Mycobacterial Antigen Preparation

Начните с выращивания штамма Mycobacterium paratuberculosis K-10 в колбах Т25, содержащих обогащенную среду, в течение двух недель при температуре 37 градусов Цельсия. Регулярно оценивайте рост колонии с помощью визуального осмотра. Выращивайте 200 миллилитров обогатительной культуры в 500-миллилитровой колбе Эрленмейера в встряхивающем инкубаторе в течение одной недели.

Поместите бактериальные суспензии при температуре 70 градусов Цельсия на пять-10 минут, чтобы инактивировать их, и центрифугируйте их при 3000 г в течение 10 минут. Дважды промойте гранулы в 20 миллилитрах PBS и центрифугируйте суспензию. Переложите гранулу в стерильный контейнер и заморозьте ее жидким азотом.

Немедленно перенесите замороженную гранулу в камеру лиофилизатора. После лиофилизации перенесите его на биоочистительную скамью. С помощью шпателя из нержавеющей стали вытесните высушенные комки MAP, прилипшие к внутренним стенкам контейнера, и измельчите их в мелкий порошок.

Взвесьте измельченные клетки и вручную поместите их в асептический флакон объемом 10 миллилитров.