Для приготовления раствора биочернил смешайте соответствующее количество суспензии клеток C3A с стерилизованным раствором gelMA. Препятствуйте сфероидам клеток C3A двухмикромолярным раствором трекера при температуре 37 градусов в течение 20 минут. Чтобы промыть клетки, сначала удалите супернатин центрифугированием, а затем добавьте свежую среду для клеточной культуры.
Добавьте не менее двух миллилитров биочернил в стерилизованную акустическую камеру устройства. Включите генератор функций и усилитель мощности, чтобы инициировать срабатывание каждого преобразователя PZT для создания 3D-массива агрегатов ячеек. Сшивайте биочернила с помощью синего света в течение 30 секунд для создания 3D-гидрогелевых каркасов, инкапсулирующих собранные клеточные агрегаты акустически.
Далее аккуратно перенесите 3D гидрогелевый каркас из камеры в чашку Петри. Нарежьте его на мелкие кусочки с помощью чистой бритвы, а затем добавьте в чашку Петри клеточную культуральную среду. Инкубируйте сфероиды клеток C3A в различные моменты времени культивирования в одном миллилитре PBS, содержащем один микролитр кальция am и два микролитра йодида пропидия, в течение 15 минут при 37 градусах Цельсия.
Дважды промойте образец, заложенный в гидрогелевые каркасы, с помощью PBS. Для извлечения сфероидов выполните центрифугирование при 200 G в течение пяти минут и дважды промойте PBS. С помощью флуоресцентного микроскопа наблюдайте за сфероидами и делайте снимки.
Агрегаты ячеек располагались в виде регулярной 3D-матрицы точек с зеленым флуоресцентным сигналом. Собранные агрегаты C3A gelMA постепенно интегрировались и к третьему дню сформировали плотные сфероиды, что сопровождалось увеличением диаметра сфероида. Жизнеспособность сфероидов клеток оставалась хорошей до третьего дня, но несколько снизилась после недели культивирования.
Высвобожденные сфероиды сохраняли хорошую сферическую морфологию с узким распределением по размерам, а также желаемую жизнеспособность и экспрессию альбумина.
