Дрозофила Диссекция и фиксация личинок для визуализации микротрубочек

Начните с выбора блуждающей личинки дрозофилы третьего возраста с помощью длинных тупых щипцов. Промойте личинку гемолимфовым солевым раствором, затем обсушите салфеткой. Далее расположите личинку дорсально или вентрально на чашке для вскрытия под стереомикроскопом.

В зависимости от ткани, которую необходимо исследовать, выбирайте дорсальную или вентральную диссекцию. Приколите крючки для рта и хвост личинки, чтобы сохранить вытянутое положение. Далее добавьте каплю гемолимфоподобного физиологического раствора, чтобы предотвратить высыхание личинки.

С помощью ножниц для рассечения сделайте небольшой поперечный разрез близко к заднему концу, не разрезая его полностью. Приступайте к разрезу по вентральной средней линии, двигаясь к переднему концу. Теперь вставьте по четыре булавки от насекомых в углы личинки.

Внесите необходимые коррективы в булавки от насекомых, чтобы максимально вытянуть личинку. Используйте щипцы для мягкого удаления внутренних органов, избегая при этом вреда для мышц. Чтобы закрепить личинку, погрузите тушки в 100 л 4%-ного параформальдегида, при этом еще приложив к тарелке для препарирования.

После этого демонтируйте штифты. Затем переложите образец в микроцентрифужную пробирку объемом 2 мл, заполненную 0,2% PBST. Поместите трубку в шейкер на 10 минут при 15 оборотах в минуту.