Подготовка, монтаж и визуализация личинок данио-рерио для исследований развития сердца

Для начала включите стереомикроскоп, чтобы записать развитие личинок данио-рерио в период от нуля до семи дней после оплодотворения. Приготовьте 0,8%-ную легкоплавкую агарозу со 150 миллиграммами на литр трикаина. После того, как агароза охладится до комнатной температуры, с помощью трансферной пипетки переместите обезболиванных рыбок данио в агарозу.

С помощью другой трансферной пипетки закрепите рыбу с агарозой в фторированной этиленпропиленовой трубке. Прикрепите пробирку с установленной личинкой данио-рерио к шестиосевому моторизованному световому микроскопу. Погрузите пробирку в камеру для образца, наполненную водой E3.

Поверните личинок данио-рерио с брюшной стороны для лучшей визуализации сердца. Подключите моторизованный предметный столик к рабочей станции. И настройте все необходимые параметры, включая нужный режим движения.

Установите соединение между КМОП-камерой и рабочей станцией. Установите размер шага в 1 микрометр, общее количество кадров — 300, а время экспозиции — 5 миллисекунд. Затем определите желаемую область интереса.

Включите лазер и запустите визуализацию личинок под световым микроскопом. Запишите 300 кадров в виде последовательности 2D-изображений, чтобы охватить от трех до пяти сердечных циклов личинок. Запишите еще одну последовательность изображений нового образца среза до тех пор, пока не будет покрыто все сердце.