилитра.

Инкубируйте образец в течение семи дней при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа, не подавая и не перемещая блюдо. По окончании инкубации смените среду на свежую, предварительно подогретую среду фибробластов. Наконец, используйте фазово-контрастный микроскоп для мониторинга переросших веретенообразных фибробластов вокруг биопсии кожи и замораживания выбранных клеток после их выращивания.