Создание монокультуры 3D стромы

Для начала возьмите пробирку с hBM-MSC и гранулируйте их центрифугированием. Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу в соответствующем объеме базальной среды. Затем приготовьте конические центрифужные пробирки объемом 50 миллилитров, содержащие необходимый объем базальной среды с добавлением соответствующих факторов роста.

Наконец, добавьте hBM-MSCs из исходного раствора в разведении от одного до 66,67 для достижения концентрации 1,5 умножить на 10 к пятым клеткам на миллилитр. Снимите полипропиленовую клеевую пленку, закрывающую 96-луночную гидрогелевую пластину, чтобы засеять пластину. Осторожно отсадите буфер для хранения, покрывающий гидрогели, расположив наконечник аспиратора у стенки лунки и медленно двигаясь к краю внутренней лунки.

Во время посева периодически перемешивайте клеточную суспензию, чтобы смесь оставалась однородной, и добавляйте по 200 микролитров клеточной суспензии в каждую лунку пластины. Затем поддерживайте в культурах температуру 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа в увлажненной атмосфере. В качестве альтернативы используйте автоматическую промывку пластин с аспирационными форсунками, установленными на расстоянии не менее 3,8 миллиметра от держателя пластин и ближе к краю лунки, и аспирируйте буфер для хранения.

Засейте планшет, смешав клетки с помощью серологической пипетки и распределив равное количество клеток в лунку планшета. Наблюдайте за развитием культур с помощью светлопольной микроскопии с пятикратным объективом и получайте эталонные изображения примерно через 30 минут после посева, чтобы оценить количество добавленных клеток.