Начните с измельчения 10 миллиграммов лиофилизированной Mycobacterium paratuberculosis до мелкого порошка с помощью ступки и пестика. Добавьте пять миллилитров неполного адъюванта Фройнда, чтобы получить 10 миллиграмм на миллилитр исходного раствора. Храните бульон при температуре минус четыре градуса по Цельсию.
Перед иммунизацией разбавьте исходный раствор. Затем разбавьте пептид MOG 35-55 до двух миллиграммов на миллилитр и храните его при температуре минус 20 градусов по Цельсию. Смешайте равные объемы MOG 35-55 с адъювантом в пятимиллилитровой пробирке с гомогенизатором до образования густой эмульсии.
После каждых 10 секунд смешивания помещайте раствор на лед на 20 секунд и вращайте трубку, чтобы восстановить весь раствор. Перелейте эмульсию в шприц объемом один миллилитр, убедившись, что в нем нет пузырьков воздуха. Затем установите на него иглу 27-го калибра.
Подкожно введите 200 микролитров эмульсии в нижнюю часть спины анестезированной мыши. Затем внутрибрюшинно вводят дозу коклюшного токсина на нулевой день и на второй день после иммунизации. У всех мышей проявлялось острое монофазное заболевание, характеризующееся единичным пиком инвалидности, наблюдаемым через 14-17 дней, с последующим частичным восстановлением симптомов в течение следующих 10 дней.
Мыши, иммунизированные M.paratuberculosis, показали более раннее начало после иммунизации и большую тяжесть в острой фазе. Обе группы продемонстрировали одинаковую массу тела. Анализ пролиферации с титрованным включением тимидина, проведенный на клетках селезенки мышей EAE, показал сильный пролиферативный ответ на пептид MOG 35-55, но не на овальбумин.
Цитофлуорометрический анализ показал увеличение Т-лимфоцитов, дендритных клеток и моноцитов в селезенке мышей EAE, иммунизированных M.paratuberculosis, по сравнению с мышами, иммунизированными CFA. Анализ тканей гематоксилина и эозина выявил типичную параваскулярную и менингеальную мононуклеарную воспалительную инфильтрацию в головном и спинном мозге.
