Метод окрашивания иммунных гранул с помощью обогащенного иммунного мозга мыши для количественного определения гистонов

Переложите обогащенную мозгом мыши иммунную гранулу из 15-миллилитровой пробирки в 96-луночную пластину с круглым дном. После центрифугирования планшета при 500 G в течение пяти минут удалите надосадочную жидкость щелчком. Повторно суспендируйте клетки в 100 микролитрах буфера FACS, затем перенесите по 10 микролитров из каждой лунки в контрольные лунки.

Центрифугируйте при 500 G в течение пяти минут. После удаления надосадочной жидкости из центрифугируемых ячеек добавьте 50 микролитров блока ФК двойной концентрации. Выдерживать 10 минут на льду.

Теперь добавьте 50 микролитров смеси антител в двойном размере от конечной желаемой концентрации и инкубируйте его на льду в темноте. Затем добавьте по 200 микролитров буфера FACS в каждую лунку и центрифугируйте при 500 G в течение пяти минут. Выбросьте надосадочную жидкость путем перелистывания, затем промойте клетки в 300 микролитрах буфера FACS.

Центрифугируйте и ресуспендируйте клетки в 200 микролитрах буфера FACS. Наконец, перенесите суспензию в проточную сортировочную трубку, содержащую 300 микролитров буфера FACS.