Начните фильтрацию шариков TCPP с разбавления 0,8 миллилитра суспензии шариков TCPP 3,20 миллилитрами ледяного сбалансированного солевого раствора Хэнкса или HBSS. Встряхните разбавленную суспензию шариков на максимальной скорости в течение 15 секунд. Затем снимите поршень с одноразового пятимиллилитрового шприца и установите на шприц пятимикрометровый фильтр из стекловолокна диаметром 13 миллиметров.
Затем добавьте четыре миллилитра HBSS в шприц, прежде чем добавить 0,5 миллилитра вихревой разбавленной суспензии шариков. Используя поршень, отфильтруйте суспензию шариков через шприцевой фильтр со скоростью примерно две капли в секунду. Затем вымойте шарики, набрав пять миллилитров свежего HBSS в шприц через фильтр и вытолкнув HBSS в контейнер для отходов со скоростью примерно две капли в секунду.
Чтобы удалить шарики из фильтра, наберите еще пять миллилитров свежего HBSS в шприц через фильтр. Затем осторожно извлеките фильтр из шприца. После выталкивания шариковой суспензии из шприца в 50-миллилитровую коническую центрифужную пробирку поместите свежий фильтр обратно на шприц и повторите пятимиллилитровую промывку HBSS четыре раза.
После этого выбросьте фильтр и шприц. Центрифугируют отфильтрованные шарики суспензии при комнатной температуре в течение 10 минут по 1 000 г. Аспирируйте надосадочную жидкость из каждой 50-миллилитровой пробирки.
Аккуратно ресуспендируйте бусины и 0,5 миллилитра свежего HBSS. Переложите комбинированные шарики с помощью микропипетки P1000 в новый стеклянный флакон янтарного цвета и храните при четырех градусах Цельсия. Здесь показан эффект фильтрации на шариковой суспензии, содержащей примерно 66% твердых частиц.
После фильтрации содержание твердых частиц снизилось примерно до 25%Неблагоприятными последствиями фильтрации являются потеря шариков и небольшая потеря интенсивности флуоресценции.
