Для начала поместите 200 только что вылупившихся взрослых дрозофил в пластиковую клетку в форме цилиндра. Запечатайте одну сторону клетки пористой металлической сеткой для вентиляции, а другую — тарелкой с фруктовым соком и дрожжевой пастой. В день инъекции замените тарелку с агаром клетки на тарелку с фруктовым соком, содержащую минимальное количество дрожжевой пасты.
Инкубируйте планшет при температуре 25 градусов Цельсия в течение одного часа, чтобы собрать эмбрионы. Затем выньте пластину из клетки, чтобы остановить яйцекладку, и инкубируйте при температуре 25 градусов Цельсия еще два часа, чтобы получить эмбрионы двух-трехчасового возраста. Чтобы удалить яичную скорлупу из эмбрионов, введите два миллилитра 50%-ного раствора хлорной извести в тарелку фруктового сока.
С помощью кисти аккуратно вытесните эмбрионы из планшета и инкубируйте планшет в течение двух минут, вращая его каждые 30 секунд, чтобы повысить эффективность удаления яичной скорлупы. Затем вылейте смесь зародыша и отбеливателя в 70-микрометровое нейлоновое ситечко. Тщательно промойте эмбрионы бутылкой с водой, чтобы удалить остатки отбеливателя и дрожжевой пасты.
Используя чистое бритвенное лезвие, отрежьте прямоугольный агарозный блок и поместите блок на предметное стекло. С помощью кисти перенесите эмбрионы из ситечка в гелевый блок и равномерно распределите их вдоль центральной линии блока, аккуратно поглаживая кистью. Теперь подготовьте пинцет с двумя ножками, надежно скрепленными друг с другом, чтобы образовалось одно острое острие.
Под препарирующим микроскопом выделите отдельные эмбрионы с помощью пинцета и выровняйте их по вытянутому краю гелевого блока. Пипетка 10 микролитров гептанового клея в середине покровного стекла размером 24 на 50 миллиметров. С помощью наконечника пипетки распределите клей по прямоугольному участку размером 0,5 на три сантиметра.
С помощью пинцета с плоским наконечником поднимите покрытую клеем крышку и устойчиво держите ее над эмбрионами, убедившись, что клеевая сторона обращена к эмбрионам примерно под углом 45 градусов. Аккуратно прижмите покровный слип к гелевому блоку, позволяя эмбрионам коснуться клея. Быстро сбросьте давление и поднимите защитную крышку.
Затем вылейте 10 микролитров воды в центр свежего предметного стекла. Положите на него крышку для эмбриона, убедившись, что зародыш стороной вверх. После этого нанесите 40 микролитров галокарбонового масла на один конец полоски эмбриона.
Наклоняйте слайд до тех пор, пока ореол углеродного масла не покроет поверхность эмбриона.
