Начните с того, что поместите мышь под наркозом на держатель для животного и закрепите ее двумя Velcro ремнями. Включите компьютер и откройте программу для активации лазера. Отрегулируйте держатель животного так, чтобы лазер находился по центру глаза мыши.
Визуализируйте заднюю часть тела с помощью предварительного просмотра на лице, поля зрения поверхностного сосудистого сплетения, сканирования B и поперечного сечения сетчатки в поле зрения. Получите оптическую когерентную томографию в видимом свете, или визи-ОКТ-объем, после внесения незначительных корректировок оптического фокуса. Выровняйте оптический нерв в каждом из четырех углов поля зрения, чтобы охватить разные области сетчатки.
Используйте пороговый метод, основанный на интенсивности, для обнаружения поверхности сетчатки и генерируйте граммы вис-ОКТ-волокон из объема. Обрезайте слой нервных волокон сетчатки, или RNFL, выбрав первую глубину 16 микрометров. Затем рассчитайте проекцию средней интенсивности вдоль осевого направления, чтобы получить изображение волокна, состоящее из пучков аксонов ганглиозных клеток сетчатки и окружающих сосудистой системы.
Выровняйте кровеносные сосуды с помощью графического редактора, чтобы смонтировать четыре изображения после обработки. Составной рисунок волокна вис-ОКТ сравнивают с соответствующим конфокальным изображением плоской сетчатки, иммуноокрашенной TUJ1 для аксонов RGC. Кровеносные сосуды демонстрируют различимые ветвящиеся структуры, которые могут быть сопоставлены с кровеносными сосудами, меченными ICAM II, на конфокальном изображении.
Параллельное сравнение конфокальной микроскопии ex vivo и in vivo с ОКТ выявило идентичные сети пучков экзонов RGC и окружающие сосуды сетчатки.
