Проанализируйте панель антител, убедитесь, что цитометр имеет минимум четыре лазера, включая красный, желтый, синий и фиолетовый. Установите компенсационную матрицу с помощью компенсационных шариков или контрольных элементов с одной пятной. Чтобы откалибровать и стандартизировать, запускайте радужные флуоресцентные бусины в начале каждого эксперимента, регулируя напряжение фотоумножителя до тех пор, пока пики бусин не совпадут с целевыми значениями предыдущих экспериментов.
Установите напряжение и коэффициент усиления фотоумножителя для эксперимента. Затем используйте захваченные антителами компенсационные шарики для создания компенсационной матрицы. Затем построите график зависимости боковой площади рассеяния на бревне от прямой высоты рассеяния на линейном графике с помощью точечной диаграммы, удалите мусор и выберите размер ячейки с помощью элемента S1, выберите синглетные ячейки на точечной диаграмме ширины прямого рассеяния в зависимости от высоты прямого рассеяния с помощью элемента S2.
Для установки выходов на четвертый этаж используйте соответствующий FMO для каждого четвертого канала. С помощью одного параметра гистограммы определяют положительный сигнал в каждом канале и устанавливают соответствующие строи. Тщательно записывайте образцы, используя установленную стратегию литникового затвора.
Идентификация микроглии с помощью сигнала P2 RY 12 plus и определение экспрессии белка в соответствующем канале только для микроглии. Установите аналитические гейты в пользовательском интерфейсе программного обеспечения для анализа цитометра, воспроизводя ту же стратегию стробирования, которая использовалась во время записи. Используйте функцию добавления статистики для выбора медианы для интересующей популяции на высоте компенсированного канала.
Экспортируйте значения MFI для соответствующих каналов в таблицу с помощью редактора таблиц для дальнейшего статистического анализа. Лечение липополисахаридами индуцировало увеличение ацетилирования гистона-три-лизина 27. Когда MFI нормализуется в пределах пола, анализ гистограммы окрашенных клеток показывает нормально распределенные популяции со сдвигами клеток в сторону повышенной флуоресценции.
Аналогичное увеличение ацетилирования гистона-три-лизина 27 наблюдалось в окрашенных клетках.
