Посев CD34+ клеток в жидкостные чипы

Для начала центрифугируйте выделенные CD34-положительные клетки и ресуспендируйте клеточную гранулу в 300 микролитрах предварительно подогретой среды SFM-34 с добавлением смешанных 4 цитокинов, а затем подсчитайте клетки, используя 10 микролитров клеточной суспензии. После подсчета и ресуспендирования клеток в конечном объеме 150 мкл цитокина с добавлением SFM-34 добавьте в него 0,5 мкл ингибитора ROCK. Медленно отсасывайте ламинин из жидкостных чипов, поместив наконечник пипетки P200 внутрь резервуара на краю канала.

Затем равномерно добавляйте клеточную суспензию в канал, следя за тем, чтобы не образовывались пузырьки. Инкубируйте чип в течение ночи при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа, чтобы полностью прикрепить клетки к каналу. Когда эндотелиальные клетки полностью прикрепятся, сделайте аспирацию среды, как описано ранее.

Добавьте в чип 200 микролитров SFM-34, дополненного цитокином. Заменяйте среду ежедневно до тех пор, пока клетки не достигнут конфлюенции от 90 до 100%.