Высвобождение мышиных нервных стволовых клеток с помощью стереотаксической интрацеребровентрикулярной инъекции Release Cocktail

Начните с введения 0,3 миллиграмма на миллилитр бупренорфина подкожно крысе, находящейся под наркозом. Установите крысу на стереотаксическую раму. Далее с помощью бритвы сбривают шерсть с головы.

Дезинфицируйте кожу тремя чередующимися циклами 10%-ного повидон-йода и спирта, используя стерильные ватные палочки, втирая в разные стороны в течение трех-пяти секунд каждый раз. Наносите мазь для глаз, чтобы предотвратить сухость. Теперь сделайте двухсантиметровый надрез по средней линии головы стерильным скальпелем, затем тщательно очистите череп стерильными тампонами и физиологическим раствором.

Определите брегму с помощью иглы шприца Hamilton объемом 10 микролитров, установленной на стереотаксическом устройстве, и установите ее в 00. Переместите прибор по передним, задним и боковым координатам. Создайте отверстие в один миллиметр с помощью стоматологической бормашины.

Загрузите четыре микролитра выпускающего коктейля в шприц Hamilton объемом 10 микролитров, затем осторожно опустите иглу тупым или коническим краем, чтобы войти в контакт с твердой мозговой оболочкой. Введите иглу на нужную глубину 3,5 миллиметра. Влейте два микролитра разделительного коктейля со скоростью один микролитр в минуту.

Оставьте иглу на месте еще на две минуты, затем медленно извлеките ее, чтобы предотвратить всплытие разделительного коктейля. Зашить разрез нейлоном 5/0 и обработать зашитый участок антисептиком. Затем переведите животное в зону послеоперационного мониторинга.

Введение более трех микролитров релизного коктейля приводило к неспецифическим механическим повреждениям. Введение двух микролитров коктейля приводило к появлению двухкортиновых иммунопозитивных кластеров, которые были видны даже через восемь месяцев. При иммуноокрашивании головного мозга выявлены участки денудации на эпендимальном слое, близкие только к уровню инъекций.

Постепенное уменьшение возмущений эпендимального слоя наблюдалось в более задних и более передних отделах субэпендимальной зоны.