Начните с приготовления разбавления в соотношении от 1 до 20 черных индийских чернил и буфера глицериновой системы, затем центрифугируйте в течение 10 минут при 15 000 г при комнатной температуре. Добавьте 40 микролитров раствора чернил и буфер глицериновой системы в первую секцию 384-луночной пластины. Теперь добавьте 25 микролитров буфера глицериновой системы на все разведенные две лунки и 40 микролитров на все разведенные две, три и четыре лунки.
Добавьте 25 микролитров экстрагированного образца гликана в одну лунку, чтобы разбавить образцы в соотношении один к одному. Последовательно разбавьте каждый образец четыре раза, переложив 10 микролитров из одного для разведения в два лунка, затем аккуратно перемешайте с помощью пипетки. Повторите процесс, хорошо переложив 10 микролитров образца из второго разведения в трех.
Повторив процесс для разведения четырех лунок, отбросьте из него 10 микролитров так, чтобы все лунки имели итоговый объем 40 микролитров. Добавьте 40 микролитров раствора чернил и буфер глицериновой системы в готовую пластину. Затем накройте пластину клейкой крышкой перед центрифугированием в течение 10 минут при 3000г при комнатной температуре.
Чтобы напечатать образцы на нитроцеллюлозной мембране, начните с многократной продувки печатающей головки и капилляров буфером глицериновой системы. Запустите пробный тираж, загрузив пластину только с буфером. Чтобы настроить прибор для печати непосредственно из буферного резервуара для очистки, нажмите «Файл», затем «Создать», затем выберите «Прогон печати».
Выберите тип микропланшета и измените настройки слайда в соответствии с ним. Затем измените настройки мини-массива перед редактированием настроек свойств точечной области. Нажмите на вкладку «Обзор», чтобы просмотреть номерной знак.
Наконец, на вкладке «Параметры» выберите «Использование буфера» и рассчитайте время печати перед выделением местоположений файлов для сохранения файла. После сохранения местоположения нажмите «Начать прогон», чтобы продолжить прогон. Во время печати извлеченных образцов гликана запрограммируйте систему, как и раньше.
На вкладке «Параметры» нажмите «Использование исходных микропланшетов». Наконец, сохраните уникальный файл сетки, созданный для напечатанного микрочипа, для последующего анализа. Определенные стандарты гликанов также были включены в печатные микрочипы в качестве положительного контроля.
Профиль связывания карты, полученный для выбранных стандартов гликанов, соответствует ранее сообщенной специфичности эпитопов.
