Количественное измерение целостности эпителиального барьера и слияния 2D монослоя подвздошной кишки крупного рогатого скота

Для начала извлеките из инкубатора культуральную планшет Transwell, содержащую 2D-монослой бычьего подвздошно-подвздошного энтероида. Дайте планшету уравновеситься при комнатной температуре в шкафу биобезопасности в течение нескольких минут. Убедитесь, что электроды STX2 были предварительно подготовлены, а вольтметр откалиброван до 1000 Ом в соответствии с инструкциями производителя.

Введите более длинный конец зонда в базолатеральный отдел, а более короткий конец в апикальный отсек культуры эпителиальных клеток Transwell. Стабилизировав установку, сделайте три измерения трансэпителиального электрического сопротивления для каждой вставки Transwell, включая вставку без клеток. Вычислите среднее значение измерений для каждой соответствующей пластины.

Вычтите среднее значение заглушки лунки из экспериментального, затем умножьте его на площадь поверхности вставки, чтобы определить сопротивление эпителиального барьера. Конфлюидные 2D-монослои наблюдались менее чем за одну неделю культивирования. Измерения TEER показали устойчивый рост значений в течение семи дней, прежде чем снизиться на 12-й день.

Конфокальная микроскопия окрашенного 2D монослоя демонстрирует локализацию окрашивания ядерным DAPI, E-кадгерином и F-актином. Клетки, по-видимому, дифференцируются энтероэндокринными клетками, клетками Панета и клеточными линиями энтероцитов. Апикальная стимуляция монослоя приводила к увеличению продукции цитокинов.