Очищение тканей почек мышей для конфокальной микроскопии

Для начала поместите препарированные и фиксированные почки мыши в ПБС. Нарежьте почку на срезы толщиной в один миллиметр, используя матрицу мозга. Переведите ломтики в 4%-ный параформальдегид и зафиксируйте при температуре четыре градуса Цельсия на ночь.

Для микроскопии со световым листом зафиксируйте всю почку, погрузив ее в 4%-ную PFA и инкубируя при температуре четыре градуса Цельсия в течение 48 часов. Для очистки тканей соберите образцы почек в центрифужную пробирку объемом 50 миллилитров, а затем очистите их в кубическом L с встряхиванием при 60 оборотах в минуту при температуре 37 градусов по Цельсию. Периодически заменяйте кубический L до тех пор, пока не будет достигнута удовлетворительная оптическая прозрачность.

Промойте образцы три раза в ПБС при легком встряхивании при комнатной температуре в течение одного часа каждый. Затем нанесите кубический R на образцы и поместите их для встряхивания на шесть часов. Наблюдайте за очищенными образцами непосредственно или храните их в непрозрачных пробирках, наполненных кубическим R, при комнатной температуре в течение одной недели.