Labeling Amine-Functionalized Polystyrene Beads with TCPP

Для начала добавьте свежеприготовленные 4,5 миллилитра рабочего раствора EDC в 15-миллилитровую полипропиленовую трубку, содержащую аминофункционализированные полистирольные шарики и TCPP в буфере MES. Поместите трубку в инвертирующий ротатор со скоростью 35 об/мин на 16 часов при комнатной температуре в защищенном от света месте. Затем центрифугируйте его в течение 10 минут.

Аспирируйте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте шарики в 0,8 миллилитра сбалансированного солевого раствора Хэнка. Затем с помощью пипетки объемом один миллилитр перелейте раствор шариков во флакон из янтарного полипропилена и храните его при температуре четыре градуса Цельсия. Взаимосвязь между образованием твердых частиц, медианой, интенсивностью флуоресценции или MFI и соотношением шариков TCPP/EDC показала, что с увеличением коэффициентов MFI увеличивался до тех пор, пока не образовал плато.

Твердые частицы появились только тогда, когда EDC использовался в качестве связующего реагента во время процедуры маркировки. Маркировка шариков только TCPP привела к гораздо более низкой интенсивности флуоресценции. Когда шарики с меткой TCPP были протестированы через 300 дней, не наблюдалось существенных изменений в MFI или содержании твердых частиц.

Связь TCPP с шариками оказывала минимальное влияние на спектр излучения флуоресценции. Однако его спектр больше отличался от помеченных TCPP клеток рака легких A549. В образце мокроты с четырьмя метками из мультифлоры шарики, меченные TCPP, работали так же хорошо, как и окрашенные TCPP клетки A549.