Nuclei Isolation from Cardiac Progenitor Cells

Для начала очистите рабочее место и материалы 70%-ным раствором для удаления этанола и РНКазы. Свежеприготовленный буфер для лизиса, буфер для разбавления лизиса, буфер для разбавления при лизисе 0,1 x и буфер для промывки и выдерживайте буферы на льду. Предварительно охладите качающиеся ковшовые центрифуги до четырех градусов Цельсия.

Центрифугируйте суспензию клеток-предшественников сердца в качающемся ведре центрифуги. Аккуратно удалите всю надосадочную жидкость, не касаясь дна трубки. Добавьте 100 микролитров охлажденного буфера для лизиса 0,1 x в клеточную суспензию и перемешайте пипеткой 10 раз.

После пяти минут инкубации на льду добавьте один миллилитр охлажденного буфера для промывки и перемешайте. После центрифугирования суспензии удалите надосадочную жидкость и повторите еще две промывки охлажденным буфером для стирки. Приготовьте буфер для разбавленных ядер.

После ресуспендирования ядер в буфере ядер поместите раствор запаса ядер на лед. Когда качество изолированных ядер оценивалось путем оценки морфологии ядерной мембраны, изолированные ядра казались гладкими и равномерно круглыми под микроскопией светлого поля, что указывает на эффективный процесс выделения.