Двухфотонная визуализация переднего мозга рыбки данио

Включите лазер и подождите 30 минут, чтобы мощность стабилизировалась. Установите длину волны на 920 нанометров и мощность примерно на 50 милливатт на образце. Поместите записывающую камеру с привязанной головой данио-рерио на экспериментальную платформу.

Расположите линзу объектива близко к поверхности переднего мозга. Для записи поведения включите инфракрасные фонари с яркостью 810 нанометров с обеих сторон аквариума. Выберите источник входного сигнала для отображения VR и начните запись данных.

Затем откройте лазерный затвор и включите фотоумножитель. Постепенно поднимайте линзу объектива, пока не обнажится дорсальная часть переднего мозга. Используйте пьезоактуатор для получения изображений на разной глубине, чтобы увеличить количество регистрируемых нейронов.

Двухфотонная визуализация кальция регистрирует индивидуальную активность нейронов в дорсальном отделе переднего мозга на глубине до 200 микрон через неповрежденные черепа. Диапазон визуализации включает палеозоны, Dm, cDc, rDc и часть Dl, охватывающую 30% переднего мозга взрослой рыбки данио. Одновременная запись поведения, выполняемая во время визуализации мозга, позволяет идентифицировать нейронные корреляты моторных выходов.

Во время визуализации движения хвоста не должны вызывать видимых артефактов движения.