Валидация препарата in vitro для анализа функции ионных каналов в раковых клетках

Для начала поместите клетки в 75 микролитров на лунку среды, не содержащей антибиотиков, без буфера HEPES, чтобы определить IC50. На вторые сутки готовят контрольный раствор и тестовые растворы путем последовательного разведения высококонцентрированных исходных растворов. После добавления контрольных и тестовых растворов в клетки инкубируйте клетки при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа во влажной среде в течение 48 часов.

Начните анализ пролиферации клеток с предварительного вортексирования реагента MTS для полного растворения любого осажденного реагента перед использованием на третий день эксперимента. Перенесите размороженные реагенты MTS в стерильный резервуар для реагентов объемом 25 миллилитров. Пипеткой внесите по 20 микролитров реагента МТС в каждую лунку 96-луночного планшета, содержащего образцы и 100 микролитров питательной среды. Инкубируйте планшет при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа во влажной среде в течение одного-четырех часов.

Затем центрифугируйте планшет при комнатной температуре, чтобы удалить любые пузырьки, которые могут помешать показаниям абсорбции. Измерьте поглощение на 490 нанометрах с помощью микропланшетного ридера или спектрофотометра. Представлен 96-луночный планшет, показывающий калориметрические результаты МТС-анализа с увеличением концентраций препарата.

Кривая реакции на дозу показала, что испытуемый агент ухудшает жизнеспособность раковых клеток дозозависимым образом.